一种短小芽孢杆菌和免疫增强剂液体制剂制造技术

本发明专利技术涉及一种短小芽孢杆菌和免疫增强剂液体制剂，所述的液体制剂的有效成分由短小芽孢杆菌和免疫增强剂组成，所述的短小芽孢杆菌为保藏编号为CCTCC M 2013240的短小芽孢杆菌经液体发酵制成的发酵菌液，其中短小芽孢杆菌活菌数为109-1011cfu/g，所述的免疫增强剂为维生素C、黄芪、杜仲、党参、当归、金银花、柴胡、乌梅、石榴皮和五味子。本发明专利技术优点在于：能够显著提高鱼体抵抗嗜水气单胞菌的感染能力，增强养殖鱼类的机体免疫力，显著抑制鱼类肠道致病菌的生长，促进鱼体快速生长，提高养殖鱼类的增重率和抗病力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物领域，具体地说，是一种短小芽孢杆菌和免疫增强剂液体制剂。
技术介绍
细菌性疾病一直是困扰水产养殖业发展的重要原因之一。近年来，高密度集约化的生产模式在促进水产业提高产量的同时，也使得细菌疾病发生的机会增大、频率增加、危害加大；此外，抗生素使用导致的耐药性、药物残留以及对生态环境的破坏也成为社会关注的焦点。因此，寻找抗生素的替代药物、探索新的防治方式已经成为水产病害防治研究重要方向之一。群体感应(Quorum sensing，简称QS)是指细菌能自发产生并释放一些特定的信号分子，感知自身浓度的变化，进而调控相关基因的表达。目前，调节细菌群体感应的信号分子主要有三种，(a)N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)，是广泛存在于革兰氏阴性细菌中的群体感应的信号分子；(b)自体诱导肽(Autoinducing peptides，AIP)，AIP是一类短肽分子，是革兰氏阳性细菌中常见的信号分子；(c)自体诱导物Ⅱ类分子(Auto inducingⅡ，AI2)，是以费氏弧菌(Vibrio fischeri)为代表的由luxS酶催化的AI 2系统的信号分子。研究表明，在革兰氏阴性细菌中，如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)等，其生物被膜形成、有害毒素产生、致病因子释放等行为均受到AHLs类信号分子的调节。Dong(2000)等人在蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)中发现了aiiA基因，能够合成AHLs信号分子降解酶，阻断QS信号分子在细菌间的传递；尹守亮等(2009)从胶州湾海域筛选出一株能够降解AHLs信号分子的真菌，表明海洋微生物也可以作为QS抑制剂的潜在研究对象；Bhavanath等(2013)发现紫杉状海门冬(Asparagopsis taxiformis)的粗提物能够降解AHLs信号分子，并且对铜绿假单胞菌生物膜有一定的抑制作用。Defoirdt等(2011)首次从南美白对虾和海水鲈鱼等水产动物的肠道中分离出了能够抑制哈氏弧菌(Vibrio harveyi)QS信号分子传递的芽孢杆菌，Natrah等(2011)分离出一株能够抑制AHLs信号分子的微藻，该微藻能够阻断哈氏弧菌QS系统，降低其致病力。这些研究为探讨从群体感应角度防控水产细菌性疾病提供了理论依据和科学数据的支撑。芽孢杆菌(Bcaillus sp)具有易生产、便运输、耐储藏等特点，在水产养殖上可以起到净化水质、防治疾病和促进生长等作用，是常用的益生微生物菌株。中国专利文献CN103525723A公开了一种具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌，具有抑制细菌群体感应的作用，可用于制备防治水产细菌性病害的微生物制剂。但是关于一种具有显著防治水产细菌性病害、提高存活率的短小芽孢杆菌和免疫增强剂液体制剂目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种短小芽孢杆菌和免疫增强剂液体制剂。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：一种短小芽孢杆菌和免疫增强剂液体制剂，所述的液体制剂的有效成分由短小芽孢杆菌和免疫增强剂组成，所述的短小芽孢杆菌为保藏编号为CCTCC M 2013240的短小芽孢杆菌经液体发酵制成的发酵菌液，其中短小芽孢杆菌活菌数为109-1011cfu/g，所述的免疫增强剂为维生素C、黄芪、杜仲、党参、当归、金银花、柴胡、乌梅、石榴皮和五味子，所述的短小芽孢杆菌和免疫增强剂的重量份分别为：短小芽孢杆菌14-16份、维生素C 10-12份、黄芪7-8份、杜仲4-5份、党参2-4份、当归3-5份、金银花6-8份、柴胡9-10份、乌梅3-5份、石榴皮4-6份、五味子9-10份。优选的，所述的液体制剂中短小芽孢杆菌和免疫增强剂的重量份分别为：短小芽孢杆菌16份、维生素C 12份、黄芪8份、杜仲5份、党参4份、当归5份、金银花8份、柴胡10份、乌梅5份、石榴皮6份、五味子10份。优选的，所述的液体发酵培养基配方为：葡萄糖2％，豆饼粉8％，玉米浆1％，MgSO4·7H2O 0.02％，NaCl 0.4％，KH2PO40.1％，MnCl20.04％。优选的，所述的液体的制备方法为：将所述的短小芽孢杆菌经液体发酵制成发酵菌液，其中短小芽孢杆菌活菌数为109-1011cfu/g；将黄芪、杜仲、党参、当归、金银花、柴胡、乌梅、石榴皮、五味子，分别粉碎过100目筛后，加入10份水浸泡30min，然后加热至沸腾，微沸煎煮50-60min，共煎煮3次，每次加水量相同，合并3次药液过滤，将滤液用旋转蒸发器浓缩，使药液浓度为1000mg/mL左右，冷却至室温后加入所述的短小芽孢杆菌发酵菌液、维生素C，即得所述的液体制剂。优选的，所述的液体制剂作为水产饲料添加剂或水产养殖水体添加剂使用。优选的，所述的水产为淡水鱼类。优选的，所述的液体制剂在饲料中的添加量为1％-3％。本专利技术优点在于：本专利技术的液体制剂对鱼类的免疫保护率高达74-91％，能够显著提高鱼体抵抗嗜水气单胞菌的感染能力，增强养殖鱼类的机体免疫力，显著抑制鱼类肠道致病菌的生长，促进鱼体快速生长，提高养殖鱼类的增重率和抗病力。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明。本专利技术提供一种短小芽孢杆菌和免疫增强剂液体制剂，所述的液体制剂的有效成分由短小芽孢杆菌和免疫增强剂组成，所述的短小芽孢杆菌为保藏编号为CCTCC M 2013240的短小芽孢杆菌经液体发酵制成的发酵菌液，其中短小芽孢杆菌活菌数为109-1011cfu/g，所述的免疫增强剂为维生素C、黄芪、杜仲、党参、当归、金银花、柴胡、乌梅、石榴皮和五味子，所述的短小芽孢杆菌和免疫增强剂的重量份分别为：短小芽孢杆菌14-16份、维生素C 10-12份、黄芪7-8份、杜仲4-5份、党参2-4份、当归3-5份、金银花6-8份、柴胡9-10份、乌梅3-5份、石榴皮4-6份、五味子9-10份。所述的短小芽孢杆菌(Baillus pumilus)，保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：武汉大学生命科学院保藏中心，保藏日期2013年6月2日，保藏编号为CCTCC NO：M 2013240。已证实其具有群体感应系统抑制作用。实施例1短小芽孢杆菌液体发酵将短小芽抱杆菌菌株按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培养，斜面培养基为常规营养琼脂培养基，液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种短小芽孢杆菌和免疫增强剂液体制剂，其特征在于，所述的液体制剂的有效成分由短小芽孢杆菌和免疫增强剂组成，所述的短小芽孢杆菌为保藏编号为CCTCC M 2013240的短小芽孢杆菌经液体发酵制成的发酵菌液，其中短小芽孢杆菌活菌数为109‑1011cfu/g，所述的免疫增强剂为维生素C、黄芪、杜仲、党参、当归、金银花、柴胡、乌梅、石榴皮和五味子，所述的短小芽孢杆菌和免疫增强剂的重量份分别为：短小芽孢杆菌14‑16份、维生素C 10‑12份、黄芪7‑8份、杜仲4‑5份、党参2‑4份、当归3‑5份、金银花6‑8份、柴胡9‑10份、乌梅3‑5份、石榴皮4‑6份、五味子9‑10份。

【技术特征摘要】
1.一种短小芽孢杆菌和免疫增强剂液体制剂，其特征在于，所述的液体制
剂的有效成分由短小芽孢杆菌和免疫增强剂组成，所述的短小芽孢杆菌为保藏
编号为CCTCC M 2013240的短小芽孢杆菌经液体发酵制成的发酵菌液，其中
短小芽孢杆菌活菌数为109-1011cfu/g，所述的免疫增强剂为维生素C、黄芪、
杜仲、党参、当归、金银花、柴胡、乌梅、石榴皮和五味子，所述的短小芽孢
杆菌和免疫增强剂的重量份分别为：短小芽孢杆菌14-16份、维生素C 10-12
份、黄芪7-8份、杜仲4-5份、党参2-4份、当归3-5份、金银花6-8份、柴胡
9-10份、乌梅3-5份、石榴皮4-6份、五味子9-10份。
2.根据权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，所述的液体制剂中短小
芽孢杆菌和免疫增强剂的重量份分别为：短小芽孢杆菌16份、维生素C 12份、
黄芪8份、杜仲5份、党参4份、当归5份、金银花8份、柴胡10份、乌梅5
份、石榴皮6份、五味子10份。
3.根据权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，所述的液体发酵培养基
配方为：葡萄糖2％，...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋增福，许维素，
申请(专利权)人：苏州埃瑞特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32