【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，具体涉及一种微生物发酵制备青霉素酰化酶的方法。
技术介绍
青霉素酰化酶（penicillin acylase，简称PA)又称为青霉素酰基转移酶，是 β_内酰胺类抗生素工业生产中较为关键的酶，用量很大。 青霉素酰化酶既是胞内酶又是胞外酶，可以通过产酶微生物的营养控制代谢及基 因型改变，进行大规模的生产。青霉素酰化酶主要从大肠埃希菌胞内酶和巨大芽孢杆菌胞 外酶获得，报道最多的是关于埃希氏菌属大肠杆菌发酵生产青霉素 G酰化酶。近年来的研 究倾向于3个方面：利用物理或化学诱变方法、基因工程方法对产青霉素酰化酶的菌株进 行改造，突变菌种的分离以及酶在不同的产酶宿主细胞中的克隆和表达。如利用紫外光诱 变巨大芽孢杆菌可以获得酶产量增加4倍的突变菌株，利用重组DNA技术将编码青霉素酰 化酶的基因导入宿主细胞中，构建了高产分泌型工程菌，但酶的应用性能还有待提升。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，该方法制备得到的青霉素酰 化酶的活性在40000U/L以上。 为了实现本专利技术所述目的，专利技术人提供...
【技术保护点】
一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a.取大肠杆菌，在35‑40℃条件下制备一级种子和二级种子，所用种子培养基含有蛋白胨，酵母浸膏，NaCl；b.将步骤a制备的二级种子接种至发酵培养基中，在35‑40℃培养15‑30h，得到发酵液，所述发酵培养基含有甘油，酵母粉，蛋白胨，NaCl，微量元素水溶液；c.将步骤b制备的发酵液进行离心，弃去上清液，收集下层的菌体浓缩液，即得到青霉素酰化酶的粗品溶液；d.将步骤c所得青霉素酰化酶的粗品溶液进行均质，絮凝，超滤浓缩，沉淀除去杂蛋白，最后进行透析浓缩，即得到青霉素酰化酶纯品。
【技术特征摘要】
1. 一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： a. 取大肠杆菌，在35-40°C条件下制备一级种子和二级种子，所用种子培养基含有蛋 白胨，酵母浸膏，NaCl ; b. 将步骤a制备的二级种子接种至发酵培养基中，在35-40°C培养15-30h，得到发酵 液，所述发酵培养基含有甘油，酵母粉，蛋白胨，NaCl，微量元素水溶液； c. 将步骤b制备的发酵液进行离心，弃去上清液，收集下层的菌体浓缩液，即得到青霉 素酰化酶的粗品溶液； d. 将步骤c所得青霉素酰化酶的粗品溶液进行均质，絮凝，超滤浓缩，沉淀除去杂蛋 白，最后进行透析浓缩，即得到青霉素酰化酶纯品。2. 根据权利要求1所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤a中， 在37-38°C条件下制备一级种子和二级种子。3. 根据权利要求1所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤a中， 种子培养基含蛋白胨5-10重量份，酵母浸膏2-5重量份，NaC15-10重量份，去离子水1000 重量份。4. 根据权利要求1所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤b中， 二级种...
【专利技术属性】
技术研发人员：李红飞，刘健，陈英新，徐永龙，梅玉龙，郝金恒，李银，袁国强，
申请(专利权)人：石药集团中诺药业石家庄有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。