【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物毒株鉴别
，特别涉及一种猪伪狂犬病毒变异毒株的PCR鉴别方法。
技术介绍
伪狂犬病毒(PseudorabiesVirus,PRV)是疱疹病毒科，α疱疹病毒亚科的双股DNA病毒，基因组在140kd左右，编码69个开放阅读框。该病毒主要引起母猪流产、死胎及呼吸系统症状，仔猪出现神经症状和腹泻，给养猪业造成了巨大的经济损失。目前，欧美洲很多国家通过免疫接种和净化技术已经根除该病。我国近十多年内通过采用强化免疫和净化技术，该病也得到有效控制。但是，2011年末，我国PRV疫苗免疫猪场再次暴发该病。全基因组分析结果也表明，此次新发的伪狂犬病病毒与之前的经典伪狂犬病毒属于不同的亚群，其抗原性发生了变化，变异毒株位于一个新的基因分支。因此建立PRV变异毒株和经典毒株鉴别方法十分必要。目前现有的检测伪狂犬病毒感染的PCR方法有很多，其中最常用的两种是国标法与伪狂犬gE基因检测法。国标法主要针对伪狂犬病毒gD基因，可以特异的扩增出220bp的片段。
【技术保护点】
一种猪伪狂犬病毒变异毒株的PCR鉴别方法，其特征在于提取待鉴别病毒DNA，使用引物1F‑C、1F‑V、1R进行第一步扩增，扩增出两条条带的为变异株或HB98疫苗毒株，扩增出1条条带的为经典毒株；扩增出两条条带的病毒DNA再使用引物2F和2R进行第二步扩增，扩增产物分子量大小为293bp的为变异株,扩增产物分子量大小为239bp的为HB98疫苗毒株；引物1F‑C、1F‑V、1R、2F和2R序列如下：1F‑C：5’‑GAGCCCGTCTCGGGGACGAC‑3’，1F‑V：5’‑GCTGCTCGAGGCGGACCACGTC‑3’，1R：5’‑CCGGTGCGCGTGCCTGTG...
【技术特征摘要】
1.一种猪伪狂犬病毒变异毒株的PCR鉴别方法，其特征在于提取待鉴别病毒DNA，使用引物1F-C、1F-V、1R进行第一步扩增，扩增出两条条带的为变异株或HB98疫苗毒株，扩增出1条条带的为经典毒株；扩增出两条条带的病毒DNA再使用引物2F和2R进行第二步扩增，扩增产物分子量大小为293bp的为变异株,扩增产物分子量大小为239bp的为HB98疫苗毒株；
引物1F-C、1F-V、1R、2F和2R序列如下：
1F-C：5’-GAGCCCGTCTCGGGGACGAC-3’，
1F-V：5’-GCTGCTCGAGGCGGACCACGTC-3’，
1R：5’-CCGGTGCGCGTGCCTGTGG-3’，
2F:5’-GATGCGGTCACCGTCGGGTTT-3’，
2R:5’-CCGCCGCTCAGCCCCCATCGT-3’。
2.根据权利要求1所述的PCR鉴别方法，其特征在于第一步PCR反应体系：Taqmix12.5μl，0.1μlrTaq，蒸馏水1.5μl，DMSO2.5μl，10uM的上游引物1F-C、下游引物1F-V、鉴别引物1R分别为0.5μl、2μl、5μl，DNA模板1μl。
3.根据权利要求1或2所述的PCR...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜平，孙涛，白娟，王先炜，李玉峰，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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