一种靶向多功能双载药脂质体的制备方法和应用技术

本发明专利技术属于脂质体的制备及应用技术领域，具体公开了一种靶向多功能双载药脂质体的制备方法和应用。本发明专利技术的靶向多功能双载药脂质体的原料组成包括基本膜材磷脂、延长脂质体药物血液半衰期的聚乙二醇修饰的磷脂、可进行荧光成像的磷脂、具靶向作用的磷脂、治疗肿瘤的脂溶性药物和水溶性药物、可增强核磁成像信号的造影剂。上述药物通过脂质体的包裹很好地解决了水溶性差的药物的临床使用缺陷，且与水溶性药物组合后改变了传统化疗药物的给药方式，靶向作用于肿瘤组织，有效抑制肿瘤生长，同时减少副反应的产生；另外通过MRI可实时观测药物作用效果及肿瘤变化情况，具极大的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向多功能双载药脂质体的制备方法和应用
本专利技术涉及脂质体的制备及应用
，更具体涉及一种靶向多功能双载药脂质体的制备方法和应用。
技术介绍
由磷脂组成的脂质体与生物体细胞膜组成和结构相似，具有良好的生物相容性。脂质体包含一个磷脂双分子层和一个亲水核区，可携带水溶性及脂溶性物质，改善很多药物应用时的不足。作为药物载体，脂质体已被成功应用于各类药物的携载。包括多柔比星、组织蛋白酶抑制剂、伊立替康、长春瑞宾和欧苷菊、双氯酚酸钠等。铂类药物，包括顺铂、卡铂、奥沙利铂等，可与DNA结合并阻碍DNA复制及RNA翻译，进而促进肿瘤细胞死亡。常被用于各种癌症治疗。但铂类药物可引起很多副反应，如骨髓抑制，肾毒性等。紫杉醇和多西紫杉醇是一类应用广泛的抗癌药物。它们可以稳定细胞微管，抑制细胞有丝分裂，从而调控细胞生长。它们水溶性差，在使用时，往往要将其溶于氢化蓖麻油和甲醇。该制剂可引起很多副反应，比如过敏反应，肾毒性和神经毒性等。临床常联合使用紫杉醇类和铂类药物治疗非小细胞肺癌，由于其制剂本身无靶向性，且需较大剂量依次进行静脉注射，同时会引起很多副反应。因此发展一种低剂量且有效的双载药体系具有极大应用价值。
技术实现思路
针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是改善紫杉醇及铂类药物应用时的缺陷，改变其体内代谢途径，提供一种对肿瘤疗效好、副作用小、同时还可对肿瘤发展进行实时监测的靶向多功能双载药脂质体及其制备方法和应用。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种靶向多功能双载药脂质体，由以下原料制备而成：基本膜材磷脂、PEG修饰磷脂、靶向磷脂、脂溶性药物和水溶性药物；所述原料中，基本膜材磷脂：PEG修饰磷脂：靶向磷脂摩尔比＝9：1：0.5；所述原料中，基本膜材磷脂：脂溶性药物摩尔比＝(30-33)：1。所述原料中，基本膜材磷脂：水溶性药物摩尔比＝2：1。所述原料中，基本膜材磷脂为卵磷脂、氢化卵磷脂或人工合成卵磷脂中的一种或两种以上的任意比例混合物，其中，人工合成卵磷脂为二硬脂酰磷脂酰胆碱和二硬脂磷脂酰甘油组合磷脂；优选的，所述基本膜材为为二硬脂酰磷脂酰胆碱和二硬脂磷脂酰甘油组合磷脂，两者摩尔比为二硬脂酰磷脂酰胆碱：二硬脂酰磷脂酰甘油＝7:2。所述原料中，PEG修饰磷脂为甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。所述原料中，靶向磷脂是含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽修饰的磷脂或是其他具靶向作用基团修饰的磷脂。所述原料中，脂溶性药物为紫杉醇或多西紫杉醇。所述原料中，水溶性药物为顺铂、卡铂或奈达铂。优选的，所述脂溶性药物为紫杉醇，所述水溶性药物为卡铂。进一步，所述原料中还可包括荧光基团修饰磷脂和/或水溶性造影剂。当原料中含有荧光基团修饰磷脂时，基本膜材磷脂：PEG修饰磷脂：靶向磷脂：荧光基团修饰磷脂摩尔比＝9：1：0.5：0.2。当原料中含有水溶性造影剂时，基本膜材磷脂：水溶性造影剂＝1：5000。所述荧光基团修饰磷脂为诺丹明-双肉豆蔻磷脂酰乙醇胺(Rhod-DMPE)或其他荧光基团修饰磷脂。所述水溶性造影剂是T1或T2造影剂。其中，T1造影剂为钆特酸葡胺(Gd-DOTA)、钆喷酸葡胺(Gd-DTPA)、钆双胺(Gd-DTPA-BMA)；T2造影剂为氧化铁纳米粒子。一种所述靶向多功能双载药脂质体的制备方法，其步骤如下：(1)将基本膜材磷脂、PEG修饰磷脂、靶向磷脂、荧光基团修饰磷脂(原料中不含则不加)及脂溶性药物溶于有机溶剂中，用旋转蒸发仪真空干燥成脂质膜。所述有机溶剂选自氯仿或氯仿、甲醇、水的混合溶液，所述基本膜材磷脂与有机溶剂的质量体积比为(10-20)mg：1mL。(2)将水溶性药物及水溶性造影剂(原料中不含则不加)溶液加入到步骤(1)所得脂质膜中，75-85℃下超声10分钟，然后用孔径为0.22μm水系滤膜挤制10次，得到粒径130nm左右的大单室双载药脂质体溶液。所述水溶性药物溶液为将水溶性药物按照质量体积比(1-10)mg：1mL溶于水中而得；水溶性造影剂溶液为将水溶性造影剂按照质量体积比(20-50)mg：1mL溶于水中而得。(3)将步骤(2)所得溶液在2000rpm下离心10分钟除去未包裹的脂溶性药物，然后用截留分子量为10KD的透析袋透析该脂质体溶液4小时除去未包裹的水溶性药物并置换脂质体外液。所述透析过程中所用透析液为生理盐水、葡萄糖溶液或蔗糖溶液，其中，葡萄糖溶液浓度为1wt％-9wt％，蔗糖溶液浓度为1wt％-9wt％。(4)将步骤(3)所得透析袋内液体冷冻干燥24-48小时，得到靶向多功能双载药脂质体粉末。所得产品在使用时，直接将其溶于去离子水。本专利技术的其他一些特点是，水溶性药物除了卡铂外，还可以是其他一些水溶性药物，包括顺铂，奈达铂等；脂溶性药物除了紫杉醇外，也可以是多西紫杉醇等。脂溶性及水溶性药物的组合特点是没有严重配伍禁忌，可共同作用于某种肿瘤的治疗，且治疗效果优于单一药物的使用效果；或是临床常用组合。本专利技术中，由于使用了甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，可避免体内免疫系统对脂质体的清除作用，延长药物体内作用时间。加之纳米制剂本身具有的实体瘤的高通透性和滞留效应(EPR效应)，可进一步增强药物对肿瘤组织的作用效果，进而可减少药物使用剂量，减少副作用，提高药效。本专利技术中，靶向磷脂的使用可使脂质体在体内靶向作用于肿瘤组织。主要作用机制为靶向基团可与肿瘤细胞表面过表达的相应受体特异性识别，并通过受体介导的内吞作用使脂质体进入肿瘤细胞，进一步释放药物和造影剂，从而达到杀灭肿瘤细胞和同时进行核磁成像的目的。本专利技术提供的由上述方法制得的靶向多功能双载药脂质体不仅适合于非小细胞肺癌的诊断和治疗，也适合于其他固体肿瘤的诊断治疗及其诊断治疗试剂的设计。附图说明附图是用来对本专利技术的进一步理解，与下面的具体实施方式共同用于解释本专利技术，但并不构成对本专利技术的限制。附图中：图1是测试例1所得靶向多功能双载药脂质体的透射电镜图，其中标尺为200nm；图2是测试例1中靶向多功能双载药脂质体的粒径分析结果图；图3是测试例2中靶向多功能双载药脂质体处理A549、H1299和WI-38细胞后的激光共聚焦显微镜荧光图；图4是测试例3中靶向多功能双载药脂质体处理A549细胞后的结果；图5是测试例3中靶向多功能双载药脂质体处理H1299细胞后的结果；图6是测试例3中靶向多功能双载药脂质体处理WI-38细胞后的结果；图7是测试例4中靶向多功能双载药脂质体及生理盐水分别处理3只肺腺癌移植裸鼠后，其中靶向组和生理盐水组各一只肺腺癌移植裸鼠肿瘤T1加权成像变化结果；图8是测试例4中靶向多功能双载药脂质体及生理盐水处理肺腺癌移植裸鼠后肿瘤变化结果，其中靶向组和生理盐水组分别包括3只肿瘤裸鼠。具体实施方式为了更清楚地阐述本专利技术，以下申请人将依照本专利技术技术方案的实施例对本专利技术作更进一步的详细说明。在本专利技术技术方案的具体实施方式中，所采用的主要试剂及材料介绍如下：二硬脂酰磷脂酰胆碱1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine(DSPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(钠盐)1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoglycerolsodiumsalt(DSPG,Na本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种靶向多功能双载药脂质体，由以下原料制备而成：基本膜材磷脂、PEG修饰磷脂、靶向磷脂、脂溶性药物和水溶性药物； 所述原料中，基本膜材磷脂：PEG修饰磷脂：靶向磷脂摩尔比=9：1：0.5；所述原料中，基本膜材磷脂：脂溶性药物摩尔比=（30‑33）：1；所述原料中，基本膜材磷脂：水溶性药物摩尔比=2：1；所述原料中，基本膜材磷脂为卵磷脂、氢化卵磷脂或人工合成卵磷脂中的一种或两种以上的任意比例混合物；所述原料中，PEG修饰磷脂为甲氧基聚乙二醇2000‑二硬脂酰磷脂酰乙醇胺；所述原料中，靶向磷脂是含精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸（RGD）多肽修饰的磷脂或是其他具靶向作用基团修饰的磷脂；所述原料中，脂溶性药物为紫杉醇或多西紫杉醇；所述原料中，水溶性药物为顺铂、卡铂或奈达铂。

【技术特征摘要】
1.一种靶向多功能双载药脂质体，由以下原料制备而成：基本膜材磷脂、PEG修饰磷脂、靶向磷脂、脂溶性药物、水溶性药物、荧光基团修饰磷脂和水溶性造影剂；所述原料中，基本膜材磷脂：PEG修饰磷脂：靶向磷脂：荧光基团修饰磷脂摩尔比=9：1：0.5：0.2；所述原料中，基本膜材磷脂：水溶性造影剂摩尔比=1：5000；所述原料中，基本膜材磷脂：脂溶性药物摩尔比=（30-33）：1；所述原料中，基本膜材磷脂：水溶性药物摩尔比=2：1；所述原料中，基本膜材磷脂为人工合成卵磷脂；所述原料中，PEG修饰磷脂为甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺；所述原料中，靶向磷脂是含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）多肽修饰的磷脂或是其他具靶向作用基团修饰的磷脂；所述原料中，脂溶性药物为紫杉醇；所述原料中，水溶性药物为卡铂；所述人工合成卵磷脂为二硬脂酰磷脂酰胆碱和二硬脂磷脂酰甘油组合磷脂，两者摩尔比为二硬脂酰磷脂酰胆碱：二硬脂酰磷脂酰甘油=7:2；所述荧光基团修饰磷脂为诺丹明-双肉豆蔻磷脂酰乙醇胺；所述水溶性造影剂是钆双胺；所述的靶向多功能双载药脂质体的制备方法，其步骤如下：...

【专利技术属性】
技术研发人员：周欣，任莉莉，陈世桢，孙献平，刘买利，
申请(专利权)人：中国科学院武汉物理与数学研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42