【技术实现步骤摘要】
一种C反应蛋白定量测定试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及医疗器械生物类免疫体外诊断领域,具体涉及一种基于磁微粒分离化 学发光法定量检测血液中C反应蛋白的试剂盒及其制备方法,以及应用该试剂盒定量检测 血液中C反应蛋白的方法。
技术介绍
血清CRP水平是指示细菌感染的一项敏感而客观的指标。细菌感染时,血清CRP 的水平可以中度或明显升高,阳性率可达90%以上;而病毒等感染时CRP水平多正常或轻 度升高,因此可以帮助细菌感染与非细菌感染的鉴别诊断。此外,定量测定脑脊液、胸腔积 液中的CRP水平亦可以对脑膜炎、胸膜炎的鉴别诊断有一定意义;不仅如此,CRP水平还与 感染范围和感染严重程度有一定关系。另外,血清CRP水平还可以用来预测感染性疾病的 严重程度、住院时间的长短、预后及复发。CRP还可以反映动脉粥样硬化斑块的成分并预测 斑块破裂的可能性,是心血管疾病的独立预测因子。冠心病、急性冠脉综合征患者CRP往往 明显升高,如心肌梗死患者中血清CRP可以急剧上升,其升高水平与冠状动脉梗阻程度、冠 心病终末事件的发生及预后、充血性心力衰竭的程度等均有显著相关性。目前,CRP已经成 为健康人及冠脉疾病患者心血管疾病风险的预测因子之一,也是监测疾病治疗效果的指标 之一。 在国内,C反应蛋白(CRP)检测临床上主要以国外进口试剂和免疫组化试剂应用 为主,国外进口试剂价格非常昂贵,给患者带来很大的经济负担,不利于在基层普及。具有 自主知识产权的国产C反应蛋白(CRP)免疫化学发光检测试剂盒目前还较少,也仅停留在 96孔微孔板式技术水平上。该技术灵敏 ...
【技术保护点】
一种C反应蛋白定量测定试剂盒,其特征在于:该试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物;所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制成,所述发光底物是将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制成。
【技术特征摘要】
1. 一种C反应蛋白定量测定试剂盒,其特征在于:该试剂盒包括校准品、质控品、抗试 齐IJ、磁微粒试剂和发光底物;所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联 制成,所述发光底物是将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制成。2. 根据权利要求1所述的C反应蛋白定量测定试剂盒,其特征在于:该试剂盒还包括 清洗液,所述清洗液的配置方法将12. 12g的Tris、5. 82g的氯化钠、50mL的Tween-20、50mL 的曲拉通-100,加入1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解。3. 如权利要求1所述的一种C反应蛋白定量测定试剂盒的制备方法,其特征在于:分 别配制C反应蛋白校准品、C反应蛋白质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物;将C反应蛋 白校准品、C反应蛋白质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物独立地置于包装容器内,得到 C反应蛋白的定量测定试剂盒。4. 根据权利要求3所述的C反应蛋白定量测定试剂盒的制备方法,其特征在于:所述 校准品、质控品、抗试剂按照如下方法制备而成: A、 校准品、质控品的配制: 用校准品缓冲液溶解C反应蛋白,配置C反应蛋白校准品和C反应蛋白质控品;其中, 所述校准品缓冲液是通过在1L新生牛血清中加入0. Olg?0. 05g的四环素和0. lg?0. 5g 的硫酸新霉素,完全溶解后经过〇. 22 y m滤膜处理制备而成; B、 抗试剂的配制: 1) 抗试剂缓冲液的制备: 将12. 12mg?60. 57mg的Tris、0. Olg?0? 05g的四环素、lg?5g的绵羊血清、3g? l〇g的新生牛血清、lg?5g的马血清加入1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,制得抗试剂 缓冲液; 2) 将异硫氰酸荧光素标记的C反应蛋白包被抗体和碱性磷酸酶标记的C反应蛋白标记 抗体加入到所述抗试剂缓冲液中充分搅拌至完全溶解。5. 根据权利要求3所述的C反应蛋白定量测定试剂盒的制备方法,其特征在于所述抗 试剂是按照以下步骤制备: 1) 异硫氰酸荧光素与C反应蛋白抗体偶联,获得异硫氰酸荧光素标记的C反应蛋白包 被抗体: 首先用抗试剂缓冲液将异硫氰酸突光素配制成浓度为1. 〇?5. Omg/mL的异硫氰酸突 光素溶液,然后按照质量比为C反应蛋白:异硫氰酸荧光素溶液=1:1. 1的二者转移到棕色 玻璃瓶里,室温下搅拌1?2小时;充分反应后使用pH为8?9的碳酸氢盐缓冲液平衡,然 后使用凝胶层析分离纯化得到异硫氰酸荧光素标记的C反应蛋白包被抗体; 2) 碱性磷酸酶与C反应蛋白抗体偶联,获得碱性磷酸酶标记的C反应蛋白标记抗体: 首先用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1. 〇?5. Omg/mL的碱性磷酸酶溶液, 按照摩尔比为碱性磷酸酶:C反应蛋白=1:2?1:10的二者转移至棕色玻璃瓶中,室温下 搅拌4?5小时,充分反应后使用pH为8?9的碳酸氢盐缓冲液平衡,然后使用凝胶层析 分离纯化得到碱性磷酸酶标记的C反应蛋白标记抗体; 3) 将步骤1)中获得的异硫氰酸荧光素标记...
【专利技术属性】
技术研发人员:郭志刚,龚爱华,
申请(专利权)人:南方医科大学南方医院,广州华亘朗博药业有限公司,
类型:发明
国别省市:广东;44
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