本发明专利技术公开了人热休克蛋白gp96在制备筛查肝病的产品中的应用。本发明专利技术公开检测人热休克蛋白gp96含量的物质在制备筛查或辅助诊断疾病的产品或辅助判断疾病的预后的产品中的应用。本发明专利技术证明人热休克蛋白可以作为一种新的肝硬化、肝癌标志物。本发明专利技术公开的试剂盒对于肝硬化、肝癌的早期筛查、预防、治疗和治疗后监测具有重大意义。
【技术实现步骤摘要】
人热休克蛋白gp96在制备筛查肝病的产品中的应用
本专利技术涉及人热休克蛋白gp96在制备筛查肝病的产品中的应用，属于生物医学 领域。
技术介绍
热休克蛋白gp96,即GRP94 (glucose-regulatedprotein94)，是存在于真核生物 细胞内质网中分子量约为96kDa的热休克蛋白。它属于HSP90家族，是胞质HSP90的旁系 同源蛋白，约占细胞总蛋白的1%。在正常的生理条件下，gp96定位于细胞内质网中，也存 在细胞的质膜上。gp96N端的21个疏水性氨基酸的信号肽介导gp96分子进入内质网，在内 质网中在蛋白酶的作用下将信号肽被切除，gp96分子通过C端的KDEL序列与内质网膜上 的KDEL受体相互作用使gp96分子滞留于内质网中，在内质网中被加工。gp96在进化过程 中是高度保守，成熟的gp96蛋白由四个结构域组成：N端结构域，含有ATP结合区及结合抗 原肽的区域；带电铰链区，是gp96发挥活性必需的，具有调节gp96构象的改变，带电铰链区 又可以分为E/D-密集序列和多聚赖氨酸重复序列，E/D-密集序列含有1-2个钙离子结合 位点；中间结构域，含有参与蛋白-蛋白互作用的亮氨酸拉链区和KEKE区；C端结构域，含 有二聚体区，还有与内质网上受体结合的KEDL序列。 肝硬化是临床常见的慢性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性 肝损害。在我国大多数由肝炎转变肝硬化，少部分为酒精和血吸虫导致肝硬化。早期肝硬 化肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多 系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发 症而死亡。因此，迫切需要找到新的标志物作为早期肝硬化的检测指标。 原发性肝细胞癌（Hepatocellularcarcinoma,HCC，简称肝癌），在全世界范围内 发病率排在第六位，每年全世界的发病人数是62. 6万，我国每年死于肝癌约11万人，占全 世界肝癌死亡人数的45%。相对于高死亡率，早期肝癌的发现比例却非常低。近年来，虽然 针对肝癌的治疗手段不断更新（包括手术切除、肝移植术、放射治疗、介入治疗、微创消融 治疗等），但肝癌治疗的总体疗效并无明显提高，复发和转移仍然是影响肝癌预后的最主要 因素。目前肝硬化、肝癌的检测主要通过影像学、组织活检等，血清学检测的灵敏度和特异 性不高，多数患者一旦确诊即为肝硬化或肝癌的晚期，失去了最佳的治疗时期。因此，急需 挖掘对肝硬化、肝癌早期筛查的分子标志物和简便易行的检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供人热休克蛋白gp96在制备筛查肝病的产品中的应用。 本专利技术提供检测人热休克蛋白gp96含量的物质在制备筛查或辅助诊断疾病的产 品或辅助判断疾病的预后的产品中的应用； 所述人热休克蛋白gp96的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。 上述应用中，所述检测人热休克蛋白gp96含量的物质包含人热休克蛋白gp96和 /或人热休克蛋白gp96的抗体； 所述人热休克蛋白gp96的抗体具体为人热休克蛋白gp96的单克隆抗体、人热休 克蛋白gp96的多克隆抗体或人热休克蛋白gp96的基因工程抗体。 上述任一所述的应用中，所述检测人热休克蛋白gp96含量的物质还包含通过酶 联免疫吸附法测定人热休克蛋白gp96含量所需的试剂中除人热休克蛋白gp96和人热休克 蛋白gp96的抗体之外的试剂和所需的仪器。 上述任一所述的应用中，所述酶联免疫吸附测定法为ELISA双抗体夹心法； 所述ELISA双抗体夹心法中人热休克蛋白gp96的抗体具体为人热休克蛋白gp96 的单链抗体和/或人热休克蛋白gp96的多克隆抗体和/或标记的抗所述人热休克蛋白 gp96的多克隆抗体的二抗； 所述标记的抗所述人热休克蛋白gp96的多克隆抗体的二抗具体为酶标记的抗所 述人热休克蛋白gp96的多克隆抗体的二抗； 所述酶标记的抗所述人热休克蛋白gp96的多克隆抗体的二抗的酶可以催化底物 显色； 所述人热休克蛋白gp96的单链抗体具体为gp96-scFv_comp抗体，该抗体的序列 如SEQIDNo.1所示，该抗体能特异性结合人热休克蛋白gp96的N端； 所述人热休克蛋白gp96的多克隆抗体具体的商品名称为山羊多克隆抗体，该抗 体购自SantaCruzBiotech，产品目录号为SC-1794,该抗体特异性结合于人热休克蛋白 gp96的C端； 所述酶标记的抗所述人热休克蛋白gp96的多克隆抗体的二抗具体的商品名称为 兔抗山羊二抗-HRP，该二抗购自SantaCruzBiotech，产品目录号为SC-2922。 含有人热休克蛋白gp96编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌作 为制备人热休克蛋白gp96所需的生物材料在制备筛查或辅助诊断疾病的产品或辅助判断 疾病的预后的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围； 所述人热休克蛋白gp96的氨基酸序列如SEQIDNo. 2所示。 上述应用中，所述人热休克蛋白gp96的编码基因为如下1)-3)任一所示： 1)SEQIDNo. 3 所示的DNA分子； 2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码人热休克蛋白gp96的DNA分 子； 3)与1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码人热休克蛋白gp96 的DNA分子。 含有人热休克蛋白gp96的抗体的编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或 重组菌或人热休克蛋白gp96的抗体的免疫原或抗原作为制备人热休克蛋白gp96的抗体所 需的生物材料在制备筛查或辅助诊断疾病的产品或辅助判断疾病的预后的产品中的应用 也属于本专利技术的保护范围； 所述人热休克蛋白gp96的抗体为人热休克蛋白gp96的单克隆抗体或人热休克蛋 白gp96的多克隆抗体或人热休克蛋白gp96的基因工程抗体； 所述人热休克蛋白gp96的氨基酸序列如SEQIDNo. 2所示。 上述任一所述的应用中，所述疾病为肝硬化或肝癌。 -种筛查或辅助诊断疾病或辅助判断疾病的预后的试剂盒也属于本专利技术的保护 范围，该试剂盒包含检测人热休克蛋白gp96含量的物质； 所述人热休克蛋白gp96的氨基酸序列如SEQIDNo. 2所示。 上述试剂盒中，所述检测人热休克蛋白gp96含量的物质包含人热休克蛋白gp96 和/或人热休克蛋白gp96的抗体； 所述人热休克蛋白gp96的抗体为人热休克蛋白gp96的单克隆抗体或人热休克蛋 白gp96的多克隆抗体或人热休克蛋白gp96的基因工程抗体。 上述任一所述的试剂盒中，所述疾病为肝硬化或肝癌； 所述试剂盒还包含使用说明书，说明书中记载如以下1)和/或2)和/或3)所示 的内容： 1)以待测患者的血清为检测对象，如果待检血清中人热休克蛋白gp96含量 < 70ng/mL，该待测患者候选为非肝硬化患者或非肝癌患者；如果待检血清中人热休克蛋 白gp96含量彡220ng/mL并且<800ng/mL,该待测患者候选为肝硬化患者；如果待检血清中 人热休克蛋白gp96含量彡500ng本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测人热休克蛋白gp96含量的物质在制备筛查或辅助诊断疾病的产品或辅助判断疾病的预后的产品中的应用。
【技术特征摘要】
1. 检测人热休克蛋白gp96含量的物质在制备筛查或辅助诊断疾病的产品或辅助判断 疾病的预后的产品中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测人热休克蛋白gp96含量的物质 包含人热休克蛋白gp96和/或人热休克蛋白gp96的抗体。3. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述检测人热休克蛋白gp96含量的 物质还包含通过酶联免疫吸附法测定人热休克蛋白gp96含量所需的试剂中除人热休克蛋 白gp96和人热休克蛋白gp96的抗体之外的试剂和所需的仪器。4. 含有人热休克蛋白gp96编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌作为 制备人热休克蛋白gp96所需的生物材料在制备筛查或辅助诊断疾病的产品或辅助判断疾 病的预后的产品中的应用。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述人热休克蛋白gp96的编码基因为如 下1)-3)任一所示： 1. SEQ ID No. 3所示的DNA分子； 2) 在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码人热休克蛋白gp96的DNA分子； 3) 与1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码人热休克蛋白gp96的 DNA分子。6. 含有人热休克蛋白gp96的抗体的编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重 组菌或人热休克蛋白gp96的抗体的免疫原或抗原作为制备人热休克蛋白gp96的抗体所需 的生物材料在制备筛查或辅助诊断疾病的产品或辅助判断疾病的预后的产品中的应用。7. 根据权利要求1-6任一所述的应用，其特征在于：所述疾病为肝硬化或肝癌。8. -种筛查或辅助诊断疾病或辅助判断疾病的预后的试剂盒，该试剂盒包含检测人热 休克蛋白gp96含量的物质。9. 根据权利要求8所述的试剂盒，...
【专利技术属性】
技术研发人员：孟颂东，桂明明，赵报，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。