酶解贻贝蛋白制备降血压肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种酶解贻贝蛋白制备降血压肽的方法，包括以下步骤：１）以脱脂干贻贝粉或贻贝蛋白粉作为原料与水混合，然后调节ｐＨ值至９．０～９．５；得混合液；２）将混合液温度升至６０～６５℃预热，然后加入碱性蛋白酶进行酶解反应，酶解温度为６０～６５℃，酶解时间为１８０～２４０分钟；３）将步骤２）所得的酶解产物先经灭酶处理，得酶解液；酶解液依次经超滤、冷冻干燥和层析，得降血压肽。采用本发明专利技术方法制备而得的降血压肽具有活性较强的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，具体涉及生物制药技术或功能性食品加工技术， 尤其是一种。
技术介绍
血管紧张素转化酶(ACE)在人体的血压调节中起着重要的作用人体循环或局部 组织中的ACE活性过高，就会使血管紧张素II生成量增加，同时，舒缓激肽的量大大减少， 直接导致血压升高。因此，通过抑制体内ACE的活性可以起到降低血压的效果。目前，ACE抑制剂已经成为治疗高血压的一线药物，与合成的ACE抑制剂相比较， 通过酶解食源性蛋白质获得的ACE抑制活性肽具有很多优点一是安全性极高，具有ACE 抑制活性的肽均是以食源性蛋白质为原料，采用食用级蛋白酶水解制备获得的，无毒性；二 是无副作用，多种ACE抑制肽的动物试验及临床检验结果显示，没有观察到其具有副作用； 三是制备条件温和，易于控制，容易进行工业化生产，成本低，原料来源广；四是降压效果专 一，研究表明食源性ACE抑制肽只对高血压患者具有降压作用，而对正常血压者的血压无 影响；五是易于消化吸收；因此，选择适当的蛋白酶体外水解蛋白质，就有可能按照工业化 规模制备出具有ACE抑制活性的活性肽，从而研究和开发出具有降血压活性的活性肽类食PΡΠ O有研究表明，人们已经成功地从大豆蛋白、玉米蛋白、鱼肉蛋白、文蛤、牡蛎、藻类、 蘑菇中获得了 ACE抑制肽。但这些原料或蛋白质含量偏低，导致降血压肽的得率较低，或是 为人们的鲜活食物，成本较高。于规等(于规、杨瑞金、王璋等的《牡蛎功能短肽的制备及ACE抑制活性》[J].无锡 轻工业大学学报，2004，23 (3) =50-52.)利用碱性蛋白酶水解牡蛎，并通过S印hadex G-15 凝胶层析柱分离纯化，从而制备有ACE抑制活性的功能短肽。张绵松(张绵松《酶法制备文 蛤ACE抑制肽的研究》[D].江南大学硕士学位论文，2008)优化了中性蛋白酶与碱性蛋白酶 复合酶解文蛤制备ACE抑制肽的工艺条件，同时探讨了超滤对ACE抑制活性的影响。而贻贝作为我国主要的养殖贝类，养殖产量极大。但是我国所产的贻贝大部分以 鲜销为主，少数加工成冻品和方便食品，其余制成干制品或作为饲料。因此，与其它的海产 食品相比较而言，贻贝的加工利用率极低，从而造成了贻贝资源的极大浪费，而且限制了我 国贻贝产业的进一步发展。因此，开发利用贻贝蛋白资源具有重要的意义和广阔的前景。我国对于贻贝ACE抑制肽的研究基本处于空白阶段，对于实际可行的酶解工艺及 分离纯化过程尚没有报道。为了能工业化制备降血压肽，既要考虑降血压活性，还要考虑产 品得率，生产成本的经济性等。而目前已知的以文蛤、牡蛎为原料制备ACE抑制肽的方法并 不适用于以贻贝为原料来制备降血压肽(原因是所得ACE抑制肽的活性低)。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种利用Alcalase碱性蛋白酶制备贻贝降血压肽的方法，该方法条件温和、操作简单、原料来源丰富、价格低廉，制备的降血压肽活性较 强。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种，包 括以下步骤1)、以脱脂干贻贝粉或贻贝蛋白粉作为原料，将原料与水按照1 15 25的重量 比混合，然后调节pH值至9. 0 9. 5 (最佳pH值为9. 1 9. 3)；得混合液；2)、将混合液温度升至60 65°C预热，然后加入碱性蛋白酶(Alcalase)进行酶 解反应，碱性蛋白酶的重量是原料的1. 0% 1. 5 %，酶解温度为60 65°C，酶解时间为 180 240分钟；3)、将步骤2)所得的酶解产物先经灭酶处理，得酶解液；所述酶解液依次经超滤、 冷冻干燥和层析，得降血压肽。作为本专利技术的的改进步骤2)中于搅拌状态 下预热的时间为20 25分钟。作为本专利技术的的进一步改进步骤3)的灭酶 处理为将步骤2)所得的酶解产物升温至90 100°C并于此温度保持8 10分钟，再冷 却至0 20°C以终止酶反应，然后离心，得酶解液。作为本专利技术的的进一步改进步骤3)的超滤为所述酶解液于0. 1 0. 15MPa的工作压力和25 45°C的工作 温度下采用超滤膜进行超滤处理，得超滤酶解液；超滤酶解液进行冷冻干燥，得超滤酶解物干粉；将超滤酶解物干粉进行层析，得降血压肽。作为本专利技术的的进一步改进步骤3)中所用 超滤膜截留分子量为IOK道尔顿(KDa)。作为本专利技术的的进一步改进步骤3)的层析 为将超滤酶解物干粉溶解后上S印hadex G-IO或G_15凝胶层析柱，收集所得的高活 性的小分子肽组分经冷冻干燥，得贻贝降血压肽。作为本专利技术的的进一步改进碱性蛋白酶的酶 活力为彡9.4X104U/g。作为本专利技术的的进一步改进脱脂干贻贝粉的 制备方法如下将新鲜贻贝用水清洗干净后，脱壳去足丝，勻浆后冷冻干燥得贻贝粉，将贻贝粉采 用体积浓度95%的乙醇溶液脱脂，真空干燥后得脱脂干贻贝粉(蛋白重量含量> 60% )。作为本专利技术的的进一步改进贻贝为紫贻贝或 厚壳贻贝。在本专利技术中，脱脂干贻贝粉或贻贝蛋白粉(蛋白重量含量> 70% )可通过市购的 方式获得，也可自行制备而得。本专利技术考虑到贻贝蛋白的组成特点，选择碱性蛋白酶作为制备降血压肽的酶解用酶，实验结果表明，碱性蛋白酶酶解所得的酶解液具有最强的ACE抑制活性，且得率很高。 通过超滤及凝胶层析可以有效富集酶解物中的ACE抑制肽。本专利技术的，具有如下优点1.本专利技术所制备的降血压肽是脱脂干贻贝粉或贻贝蛋白粉经酶水解制得，安全、 无毒副作用。所得降血压肽具有显著的抑制ACE活性的作用，对高血压患者具有降压作用， 对血压正常者具有保健和预防作用。2.本专利技术采用的原料是脱脂干贻贝粉或贻贝蛋白粉，可以从海洋的低值贻贝、也 可以从贻贝的加工废弃物中制备而得；因此具有来源丰富，价格低廉的特点，经过本专利技术的 技术转化可以有效提高贻贝的附加值，对贻贝产业的可持续发展具有重要的意义。3.本专利技术是一种生物酶法，易通过对酶解过程的监控，使ACE抑制肽最大程度地 释放出来，提高原料的利用率。4.本专利技术的产品可以作为药品、保健食品、食品、食品添加剂等，工艺科学合理，操 作简单，具有较强的工业实施性。采用本专利技术方法制备而得的降血压肽的实际用法和用量同目前现有的ACE抑制 肽。较之现有的制备方法，本专利技术同时融合了酶解、超滤以及凝胶层析三种手段，方法 更加完善，而且得到的降血压肽活性更高。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。图1是紫贻贝降血压肽S印hadex G-IO凝胶层析谱图(实施例1)；图2是厚壳贻贝降血压肽S印hadex G-IO凝胶层析谱图(实施例2)；图3是紫贻贝降血压肽S印hadex G-IO凝胶层析谱图(实施例3)；图4是紫贻贝降血压肽S印hadex G-15凝胶层析谱图(实施例4)；图5是厚壳贻贝降血压肽S印hadex G_15凝胶层析谱图(对比例1)。具体实施例方式下面利用实施例对本专利技术作进一步说明实施例1、一种，依次进行以下步骤1)、制备脱脂干贻贝粉将新鲜紫贻贝用水清洗干净后，脱壳去足丝，打浆机勻浆至糊状后，冷冻干燥 (-50°C，72小时)，得贻贝粉。将贻贝粉在40°C条件下，按Ig 4ml的比例加入体积浓 度95%的乙醇溶液脱脂4h，重复三次；将上述脱脂处理后的贻贝粉于40°C真空干燥(5小 时)，粉碎并过100目筛，得水分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酶解贻贝蛋白制备降血压肽的方法，其特征是包括以下步骤：　　１）、以脱脂干贻贝粉或贻贝蛋白粉作为原料，将原料与水按照１∶１５～２５的重量比混合，然后调节ｐＨ值至９．０～９．５；得混合液；　　２）、将混合液温度升至６０～６５℃预热，然后加入碱性蛋白酶进行酶解反应，所述碱性蛋白酶的重量是原料的１．０％～１．５％，酶解温度为６０～６５℃，酶解时间为１８０～２４０分钟；　　３）、将步骤２）所得的酶解产物先经灭酶处理，得酶解液；所述酶解液依次经超滤、冷冻干燥和层析，得降血压肽。

【技术特征摘要】
一种酶解贻贝蛋白制备降血压肽的方法，其特征是包括以下步骤1)、以脱脂干贻贝粉或贻贝蛋白粉作为原料，将原料与水按照1∶15～25的重量比混合，然后调节pH值至9.0～9.5；得混合液；2)、将混合液温度升至60～65℃预热，然后加入碱性蛋白酶进行酶解反应，所述碱性蛋白酶的重量是原料的1.0％～1.5％，酶解温度为60～65℃，酶解时间为180～240分钟；3)、将步骤2)所得的酶解产物先经灭酶处理，得酶解液；所述酶解液依次经超滤、冷冻干燥和层析，得降血压肽。2.根据权利要求1所述的酶解贻贝蛋白制备降血压肽的方法，其特征是所述步骤2) 中于搅拌状态下预热20 25分钟。3.根据权利要求1或2所述的酶解贻贝蛋白制备降血压肽的方法，其特征是所述步 骤3)的灭酶处理为将步骤2)所得的酶解产物升温至90 100°C并于此温度保持8 10分钟，再冷却至 0 20°C以终止酶反应，然后离心，得酶解液。4.根据权利要求3所述的酶解贻贝蛋白制备降血压肽的方法，其特征是所述步骤3)的超滤为所述酶解液于0. 1 0. 15MPa的工作压力和...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴志远，张艳萍，张婷，张燕平，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]