一种猪伪狂犬病病毒基因缺失株、疫苗组合物及其制备方法和应用技术

一种猪伪狂犬病病毒基因缺失株、疫苗组合物及其制备方法和应用，本发明专利技术提供了一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括免疫量的所述的猪伪狂犬病病毒株gE基因缺失株或其培养物的减毒活的全病毒抗原、灭活全病毒抗原。该疫苗组合物能有效诱发抗体产生，对猪产生有效的保护，并能作为标记疫苗以有效区分野毒株和疫苗株。

【技术实现步骤摘要】
一种猪伪狂犬病病毒基因缺失株、疫苗组合物及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种猪伪狂犬病病毒基因缺失株、及其制备的疫苗组合物，以及制备方法和应用，属于动物病毒学领域。
技术介绍
伪狂犬病，又称Aujeszky氏病，是由疱疹病毒科（Herpesviridae）α亚科中的猪疱疹病毒Ⅰ型（Suidherpesvirus1strain）所引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽和野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主症的急性传染病。猪的伪狂犬病在我国广泛存在，危害严重，是制约规模化猪场生产的主要疫病之一。它能引起妊娠母猪流产、死胎或木乃伊胎和仔猪出现神经症状、麻痹，死亡率高。PRV具有较强的泛嗜性、神经嗜性及潜伏感染特性，在外周神经系统可以长期潜伏感染，当潜伏病毒被激活变成有感染力的病毒，被潜伏感染的宿主就会发病。研究表明亚单位疫苗能够给免疫动物提供相应的保护，亚单位疫苗是利用基因工程方法将病原保护性抗原基因克隆到原核或真核表达系统中，使其高效表达而制成的疫苗。目前发现伪狂犬病毒糖蛋白中的gB、gC、gD均能使机体产生中和抗体，这些抗体无论是在体内、体外，还是在有无补体存在的情况下都有中和PRV的能力。“伪狂犬病亚单位疫苗研究进展”（杨承槐，娄高明，谌南辉《江西畜牧兽医杂志》2004年第3期)公开了在伪狂犬病病毒目前已发现的11种糖蛋白中，gB、gC、gD均能诱导机体产生中和抗体。在没有补体的参与下，gB、gC、gD的单克隆抗体能中和PRV。猪和小鼠注射抗gB、gC、gD的单克隆抗体均能抵抗PRV强毒的攻击。因此，gB、gC、gD是研制PRV亚单位疫苗的首选蛋白。糖蛋白gD是一种重要的中和抗原，也是保护性抗体的主要目标，能诱导较好的保护反应。US6858385和US6521231公开了利用猪伪狂犬病病毒gD蛋白可以制备疫苗用于猪伪狂犬病的预防。用于根除计划的疫苗的一个重要的因素是血清学标记，目前所有的PRV血清学检测方法中，gE-ELISA是最有效的区分野毒株和疫苗株的方法。因此gE缺失疫苗有利于伪狂犬的根除计划。在美国和欧共体等发达国家已经明确规定仅能使用伪狂犬gE基因缺失疫苗。专利申请CN103305474A提供的猪伪狂犬的变异株灭活疫苗，由于其不能识别野毒株和疫苗株感染，因此在生产实践中存在相当的局限。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术的主要目的是提供一种猪伪狂犬病病毒株，其中，所述猪伪狂犬病病毒株具有编码序列表SEQIDNO.1所示的氨基酸序列gD糖蛋白的核苷酸序列，并且不含编码gE糖蛋白的核苷酸序列。可选择地，所述猪伪狂犬病病毒具有SEQIDNO.1的氨基酸序列或与其共有98%以上同源性的氨基酸序列表示的gD糖蛋白，且不含gE糖蛋白。可选择地，所述猪伪狂犬病病毒可包含具有SEQIDNO.2的氨基酸序列或其片段共有95%以上核苷酸同源性的gB蛋白。可选择地，所述猪伪狂犬病病毒可包含具有SEQIDNO.3的氨基酸序列或其片段共有95%以上核苷酸同源性的gC蛋白。本专利技术术语“gD糖蛋白”，是猪伪狂犬病病毒进行感染必需的结构蛋白，是成熟的病毒粒子囊膜表面的主要糖蛋白之一，也称为gp50蛋白。本专利技术术语“同源性”在本申请中是指两条氨基酸序列或两条核苷酸序列的相似程度。氨基酸序列或核苷酸序列的同源性可以通过本领域公知的任何适当的方法计算得到，例如，可以将目标氨基酸(或核苷酸)序列与参比氨基酸(或核苷酸)序列进行序列比对，必要时可以引入空缺，使得两条比对的序列间相同的氨基酸(或核苷酸)数目达到最优化，并在此基础上计算两条氨基酸(或核苷酸)序列之间相同氨基酸(或核苷酸)的百分比。氨基酸(或核苷酸)序列的比对和同源性的计算可以通过本领域公知的软件实现，例如，但不限于，BLAST软件(在美国国立生物技术信息中心(NCBI)的网址上可获得：http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi，或者见，例如，AltschulS.F.etal，J.Mol.Biol.，215：403-410(1990)；StephenF.etal，NucleicAcidsRes.，25：3389-3402(1997))，ClustalW2软件(在欧洲生物信息研究所网址上可获得：http://www.eji.ac.uk/Toolsa/clustalw2/，另见，例如，HigginsD.G.etal，MethodsinEnzymology，266：383-402(1996)；LarkinM.A.etal，Bioinformatics(Oxford，England)，23(21)：2947-8(2007))；和TCoffee软件等(在瑞典生物信息学研究所的网站上可以获得：http://tcoffee.vital-it.ch/cgi-bin/Tcoffee/tcoffee_cgi/index.cgi，另见，例如，PoirotO.etal，NucleicAcidsRes.，31(13)：3503-6(2003)；NotredameC.etal，J.Mol.Boil.，302(1)：205-17(2000))。使用软件进行序列比对时，可以使用软件提供的默认参数，或者也可以根据实际情况对软件提供的参数进行调整，这些都在本领域技术人员的知识范围内。本专利技术的另一目的是提供一种猪伪狂犬病病毒HN1201株的gE基因缺失株，其中，所述HN1201株的gE基因缺失株不含编码gE糖蛋白的核苷酸序列。优选地，所述猪伪狂犬病病毒株为通过基因工程手段去掉gE基因HN1201株（Pseudorabiesvirus，strainHN1201）或其培养物，所述的猪伪狂犬病毒HN1201株（PseudorabiesvirusstrainHN1201）保藏号为CCTCCNO.V201311；保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2013年5月20日。所述术语“培养物”是病毒的不同代次传代培养物，本领域技术人员知晓不同代次之间其基因序列仅可能会发生微小的变异，优选地，所述培养物是5-35代以内的培养物。优选地，所述HN1201株的gE基因缺失株染色体gE基因部位核苷酸序列为编码序列表SEQIDNO.10所示的氨基酸序列的核苷酸序列。本专利技术的再一目的是提供一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的所述的猪伪狂犬病病毒株gE基因缺失株或其培养物的减毒活的全病毒抗原、灭活全病毒抗原、亚单位抗原。优选地，本专利技术的疫苗组合物包含所述猪伪狂犬病病毒或其抗原作为活性成分。用于疫苗的组合物的猪伪狂犬病病毒具有SEQIDNO.1的氨基酸序列或与其共有98%以上同源性的氨基酸序列表示的gD糖蛋白，且不含gE糖蛋白。用于本专利技术的抗原是指病毒组分的抗原部分，它引起免疫应答，并可包含具有与SEQIDNO.1的氨基酸序列。可选择地，抗原可包含具有SEQIDNO.2的氨基酸序列或其片段共有95%以上核苷酸同源性的gB蛋白。可选择地，抗原可包含具有SEQIDNO.3的氨基酸序列或其片段共有95%以上核苷酸同源性的gC蛋白。优选地，所述疫苗组合物包括≥106.0TCID50/ml的所述的猪伪狂犬病病毒株gE基因缺失株或其培养物的减毒活的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪伪狂犬病病毒株，其中，所述猪伪狂犬病病毒株具有编码序列表SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列gD糖蛋白的核苷酸序列，并且不含编码gE糖蛋白的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种猪伪狂犬病病毒HN1201株的gE基因缺失株，其中，所述的猪伪狂犬病毒HN1201株保藏号为CCTCCNO.V201311，所述HN1201株的gE基因缺失株不含编码gE糖蛋白的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病病毒HN1201株的gE基因缺失株，其中，所述HN1201株的gE基因缺失株染色体gE基因部位核苷酸序列为编码序列表SEQIDNO.10所示氨基酸序列的核苷酸序列。3.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的权利要求1～2任一项所述的猪伪狂犬病病毒株gE基因缺失株或其培养物的减毒活的全病毒抗原、灭活全病毒抗原。4.根据权利要求3所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，田克恭，谭菲菲，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41