鉴别伪狂犬gE基因缺失疫苗毒株和野毒株复合套式聚合酶链式反应诊断试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及的鉴别伪狂犬gE基因缺失疫苗毒株和野毒株复合套式聚合酶链式反应诊断试剂盒及检测方法，属于动物医学动物疫病分子生物学诊断技术领域。鉴别伪狂犬gE基因缺失疫苗毒株和野毒株复合套式聚合酶链式反应诊断试剂盒，该试剂盒由一扩反应混合液、二扩反应混合液、阴性对照和阳性对照组成。本发明专利技术将采用套式PCR扩增，且目的片段较小，保证了反应的高灵敏度。检测总时间控制在4小时左右，达到了快速检测的目的。本发明专利技术能彻底解决伪狂犬流行毒株和gE基因缺失疫苗毒株鉴别诊断问题，快速、灵敏，特异性好，非常适合伪狂犬疫情的大面积快速检测普查，适用于各实验室、动物疫病预防控制中心以及条件具备的大中型养殖场。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
鉴别伪狂犬gE基因缺失疫苗毒株和野毒株复合套式聚合酶链式反应诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒由一扩反应混合液、二扩反应混合液、阴性对照和阳性对照组成；所述一扩反应混合液由灭菌三蒸水、2×GC Buffer、10m mol·L‑1dNTP、25 μmol·L‑1 PRgD‑1F上游引物、25 μmol·L‑1 PRgD‑1R下游引物、25 μmol·L‑1 PRgE‑1F上游引物、25 μmol·L‑1 PRgE‑1R下游引物、5U/μL rTaq DNA聚合酶组成，每个反应体积比为7：12.5：1：0.5：0.5：0.5：0.5：0.5，共计23 μL，50个反应共计1150μL，装成1管；所述二扩反应混合液由灭菌三蒸水、2×GC Buffer、10m mol·L‑1dNTP、25 μmol·L‑1 PRgD‑2F上游引物、25 μmol·L‑1 PRgD‑2R下游引物、25 μmol·L‑1 PRgE‑2F上游引物、25 μmol·L‑1 PRgE‑2R下游引物、5U/μL rTaq DNA聚合酶组成，每个反应体积比为7：12.5：1：0.5：0.5：0.5：0.5：0.5，共计23 μL，50个反应共计1150μL，装成1管；所述阴性对照为PK‑15正常细胞培养上清液；所述阳性对照为gE基因缺失疫苗株Batha‑k61细胞培养液；其中，所述的引物PRgD‑1F序列为：5’‑ TAAAATTGGGTCGGCGTCC‑3’所述的引物PRgD‑1R序列为：5’‑ CGCCCTCAGGAATCGGAC ‑3’所述的引物PRgE‑1F序列为：5’‑ GTTCAGAGCATGCGCCGG ‑3’所述的引物PRgE‑1R序列为：5’‑ CGACAGCAGCCAGACGC ‑3’所述的引物PRgD‑2F序列为：5’‑ GACCGAGCACGAGGTGCG‑3’所述的引物PRgD‑2F序列为：5’‑ GTCCACGCGCGCCTTGA ‑3’所述的引物PRgE‑2F序列为：5’‑ ATCGCGATCGGCGAGTCA ‑3’所述的引物PRgE‑2R序列为：5’‑ CGAGTCGAGCGTGCCACTA ‑3’所述的引物PRgE‑2F序列为：5’‑ ATCGCGATCGGCGAGTCA ‑3’所述的引物PRgE‑2R序列为：5’‑ CGAGTCGAGCGTGCCACTA ‑3’。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴旭锦，朱小甫，
申请(专利权)人：咸阳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：陕西;61