牙龈蛋白酶抑制前肽制造技术

本发明专利技术涉及抑制、降低或阻止蛋白酶活性的化合物、肽或拟肽，以及这些化合物、肽或拟肽用于治疗或预防病症的用途。特别地，所述病症可以是牙周疾病。所述蛋白酶活性可以是牙龈蛋白酶的活性。本发明专利技术的化合物、肽或拟肽还可在用于鉴定蛋白酶抑制剂的测定中使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及抑制、降低或阻止蛋白酶活性的化合物、肽或拟肽，以及这些化合物、肽或拟肽用于治疗或预防病症的用途。特别地，所述病症可以是牙周疾病。所述蛋白酶活性可以是牙龈蛋白酶的活性。本专利技术的化合物、肽或拟肽还可在用于鉴定蛋白酶抑制剂的测定中使用。【专利说明】牙龈蛋白酶抑制前肽
本专利技术涉及抑制、降低或阻止蛋白酶活性的化合物、肽或拟肽（peptidomimetic) 以及这些化合物、肽或拟肽用于治疗或预防病症的用途。特别地，所述病症可以是牙周疾 病。所述蛋白酶活性可以是牙龈蛋白酶（gingipain)的活性。本专利技术的化合物、肽或拟肽 还可在用于鉴定蛋白酶抑制剂的测定中使用。
技术介绍
牙周疾病是牙支持组织的细菌相关炎性疾病并且是重大的公共卫生问题。几乎所 有的人类群体都在一定程度上受到牙周疾病的影响。1989年的美国牙健康调查（US Dental Health survey)报道了 85%的受研究人群有牙周疾病。牙周疾病的主要形式是牙銀炎，其 与牙菌斑在牙龈边缘的非特异性积累相关。牙周疾病（牙周炎）的更具破坏性的形式与被 特定革兰氏阴性菌龈下感染有关。参与这种疾病的主要细菌病原体被称为"红色复合物"， 其由福赛坦氏菌（Tannerella forsythia)、齿銀卩卜啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis) 和齿垢密螺旋体（Treponema denticola)构成。齿銀P卜啉单胞菌（P. gingivalis)是慢性 牙周炎的主要发病原因。 齿龈卟啉单胞菌的主要毒力因子是其胞外的半胱氨酸蛋白酶，统称为牙龈蛋白 酶。最常见的是RgpA和RgpB(Arg-牙銀蛋白酶）和Kgp(Lys-牙銀蛋白酶）。Arg-牙銀蛋 白酶在Arg残基的羧基侧切割蛋白质并且Lys-牙銀蛋白酶在Lys残基的羧基侧切割蛋白 质。 这些细胞表面半胱氨酸蛋白酶被认为对于降解蛋白质以提供用于生长以及用于 存活和毒力之其他内在和外在功能的肽是重要的。用于存活和毒力的这些功能中的数个可 以是细菌附着宿主组织、血细胞凝集以及细菌细胞表面和分泌蛋白的加工。RgpA和Kgp的 催化结构域可以作为复合物结合在细胞表面上，具有一系列非共价结合序列相关的血凝素 /黏附素结构域，而RgpB已经显示不作为蛋白酶黏附素复合物的一部分存在并且可以仅由 催化结构域组成。 像其他的半胱氨酸蛋白酶一样，牙龈蛋白酶作为无活性形式合成，在N端具有前 肽（prop印tide)区，其被移除以产生成熟的、活性形式。牙龈蛋白酶高度保守，并且成熟的 酶和前肽二者的氨基酸序列都揭示它们仅与其他半胱氨酸蛋白酶关系较远地相关。 需要更好的或替换的参与多种疾病（特别是牙周疾病）之发病机理的细菌酶抑制 剂。 本说明书中参考的任何现有技术不是也不应当被视为承认或任何形式的建议该 现有技术构成了澳大利亚或任何其他司法管辖区的公知常识，或者该现有技术可以由本领 域技术人员合理地预料为确定、理解和视为相关。 专利技术概述 根据本专利技术，提供了用于抑制、降低或阻止细菌酶之活性的化合物、肽或拟肽，所 述化合物、肽或拟肽包含牙龈蛋白酶前肽或其片段的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述 酶可以是胞外蛋白酶。优选地，所述胞外蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶，更优选为牙龈蛋白酶。 所述蛋白酶可以是来自于齿銀卩卜啉单胞菌之菌株的RgpA、RgpB或Kgp。 在某些实施方案中，所述化合物、肽或拟肽是包含选自SEQ ID NO :1至10之氨基 酸序列的肽或拟肽（图1中示出）。 在另一些实施方案中，所述肽或拟肽包含与SEQ ID N0 :1至10中示出的那些旁系 同源或直系同源的序列。 在另一些实施方案中，所述肽或拟肽包含以上氨基酸序列中的保守替换。这些替 换在下文中进一步描述。本专利技术的肽可以是分离的、纯化的、富集的、合成的或重组的。 本专利技术的肽或拟肽包括分离的、纯化的或重组的前肽或其片段之氨基酸序列，因 为当是同源牙龈蛋白酶的一部分时其可天然存在。在另一些实施方案中，本专利技术的肽或拟 肽可以包括合成的前肽或其片段之氨基酸序列，任选地具有翻译后修饰。 在一些特定的实施方案中，肽或拟肽由选自包含SEQ ID N0 :1至10中任一种的氨 基酸序列组成或基本上由其组成。 在另一些实施方案中，本专利技术的肽或前肽包含氨基酸序列，其与选自SEQ ID No :1 至 28 的氨基酸序列具有至少 60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100%的同一 性。优选地，选自SEQ ID No :1至10,甚至更优选地选自SEQ ID No :1至3。 在另一些实施方案中，本专利技术的肽或拟肽由与选自SEQ ID No :1至28的氨基酸 序列具有至少60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%同一性的氨基酸序列 组成或基本上由其组成。在这些实施方案中，化合物、肽或拟肽包含SEQ ID N0 :1至28以 及"基本上由" SEQ ID N0:1至28 "组成"的另外的氨基酸残基，只要其表现出可以根据下 文中描述的测定确定的用于抑制、降低或阻止细菌酶之活性的活性即可。类似地，"基本上 由" SEQ ID N0 :1至28中一种"组成"的化合物、肽或拟肽，这种情况下其短于对应的SEQ ID，只要其表现出可以根据以下描述的测定确定的用于抑制、降低或阻止细菌酶之活性的 活性即可。因此，这些实施方案不包括全长牙龈蛋白酶序列。优选地，本专利技术的化合物、肽 或拟肽由与选自SEQ ID No :1至10的氨基酸序列具有至少60、70、80、90、91、92、93、94、95、 96、97、98、99或100 %同一性的氨基酸序列组成或基本上由其组成。甚至更优选地由SEQ ID No :1至3组成。 本专利技术的"化合物"是通过本文中所述的测定鉴定作为抑制剂的化合物。化合物可 以是蛋白质（例如抗体或其片段或拟抗体（antibody mimetic))、肽、核酸（包括RNA、DNA、 反义寡核苷酸、肽核酸）、碳水化合物、有机化合物、小分子、天然产物、文库提取物或来自体 液。 在一些实施方案中，本专利技术的化合物、肽或拟肽的氨基酸长度为约10至约300。在 另一些实施方案中，长度为约20至205或者约50至约210。在另一些实施方案中，长度为 约100至约200个氨基酸。 齿龈卟啉单胞菌是革兰氏阴性菌的一个实例，其已经演变为在富含蛋白质的厌氧 条件下生长。最近，存在于富含蛋白质的、厌氧的或更极端条件中的数种其他细菌和古细菌 (archaea)的基因组已经被测序；这些物种中的一些仍必须在体外生长。这些基因组研究 已经提供了证据表明与牙龈蛋白酶具有序列相似性以及与牙龈蛋白酶之前肽具有显著序 列相似性的蛋白质。除了在食烯经脱硫杆菌（Desulfatibacillum alkenivorans)AK_01的 情况下，如对前肽预期的，在前肽的N端区域中发现了与牙龈蛋白酶前肽的显著序列相似 性。 这些细菌包括：Candidatus Cloacamonas acidaminovo本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于抑制、降低或阻止细菌酶之活性的肽或拟肽，该化合物、肽或拟肽基本上由选自SEQ ID NO：1至28的氨基酸序列及其中的保守替换组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯图尔特·杰弗里·达斯弗，埃里克·查尔斯·雷诺兹，努尔贾汉·莱拉·哈克，埃琳娜·周·因·杜，
申请(专利权)人：口腔健康澳洲私人有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU