microRNA-491-3p在拮抗p-糖蛋白（MDR1）介导的肿瘤耐药中的应用制造技术

本发明专利技术公开了microRNA-491-3p(miR-491-3p)在制备用于拮抗p-糖蛋白（MDR1）介导的肿瘤耐药的药物中的用途以及一种用于治疗肿瘤的药物组合物。本发明专利技术中，microRNA-491-3p能够下调MDR1蛋白表达，特别是，能够增加化疗药物的细胞毒性。

【技术实现步骤摘要】
microRNA-491-3p在拮抗p-糖蛋白（MDR1）介导的肿瘤耐药中的应用
本专利技术涉及microRNA在拮抗肿瘤耐药中的用途，更具体而言，涉及microRNA-491-3p(miR-491-3p)在制备用于拮抗p-糖蛋白（MDR1）介导的肿瘤耐药的药物中的用途。此外，本专利技术还涉及一种用于治疗肿瘤的药物组合物以及一种预防和/或治疗p-糖蛋白（MDR1）介导的肿瘤耐药的方法。
技术介绍
化疗是目前临床上治疗恶性肿瘤的最重要手段之一。然而，由于肿瘤细胞常常会对化疗药物产生耐药而导致患者对治疗不再敏感，最终导致化疗失败甚至疾病复发。近年来，科学家们针对肿瘤耐药机制开展了大量的研究工作，研究结果表明，肿瘤耐药与药物摄取减少，排出增多，活化减少，失活增加，DNA损伤修复增加，DNA甲基化以及信号传导通路异常等多种机制相关。在肿瘤耐药机制中，外排性药物转运体是抗肿瘤药物在肿瘤细胞中排出增多的主要因素。这一类药物转运体主要包括以多药耐药基因（Multidrugresistancegene1,MDR1），又名p-糖蛋白（p-glycoprotein,p-gp），为代表的ABC药物转运体。ABC药物转运体（ATPbindingcassette,ABC）是一组ATP能量依赖性跨膜转运蛋白，位于细胞膜以及内质网、过氧化物酶体、线粒体等细胞器膜上，介导内源性物质、药物以及环境毒物的外向排出。ABC药物转运体是一个超家族蛋白，现已发现48个异构成员，按照基因同源性被归类为A、B、C、D、E、F和G7个家族。其它比较重要的ABC药物转运体是MRP1（多药耐药蛋白1（MultidrugResistanceProtein1））与BCRP（乳腺癌抗癌性蛋白（BreastCancerResistanceProtein））。以MDR1为靶点，开发研究下调MDR1蛋白表达的药物对拮抗肿瘤耐药具有重要的意义。微小RNA(microRNA,miRNA)是细胞内源产生调节基因蛋白表达的小分子非编码RNA，其调节的效应通常是抑制基因表达。MicroRNA（miRNA）调节机体内若干基因的表达，它们参与细胞增殖、分化、凋亡和代谢等几乎所有生命过程，在心血管疾病、神经系统疾病、造血系统疾病、糖尿病及各种肿瘤的病理过程中也发挥重要作用。已知miRNA的靶位点大多位于mRNA的3’-非翻译区（3’-untranslatedregion,3’-UTR），功能性的单链（maturemiRNA，成熟miRNA）被整合到RNA诱导沉默复合体（RNA-inducedsilencingcomplex,RISC）中，与靶mRNA结合，通过mRNA剪切、mRNA去腺苷或抑制翻译等方式在转录后水平抑制基因表达。这种调节方式依赖于miRNA种子区序列（2～7nt）与靶mRNA3’-非翻译区序列的互补配对。
技术实现思路
本专利技术人经过实验验证，发现了一种能够下调MDR1蛋白表达的microRNA，特别是，该microRNA能够增加化疗药物的细胞毒性。因此，本专利技术的一个目的是提供microRNA-491-3p在制备用于拮抗p-糖蛋白（MDR1）介导的肿瘤耐药的药物中的用途。本专利技术的另一个目的是提供一种用于治疗肿瘤的药物组合物，其包含：（a）治疗有效量的化疗药物；和（b）治疗有效量的microRNA-491-3p。本专利技术的又一个目的是提供一种预防和/或治疗p-糖蛋白（MDR1）介导的肿瘤耐药的方法。根据本专利技术的一个方面，提供了microRNA-491-3p在制备用于拮抗p-糖蛋白（MDR1）介导的肿瘤耐药的药物中的用途。本专利技术中，所述microRNA-491-3p的核苷酸序列如下：5’-CUUAUGCAAGAUUCCCUUCUAC-3’（SEQIDNO:1）。本专利技术中，所述microRNA-491-3p能够下调MDR1蛋白表达，特别是，所述microRNA-491-3p能够增加化疗药物（例如，多柔比星）的细胞毒性。本专利技术中，所述化疗药物，指的是对病原微生物、寄生虫、某些自身免疫性疾病、恶性肿瘤所致疾病的治疗药物。化疗药物可杀灭肿瘤细胞，这些药物能作用在肿瘤细胞生长繁殖的不同环节上，抑制或杀死肿瘤细胞。众所周知，化疗药物治疗是目前治疗肿瘤的主要手段之一。本专利技术中，所述化疗药物可为本领域中通常施用的任何化疗药物，优选地，所述化疗药物可为选自紫杉醇、柔红霉素、长春碱、长春新碱和多柔比星等中的一种或多种；且最优选，多柔比星或长春碱。本专利技术中，所述肿瘤指的是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。本专利技术中，优选地，所述肿瘤可为肝细胞癌、白血病、卵巢癌和/或乳腺癌等。根据本专利技术的另一个方面，提供了一种用于治疗肿瘤的药物组合物，其包含：（a）治疗有效量的化疗药物；和（b）治疗有效量的microRNA-491-3p。本专利技术中，所述化疗药物指的是对病原微生物、寄生虫、某些自身免疫性疾病、恶性肿瘤所致疾病的治疗药物。化疗药物可杀灭肿瘤细胞，这些药物能作用在肿瘤细胞生长繁殖的不同环节上，抑制或杀死肿瘤细胞。化疗药物治疗是目前治疗肿瘤的主要手段之一。本专利技术中，所述化疗药物可为本领域中通常施用的任何化疗药物，优选地，所述化疗药物可为选自紫杉醇、柔红霉素、长春碱、长春新碱和多柔比星等中的一种或多种；且最优选，多柔比星或长春碱。本专利技术中，所述肿瘤指的是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。本专利技术中，优选地，所述肿瘤可为肝细胞癌、白血病、卵巢癌和/或乳腺癌等。本专利技术中，优选地，所述药物组合物可以进一步包含可药用载体。所述可药用载体为本领域中通常使用的。根据本专利技术的又一个方面，提供了一种预防和/或治疗p-糖蛋白（MDR1）介导的肿瘤耐药的方法，包括向需要治疗的对象施用治疗有效量的microRNA-491-3p。本专利技术中，术语“有效量”可指为实现预期的效果所需的剂量和时段的有效的量。此有效量可能因某些因子而产生不同的变化，如疾病的种类或治疗时疾病的病症、被施用的特定标的器官的构造、病人个体大小、或疾病或症状的严重性。本领域具有通常知识者不需要过度实验即可凭经验决定特定化合物的有效量。本专利技术人首先使用TargetScan数据库对MDR1的3’非翻译区进行microRNA结合位点预测，发现microRNA-491-3p可以结合到MDR1基因的3’UTR区域（图1A）。经研究发现，在培养的人肝癌细胞中，miR-491-3p可剂量依赖地引起MDR1蛋白水平表达下降（图1B和1D）。miR-491-3p可引起MDR1mRNA3’-非翻译区荧光素酶报告系统的荧光素酶活性降低，突变种子序列区后此作用逆转（图1A和1C）。上述结果说明miR-491-3p确实可以通过与MDR1的3’-非翻译区的特定位点结合，从而起到显著下调MDR1蛋白表达的作用。本专利技术人随后采用Hep3B-1肝癌细胞系，给予多柔比星或长春碱，观察miR-491-3p对多柔比星细胞毒性的影响。在这一细胞模型中，给予miR-491-3p的模拟物，发现miR-491-3p在Hep3B-1肝癌细胞中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
microRNA‑491‑3p在制备用于拮抗p‑糖蛋白（MDR1）介导的肿瘤耐药的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.microRNA-491-3p在制备用于拮抗p-糖蛋白(MDR1)介导的肿瘤耐药的药物中的用途，其中，所述microRNA-491-3p的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述microRNA-491-3p能够增加化疗药物的细胞毒性。3.根据权利要求2所述的用途，其中，所述化疗药物为选自紫杉醇、柔红霉素、长春碱、长春新碱和多柔比星中的一种或多种。4.根据权利要求2所述的用途，其中，所述化疗药物为多柔比星或长春碱。5.根据权利要求1所述的用途，其中，所述肿瘤为肝细胞癌...

【专利技术属性】
技术研发人员：戚新明，任进，李春竹，苗玲玲，王以政，宫丽昆，栾洋，
申请(专利权)人：中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31