一种定点整合外源基因的方法技术

技术编号:10228119 阅读:237 留言:0更新日期:2014-07-17 23:27
本发明专利技术公开了一种定点整合外源基因的方法。本发明专利技术公开了一种定点整合外源基因到牛β-酪蛋白基因的第二外显子的方法,包括如下步骤:使TALE蛋白-Ⅰ和TALE蛋白-Ⅱ在离体的牛细胞中表达,得到第二外显子靶序列发生突变的细胞;同时将外源基因同源重组到靶序列位置,实现外源基因在牛β-酪蛋白基因的第二外显子上的定点整合。本发明专利技术的人溶菌酶基因或其它目的基因在乳腺中转录非常活跃的β-酪蛋白基因座定点整合,克服位置效应,避免目的基因表达沉默,可以实现人溶菌酶或其它重组蛋白在乳腺中较高水平表达,提高了转基因育种的成功率,同时可以节约后期生产纯化重组蛋白的成本。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种定点整合外源基因到牛β‑酪蛋白基因的第二外显子的方法,包括如下步骤:使TALE蛋白‑Ⅰ和TALE蛋白‑Ⅱ在离体的牛细胞中表达,得到第二外显子靶序列发生突变的细胞;同时将外源基因同源重组到靶序列位置,实现外源基因在牛β‑酪蛋白基因的第二外显子上的定点整合;所述TALE蛋白‑Ⅰ的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示;所述TALE蛋白‑Ⅱ的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示;所述靶序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:戴蕴平王本利丁方荣李松王海萍郑敏李京李玲
申请(专利权)人:中国农业大学
类型:发明
国别省市:北京;11

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