本发明专利技术提供了一种新型噬菌体保存保护剂以及该新型噬菌体保存保护剂的制备和应用方法。其中本发明专利技术所述的新型噬菌体保存保护剂，脱脂乳、硅藻土、牛血清白蛋白、麦芽糖糊精等形成整个保存保护剂的骨架，还包含多种糖类和盐，组分合理，原料来源广，易于获得，成本低，并且可以用于多种噬菌体的保存，适应性好。本发明专利技术所述的新型噬菌体保存保护剂的制备方法，方法合理，工艺简单易行，效率高，应用成本低，操作简单、易于实现。新型噬菌体保存保护剂具有极高的应用前景，并且使用方便，应用便捷。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术和微生物制品领域，具体地，涉及一种新型噬菌体保存保护剂，以及该新型噬菌体保存保护剂的制备方法和应用方法。
技术介绍
噬菌体是一类能感染细菌、放线菌、螺旋体等微生物的病毒的总称，对一些细菌具有高度的专一性，当噬菌体侵染这些细菌时，可在细菌中繁殖并杀死细菌，而它对动植物没有毒性。随着分子生物学技术的发展，噬菌体已经广泛用于疾病诊断、水处理等多个领域。由于噬菌体可以将基因插入宿主DNA内的特性，使得它还成为了重要的分子和遗传学研究工具。利用噬菌体，可以设计很多精巧的实验。然而在上述过程中，都需要对噬菌体进行保存，在噬菌体的保存过程中，往往需要加入保存保护剂从而保证噬菌体的活性。现有技术中的保护剂常常保存效果差，噬菌体的保存时间短，存活率低，噬菌体容易被污染，并且必须在低温条件下进行保存，严重制约了对噬菌体应用的发展。
技术实现思路
专利技术目的：为了克服以上不足，本专利技术提供了一种新型噬菌体保存保护剂以及该新型噬菌体保存保护剂的制备和应用方法。技术方案：本专利技术提供了一种新型噬菌体保存保护剂，以重量组分计，包括以下组分：脱脂乳6-18份硅藻土0.3-0.8份糖醇2-5份DEAE-葡聚糖0.8-1.5份阿拉伯胶0.01-0.16份牛血清白蛋白0.7-1.2份麦芽糖糊精0.05-0.3份蜂蜜0.01-0.08份棉子糖0.8-1.6份磷酸铝0.03-0.06份氯化钠0.01-0.04份硫酸镁0.3-0.7份氯化钙0.6-1.2份甘油1-3份阿拉西A 0.05-0.12份水100份。本专利技术所述的新型噬菌体保存保护剂，其组分合理，其中脱脂乳、硅藻土、牛血清白蛋白、麦芽糖糊精等形成整个保存保护剂的骨架，防止低分子物质的碳化和氧化，同时保护活性物质不受温度影响，使保护剂形成多孔性、疏松的海绵状物且具有一定的含水量，在冻存过程中保持原有的构架，从而增加溶解度。此外，多种糖类和盐使噬菌体保持存活状态以及对水分起缓解作用，并且保持电解质浓度。噬菌
体保存保护剂可以使噬菌体低温保存下免受溶液损伤和冰晶损伤等物理因素的损伤，并且维持噬菌体极高的存活率和活性，使噬菌体的活动处于半静止或静止状态。此外，保护剂同溶液中的水分子结合，发生水合作用，弱化水的结晶过程使溶液的粘性增加从而减少冰晶的形成，同时冷冻保护剂可以通过在噬菌体内外维持一定的摩尔浓度，降低内外未结冰溶液中电解质的浓度，使细胞免受溶质的损伤。此外，保护剂还可以在室温条件下用于多种噬菌体的保存，适应性好。进一步的，上述的新型噬菌体保存保护剂，以重量组分计，还包括0.01-0.08份的防腐剂，所述防腐剂为尼泊金乙酯或苯甲酸钠或山梨酸钾。加入防腐剂可以使整个新型噬菌体保存保护剂的使用时间更长，且可以有效防止污染，防腐剂的选择多，适应性好。进一步的，上述的新型噬菌体保存保护剂，所述脱脂乳为5％蔗糖脱脂乳。作为一种优选，选择5％蔗糖脱脂乳，保存效果好。进一步的，上述的新型噬菌体保存保护剂，所述糖醇为木糖醇或山梨醇或麦芽糖醇的一种。糖醇的原料来源广，适应性好。进一步的，上述的新型噬菌体保存保护剂，所述甘油为20％-40％的甘油。20％-40％的甘油流动性好，易于应用。进一步的，上述的新型噬菌体保存保护剂，所述的水为去离子水或纯化水。去离子水或纯化水可以保证新型噬菌体保存保护剂质量稳定、可控。本专利技术还提供一种新型噬菌体保存保护剂的制备方法，包括以下步骤：1)将脱脂乳、硅藻土、糖醇、DEAE-葡聚糖、阿拉伯胶、棉子糖、磷酸铝、和氯化钠加入到1/2重量的水中，升温到20-30℃，磁力搅拌混匀后备用；2)将牛血清白蛋白、麦芽糖糊精、蜂蜜、硫酸镁和氯化钙加入到1/4重量的水中，磁力搅拌混匀后备用；3)将步骤1)和2)得到的溶液混合，磁力搅拌均匀后备用；4)向混合步骤3)的溶液中再滴加甘油和阿拉西A，磁力搅拌20-30min；5)调节步骤4)得到的溶液的pH到5.5-7.5后于115-121℃加热灭菌20-30min；6)将防腐剂溶于1/4的水中，磁力搅拌混匀后通过0.22-0.45μm的滤膜；7)将步骤6)的滤液于无菌环境下加入到步骤5)的灭菌液中后混匀，得所述新型噬菌体保存保护剂。本专利技术所述的新型噬菌体保存保护剂的制备方法，工艺简单易行，效率高，应用成本低，操作简单、易于实现，应用方便。进一步的，上述的新型噬菌体保存保护剂的制备方法，所述搅拌速度为50-200r/min。条件温和，易于实现。进一步的，上述的新型噬菌体保存保护剂的制备方法，使用稀盐酸和/或氢氧化钠调节溶液pH。原料来源广，调节十分方便，并且应用成本低。本专利技术还提供一种新型噬菌体保存保护剂的应用方法，所述新型
噬菌体保存保护剂应用时，噬菌体液与新型噬菌体保存保护剂按照1：1-2.5的体积比混合均匀，于室温保存或者真空冷冻干燥后2-7℃进行冻存。新型噬菌体保存保护剂使用方便，可以用于多种不同的噬菌体冻存的使用，适应性好，可以于室温或者冷藏保存，对环境温度要求低，并非要求必须低温才能保存，即便在15-25℃的室温条件下也可以进行噬菌体的保存，可以用于多种情况下的保存，具有极高的应用前景。有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术所述的新型噬菌体保存保护剂，其组分合理，原料来源广，易于获得，成本低，可以维持噬菌体极高的存活率和活性，并且适应性好。本专利技术所述的新型噬菌体保存保护剂的制备方法，方法合理，工艺简单易行，效率高，应用成本低，操作简单、易于实现。具有极高的应用前景，对保存温度要求低，并且使用方便，可以用于多种情况下的保存，应用便捷。附图说明图1为本专利技术所述使用实施例1-4新型噬菌体保存保护剂的噬菌体存活率图。具体实施方式下面将通过几个具体实施例，进一步阐明本专利技术，这些实施例只是为了说明问题，并不是一种限制。实施例1一种新型噬菌体保存保护剂，以重量组分计，包括以下组分：5％蔗糖脱脂乳6份硅藻土0.3份木糖醇2份DEAE-葡聚糖0.8份阿拉伯胶0.01份牛血清白蛋白0.7份麦芽糖糊精0.05份蜂蜜0.01份棉子糖0.8份磷酸铝0.03份氯化钠0.01份硫酸镁0.3份氯化钙0.6份20％甘油1份阿拉西A 0.05份防腐剂尼泊金乙酯0.01份去离子水100份。上述新型噬菌体保存保护剂的制备方法，包括以下步骤：1)将5％蔗糖脱脂乳、硅藻土、木糖醇、DEAE-葡聚糖、阿拉伯胶、棉子糖、磷酸铝、和氯化钠加入到1/2重量的水中，升温到20℃，50r/min的搅拌速度下磁力搅拌混匀后备用；2)将牛血清白蛋白、麦芽糖糊精、蜂蜜、硫酸镁和氯化钙加入
到1/4重量的水中，50r/min的搅拌速度下磁力搅拌混匀后备用；3)将步骤1)和2)得到的溶液混合，50r/min的搅拌速度下磁力搅拌均匀后备用；4)向混合步骤3)的溶液中再滴加甘油和阿拉西A，50r/min的搅拌速度下磁力搅拌20min；5)使用稀盐酸和/或氢氧化钠调节步骤4)得到的溶液的pH到5.5后于115℃加热灭菌20min；6)将防腐剂尼泊金乙酯溶于1/4的水中，50r/min的搅拌速度下磁力搅拌混匀后通过0.22μm的滤膜；7)将步骤6)的滤液于无菌环境下加入到步骤5)的灭菌液中后混匀，得所述新型噬菌体保本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种新型噬菌体保存保护剂，其特征在于：以重量组分计，包括以下组分：脱脂乳6‑18份硅藻土 0.3‑0.8份糖醇2‑5份DEAE‑葡聚糖 0.8‑1.5份阿拉伯胶 0.01‑0.16份牛血清白蛋白 0.7‑1.2份麦芽糖糊精 0.05‑0.3份蜂蜜 0.01‑0.08份棉子糖 0.8‑1.6份磷酸铝 0.03‑0.06份氯化钠 0.01‑0.04份硫酸镁 0.3‑0.7份氯化钙 0.6‑1.2份甘油 1‑3份阿拉西A 0.05‑0.12份水 100份。
【技术特征摘要】
1.一种新型噬菌体保存保护剂，其特征在于：以重量组分计，包括以下组分：脱脂乳6-18份硅藻土 0.3-0.8份糖醇2-5份DEAE-葡聚糖 0.8-1.5份阿拉伯胶 0.01-0.16份牛血清白蛋白 0.7-1.2份麦芽糖糊精 0.05-0.3份蜂蜜 0.01-0.08份棉子糖 0.8-1.6份磷酸铝 0.03-0.06份氯化钠 0.01-0.04份硫酸镁 0.3-0.7份氯化钙 0.6-1.2份甘油 1-3份阿拉西A 0.05-0.12份水 100份。2.根据权利要求1所述的新型噬菌体保存保护剂，其特征在于：以重量组分计，还包括0.01-0.08份的防腐剂，所述防腐剂为尼泊金乙酯或苯甲酸钠或山梨酸钾。3.根据权利要求1所述的新型噬菌体保存保护剂，其特征在于：所述脱脂乳为5%蔗糖脱脂乳。4.根据权利要求1所述的新型噬菌体保存保护剂，其特征在于：所述糖醇为木糖醇或山梨醇或麦芽糖醇的一种。5.根据权利要求1所述的新型噬菌体保存保护剂，其特征在于：所述甘油为20%-40%的甘油。6.根据权利要求1所述的新型噬菌体保存保护剂，其特征在于：所述的水为去离子水或纯化水。7.根据权利2所述的新型噬菌体保存保护剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1）将脱脂乳...
【专利技术属性】
技术研发人员：许维素，宋增福，陈彪，
申请(专利权)人：苏州埃瑞特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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