固定化重组青霉素G酰化酶及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种固定化青霉素G酰化酶及制备(S)-2-芳基-氨基酸和头孢类抗生素的应用，本发明专利技术构建的固定化重组青霉素G酰化酶可以在更短的时间内将S型底物转化为S型产物，底物耐受性高，对底物及其结构类似物都有同样严格的S选择性；通过添加钴离子及苯乙酸和甘油作为酶活性中心的保护剂，在避免固定化过程中酶分子严重失活的情况下成功将本发明专利技术的重组青霉素G酰化酶多点共价固定在环氧树脂载体表面，固定化方法简单易行，原料便宜，适合大规模操作；用固定化重组青霉素G酰化酶可以用于合成头孢类抗生素及拆分制备(S)-2-芳基-氨基酸，在固定化酶活力没有出现明显下降前可以连续使用50批次以上。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种固定化重组青霉素G酰化酶，其特征在于所述固定化酶按如下方法制备：(1)将含重组青霉素G酰化酶编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的发酵液离心，取上清液为酶源，向酶源中添加终浓度0.5‑5.0mM的氯化钴，再加入pH＝7.0的盐溶液，混匀，形成待固定酶液；所述重组青霉素G酰化酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示；所述盐溶液与酶源的体积比为1：1；所述盐溶液为3.0M的磷酸缓冲液或3.0M硫酸铵水溶液；(2)将待固定酶液与载体混合，25℃下搅拌6‑24h，取出载体用蒸馏水冲洗后放入pH为9.5‑10.5的100mM的磷酸缓冲液中，再加入苯乙酸和甘油，25℃下保温1‑4天，获得保温后的载体；所述待固定酶液的体积用量以载体质量计为5～10ml/g；所述苯乙酸加入的终浓度为100mM，所述甘油加入的终浓度为200g/L；所述载体为环氧树脂；(3)将步骤(2)保温后的载体浸入pH8.5，1.0‑3.0M的甘氨酸水溶液中，25℃保存24h，最后再用蒸馏水冲洗，得到固定化重组青霉素G酰化酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：薛亚平，郑裕国，柳志强，侯鹏云，刘学，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33