一种人脂肪间充质干细胞冻存液制造技术

本发明专利技术涉及干细胞领域，公开了一种干细胞的冻存液，具体是公开了一种人脂肪间充质干细胞冻存液。本发明专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存液由人血浆和和二甲基亚砜组成。本发明专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存液不含有非人源的血清或蛋白质，避免了引入污染和过敏原的风险，与常规细胞冻存液相比具有更高的临床安全性。实验表明，与常规细胞冻存液相比，本发明专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存液，冻存细胞之后活率显著提高，并保持良好的干细胞特性，可以用于人脂肪干细胞的长期保存及应用。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及干细胞领域，公开了一种干细胞的冻存液，具体是公开了一种人脂肪间充质干细胞冻存液。本专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存液由人血浆和和二甲基亚砜组成。本专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存液不含有非人源的血清或蛋白质，避免了引入污染和过敏原的风险，与常规细胞冻存液相比具有更高的临床安全性。实验表明，与常规细胞冻存液相比，本专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存液，冻存细胞之后活率显著提高，并保持良好的干细胞特性，可以用于人脂肪干细胞的长期保存及应用。【专利说明】一种人脂肪间充质干细胞冻存液
本专利技术涉及干细胞领域，具体涉及干细胞的冻存液，尤其是人脂肪间充质干细胞 冻存液。
技术介绍
干细胞是一类具有自我复制能力（self-renewing)的多潜能细胞。在一定条件 下，它可以分化成多种功能细胞，医学界称为"万用细胞"。根据干细胞所处的发育阶段分 为胚胎干细胞（embryonicstemcell，ES细胞）和成体干细胞（somaticstemcell)。根 据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞（totipotentstemcell，TSC)、多能干细胞 (pluripotentstemcell)和单能干细胞（unipotentstemcell)(专能干细胞）。 脂肪间充质干细胞（AdiposeMesenchymalStemCells,ADSC)是存在于脂肪组织 的成体多潜能干细胞，在一定条件下可分化为骨、软骨、心肌、平滑肌、神经及内皮等多种组 织细胞。目前已发现间充质干细胞可以治疗包括人体神经系统、免疫系统、消化系统、运动 系统等系统的80多种疾病，间充质干细胞在人体抗:S老方面的研宄也已取得重大突破并 已进行应用尝试。有专家预测，间充质干细胞抗衰老技术的广泛应用，将使人类的寿命在 2050年普遍达到120岁以上。间充质干细胞作为重要的再生医学资源在疾病治疗和人体抗 衰老的应用领域有非常重要的使用价值。 干细胞具有潜在的医用价值以及应用价值，而细胞保存技术是实现这些潜在价值 的基础。干细胞储存是指将干细胞从不同的人体组织中分离培养出来后，再经过检测鉴定， 然后将保存，以便于在临床需要时可以将干细胞用于给病人回输，达到治疗疾病的目的。目 前常用的细胞保存方法有培养和冻存两种方式。其中培养保存，耗时耗力，程序繁琐，在培 养的过程中，特别是长期继代培养时，细胞容易发生变异，细胞特性丧失，失去保存的价值。 而细胞冻存即将细胞置于低温环境下保存，以使细胞暂时脱离生长状态，保存其细胞特性， 这样保存的成本较低，可以在需要时将细胞复苏培养，同时也避免了培养保存中因细胞污 染而导致的细胞损失。 细胞冻存液（或称为细胞冷冻保护剂）是细胞冻存时必须使用的一种溶液，它 可以供给细胞生命代谢所必须的营养物质，同时可以防止或减少冷冻冰晶对细胞的损伤 作用。目前常用的细胞冻存液或市售的细胞冻存液中通常是由胎牛血清（fetalbovine serum,FBS)以及二甲基亚砜（dimathylsulfoxide,DMSO)等物质组成的。但胎牛血清属于 异源性物质，成分复杂，并存在引入污染和过敏原的风险，不适合于临床应用。特别是在细 胞治疗中，异源性蛋白的存在，可能会引起不必要的，甚至是未知的不良反应，严重影响治 疗结果。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术目的在于针对现有技术存在的问题，提供一种临床安全性高，同 时又能很好保持冻存细胞活性的细胞冻存液，用于冻存人脂肪间充质干细胞。 为了实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案： 一种人脂肪间充质干细胞冻存液，由人血浆和二甲基亚砜组成。 在一些实施方案中，所述的人脂肪间充质干细胞冻存液中所述人血浆与二甲基亚 砜的体积比为9:1。 进一步的，在一些优选的实施方案中，所述的人脂肪间充质干细胞冻存液中所述 人血浆为人自体血浆。 人自体血浆是指由脂肪间充质干细胞存储者本人的静脉血制备成的血浆。本专利技术 采用人自体血浆与二甲基亚砜混合进行细胞冻存，一方面可以在一定程度上降低细胞冻存 的成本，另一方面可以避免异源性物质的引入，具有更高的临床安全性。 本专利技术还提供了一种冻存人脂肪间充质干细胞的方法，人脂肪间充质干细胞与上 述人脂肪间充质干细胞冻存液混合后超低温冻存。 在一些实施方案中，所述超低温冻存为-80°c超低温冰箱2?3d后转移至液氮中 保存。 在一些具体实施例中，分别采用常规的细胞冻存液（FBS+DMSO)和本专利技术所述人 脂肪间充质干细胞冻存液冻存人脂肪间充质干细胞，一个月后进行细胞复苏，检测细胞活 性和细胞状态。考察本专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存液对于人脂肪间充质干细胞的冻 存性能的影响。结果显示，与常规的细胞冻存液相比本专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存 液，在细胞冻存过程中对细胞损伤作用较小，细胞活率较高。采用本专利技术所述人脂肪间充质 干细胞冻存液冻存人脂肪间充质干细胞，复苏后细胞生长形态更接近冻存前脂肪间充质干 细胞的生长形态，复苏后细胞数量更接近冻存前脂肪间充质干细胞的细胞数量，且对细胞 表面标记物的表达没有影响 本专利技术还提供了一种人脂肪间充质干细胞的冻存试剂盒，包含上述人脂肪间充质 干细胞冻存液。 本专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存液由人血浆和和二甲基亚砜组成，不含有非 人源的血清或蛋白质，避免了引入污染和过敏原的风险，与常规细胞冻存液相比具有更高 的临床安全性。实验表明，与常规细胞冻存液相比，本专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存 液，冻存细胞之后活率显著提高，并保持良好的干细胞特性，可以用于人脂肪干细胞的长期 保存及应用。 【专利附图】【附图说明】 为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。 图1实施例5冻存前人脂肪间充质干细胞生长形态（培养三天）图，其中a放大 倍数为40倍，b放大倍数为100倍； 图2实施例5以本专利技术所述人脂肪间充质干细胞冻存液冻存细胞，复苏后的细胞 生长形态图，其中a、b为复苏后24h细胞生长形态图，c、d为复苏后48h细胞生长形态图， e、f?为复苏后72h细胞生长形态图，g、h为复苏后96h细胞生长形态图，i、j为复苏后120h 细胞生长形态图；a、c、e、g、i放大倍数为40倍，b、d、f、h、j放大倍数为100倍； 图3实施例5以常规细胞冻存液冻存细胞冻存细胞，复苏后的细胞生长形态图，其 中a、b为复苏后24h细胞生长形态图，c、d为复苏后48h细胞生长形态图，e、f?为复苏后 72h细胞生长形态图，g、h为复苏后96h细胞生长形态图，i、j为复苏后120h细胞生长形态 图；a、c、e、g、i放大倍数为40倍，b、d、f、h、j放大倍数为100倍； 图4实施例5不同冻存液冻存之后复苏的人脂肪间充质干细胞生长曲线，其中 示冻存前人脂肪间充质干细胞，-?-人脂肪间充质干细胞冻存液冻存细胞， 常规 细胞冻存液冻存细胞； 图5实施例5冻存前人脂肪干细胞各细胞表面标记物的检测结果图，其中a、b、c 为阴性对照图，d为样本细胞大小及复杂程度分布图，e为HLA-DR及⑶59表达情况本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人脂肪间充质干细胞冻存液，由人血浆和二甲基亚砜组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王一飞，陈海佳，葛啸虎，麦锦连，王小燕，马岩岩，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44