一种二噁英类化合物的制备方法、纯化方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种二噁英类化合物的制备方法、纯化方法及应用。本发明专利技术公开的如式I所示的化合物的制备方法，包含下列步骤：（1）将土曲霉（Aspergillus terreus）孢子粉溶液接种至种子培养基中培养，得种子液；其中，土曲霉孢子粉溶液的添加量为0.5%～1.0%；（2）将所述的种子液接种至发酵培养基中培养7～10天，即得含有如式I所示的化合物的发酵液；其中，所述的种子液与发酵培养基的体积比为1:120～1:180。本发明专利技术的制备方法中的原料易得、制备周期短、工艺简单，并且更加绿色环保；且本发明专利技术制得的目标化合物收率高、纯度高；同时，该化合物对神经氨酸酶具有较强的抑制作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
神经氨酸酶(又称唾液酸酶，neuraminidase，NA)是分布于甲、乙型流感病毒被膜 上的一种糖蛋白。其可以通过裂解细胞表面流感病毒受体末端的唾液酸残基，使子代病毒 颗粒从感染细胞膜上释放，促进流感病毒在呼吸道扩散，因此，神经氨酸酶是抗流感病毒药 物研发的重要靶标。目前临床上使用的神经氨酸酶抑制剂主要有扎那米韦、奥司他韦和帕 拉米韦。扎那米韦的口服利用率较低，体内分布容积小，肾脏清除快，只能作为局部用药；奥 司他韦在使用过程中，临床上出现大量耐药病毒株；帕拉米韦仅在全球少数国家批准上市。 综上所述，设计合成或从化合物库中筛选出新型有效的神经氨酸酶抑制剂成为当前研究的 热点和难点。 目前，4H-1，3-二噁英-2, 4-二酮的制备方法主要是通过从阿魏蘑菇（Pleurotus eryngii var. ferulae)的子实体中提取得到，并且已有报道，该化合物具有抑制嗜中性粒 细胞弹性蛋白酶的作用。但是，上述制备方法中，阿魏蘑菇的来源比较局限，其仅产自新疆 地区。同时，该制备方法中制得的4H-1，3-二噁英-2, 4-二酮，收率较低，4千克的阿魏蘑菇 子实体仅能制备得到5mg的该化合物。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有的4H-1，3-二噁英-2, 4-二酮的制备 方法中，原料来源受限，目标化合物的收率低等缺陷，而提供了一种二噁英类化合物的制备 方法、纯化方法及应用。本专利技术的制备方法中的原料易得、制备周期短、工艺简单，并且更加 绿色环保；且本专利技术制得的目标化合物收率高、纯度高；同时，该化合物对神经氨酸酶具有 较强的抑制作用，其对于新型神经氨酸酶抑制剂类抗流感药物的设计和研究具有一定的指 导意义。 本专利技术提供了一种如式I所示的化合物的制备方法，其包含下列步骤：【主权项】1. 一种如式I所示的化合物的制备方法，其特征在于包含下列步骤：(1) 将土曲霉（Aspergillus terreus)孢子粉溶液接种至种子培养基中培养，得种子 液；其中，所述的土曲霉孢子粉溶液的添加量为〇. 5%~1. 0%，所述的百分比是指土曲霉孢 子粉溶液的体积占种子培养基体积的百分比； (2) 将所述的种子液接种至发酵培养基中培养7~10天，即得含有如式I所示的化合 物的发酵液；其中，所述的种子液与发酵培养基的体积比为1:120~1:180。2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)中，所述的土曲霉孢子粉溶液 为土曲霉孢子粉的甘油水溶液，其中，所述的甘油水溶液为质量百分比为40%的甘油水溶 液；所述的土曲霉孢子粉溶液中，甘油水溶液与土曲霉孢子粉的质量体积比为40mg/mL。3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)中，所述的的培养的方法和条 件为：于25°C~37°C的条件下，在转速为150~250rpm的摇床中震荡培养18~30小时； 所述的种子培养基包含：〇. 2%~1. 0%的酵母提取物、1. 0%~3. 0%的葡萄糖、0. 5%~1. 5% 的蛋白胨，其余量为水；所述的种子培养基的pH值为5. 0~6. 0。4. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)中，所述的培养的方法和条件 为：于28°C~37°C的条件下，在转速为150rpm~250rpm的摇床中震荡培养7~10天；所 述的发酵培养基包含：2. 0%~4. 0%的葡萄糖、1. 0%~3. 0%的硫酸铵、0. 5%~1. 5%的酵母 提取物、0. 1%~0. 2%的硫酸镁、0. 005%~0. 01%的硫酸亚铁，其余量为水；所述的发酵培养 基中的pH值为5.0~6.0。5. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的含有如式I所示的化合物的发酵 液，还进一步包含纯化的步骤；所述的纯化的步骤，其包含下列步骤： a. 将所述的含有如式I所示的化合物的发酵液，进行固液分离的操作后，收集液体；用 有机溶剂萃取后浓缩，得浓缩物A ; b. 采用制备液相色谱将所述的浓缩物A进行分离提纯收集甲醇浓度为0~30%的洗脱 液，浓缩，得浓缩物B;其中，分离提纯时的洗脱液为甲醇与水的混合液，洗脱方法为梯度洗 脱，所述的梯度洗脱为在30min内甲醇的浓度线性升至100%，所述的浓度为甲醇的体积与 混合液的体积比；所述的洗脱液的流速为3mL/min~5mL/min ; c. 采用硅胶柱层析将所述的浓缩物B进行分离提纯；即得如式I所示的化合物；其中， 洗脱液为氯仿和甲醇的混合液；所述的洗脱液中氯仿与甲醇的体积比为5:1~60:1。6. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤a中，所述的固液分离的方法为 采用离心的方法进行分离；其中，所述的离心的速度为3000rpm~5000rpm，所述的离心的 时间为0. 5~1小时；所述的有机溶剂为氯仿、乙酸乙酯和正丁醇中的一种或多种；所述 的浓缩为减压浓缩；所述的减压浓缩的温度为40°C~45°C ;所述的减压浓缩的真空度为 700mmHg ~800mmHg〇7. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，所述的混合液与所述的浓缩 物A的体积质量比为4L/g~5L/g ;所述的梯度洗脱为在30min内将甲醇浓度从0 - 10% - 20% - 30% - 40% - 50% - 60% - 70% - 80% - 90% - 100%的洗脱液进行洗脱；所述的洗脱液的流 速为4mL/min ;所述的浓缩为减压浓缩；所述的减压浓缩的温度为40°C~45°C;所述的减压 浓缩的真空度为700mmHg~800mmHg。8. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤c中，硅胶柱层析中所使用的硅胶 层析柱为正相硅胶层析柱或反相硅胶层析柱；所述的硅胶的装填量与所述的浓缩物B的质 量比为40:1~5:1 ;所述的洗脱液中氯仿与甲醇的体积比为30:1~10:1 ;所述的洗脱液的 流速为 5mL/min ~15mL/min〇9. 如权利要求5~8任一项所述的制备方法，其特征在于，所述的纯化的步骤，其还包 含下列步骤：采用凝胶柱层析将如式I所示的化合物进行进一步分离提纯，即得如式I所示 的化合物产品；其中，洗脱液为甲醇与水的混合液；所述的凝胶柱层析中的凝胶为羟丙基 葡聚糖凝胶；10. 如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述的凝胶柱层析中使用的凝胶层析 柱中凝胶的颗粒大小为18 ii m~111 ii m ;所述的凝胶的装填量与如式I所示的化合物的质 量比为80:1~240:1 ;所述的洗脱液中甲醇和水的体积比为0:100~10:90 ;所述的洗脱液 的流速为lmL/min~2mL/min〇11. 一种含有如式I所示的化合物的土曲霉发酵液的纯化方法，所述的纯化方法包含 下列步骤：a. 将含有如式I所示的化合物的发酵液，进行固液分离的操作后，收集液体；用有机溶 剂萃取后浓缩，得浓缩物A ; b. 采用制备液相色谱将所述的浓缩物A进行分离提纯收集甲醇浓度为0~30%的洗脱 液，浓缩，得浓缩物B;其中，分离提纯时的洗脱液为甲醇与水的混合液，洗脱方法为梯度洗 脱，所述的梯度洗脱为在30min内甲醇的浓度线性升至100%，所述的浓度为甲醇的体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种如式I所示的化合物的制备方法，其特征在于包含下列步骤：（1）将土曲霉（Aspergillus terreus）孢子粉溶液接种至种子培养基中培养，得种子液；其中，所述的土曲霉孢子粉溶液的添加量为0.5%～1.0%，所述的百分比是指土曲霉孢子粉溶液的体积占种子培养基体积的百分比；（2）将所述的种子液接种至发酵培养基中培养7～10天，即得含有如式I所示的化合物的发酵液；其中，所述的种子液与发酵培养基的体积比为1:120～1:180。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱宝泉，陈乙铨，林军，舒永志，胡海峰，周斌，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，中国医药工业研究总院，
类型：发明
国别省市：上海;31