盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条制造技术

本实用新型专利技术公开了一种盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条。试纸条包括底板及附着在底板上依次紧密相连的样品结合垫、层析膜、吸水垫，其中在层析膜上有用偶联盐酸克仑特罗的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹和用羊抗鼠IgG溶液印制的直线式对照印迹，检测印迹和对照印迹平行组合排列为“‖”，样品结合垫上包埋有荧光微球标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。试纸条具有灵敏度高、检测快速、操作方便、经济实用等优点，可用于盐酸克仑特罗残留的检测。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本技术公开了一种盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条。试纸条包括底板及附着在底板上依次紧密相连的样品结合垫、层析膜、吸水垫，其中在层析膜上有用偶联盐酸克仑特罗的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹和用羊抗鼠IgG溶液印制的直线式对照印迹，检测印迹和对照印迹平行组合排列为“‖”，样品结合垫上包埋有荧光微球标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。试纸条具有灵敏度高、检测快速、操作方便、经济实用等优点，可用于盐酸克仑特罗残留的检测。【专利说明】 盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条
本技术涉及一种检测兽药的器具，特别是涉及一种盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条。
技术介绍
克仑特罗(Clebuterol，CL)是一种属于苯胺类的β -受体激动剂，主要以盐酸盐形式存在，具有重新分配机体营养、抑制脂肪沉积、提高蛋白质含量、增加酮体瘦肉率、改善肉质以及促进动物生长的作用。因此，近年来在经济利益的驱使下，大量克仑特罗被滥用于畜牧业和养殖业。人体摄入CL的量过大时，会导致一系列不良反应，主要有肌肉震颤、心跳和呼吸加快等，严重的会危害生命。鉴于此，许多国家已经禁止将克仑特罗作为饲料及饲料添加剂使用，我国农业部也于2002年明确将其列入《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》。目前，检测盐酸克仑特罗比较经典的方法有高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS )、气相色谱-质谱联用法(GC-MS )、高效液相色谱法(HPLC)，这些都是比较传统的方法，也是目前的确证方法。另外，目前常用的还有酶联免疫法(ELISA)。但由于以上方法均需先进检测仪器，检测费用昂贵、步骤繁琐耗时，且对操作人员专业性要求较高，不适用于基层企事业单位的大通量快速筛查检测。胶体金免疫层析法具有检测速度快、价格便宜、操作简单等优点，是目前国内外检测盐酸克仑特罗的主要监控方法，但仍存在一些缺陷，如稳定性较差、灵敏度较低、无法实现定量检测、基质效应明显背景干扰大，且颜色单一，难以实现多检和联检。荧光微球免疫层析技术是继胶体金免疫层析技术后，在荧光染料标记技术上发展起来的，作为一种免疫学检测方法，它是免疫亲和技术、免疫标记技术、免疫层析技术的结合，与胶体金免疫层析技术一样具有快速、操作简便等优点。但是相比胶体金等传统标记物，荧光微球的发光强度可以随激发光的强度增强而增强，所以荧光微球标记有望提高免疫层析技术的检测限；而在微球壳结构的作用下，荧光微球具有相对稳定的形态结构，粒度均一、单分散性好、稳定性好、发光效率高、重复性好，有较好的生物相容性；且形成微球后染料荧光猝灭大大减少，发射强而稳定，且基本不受外界环境介质变化的影响。因此相比上述检测方法，荧光微球免疫层析技术同时具有检测灵敏度高、操作简便、稳定性好的优点。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种灵敏度高、操作简便、检测快速、价格低廉的盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条。本技术的技术方案:—种盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条，包括底板及附着在底板上依次紧密相连的样品结合垫、层析膜、吸水垫，层析膜上有用偶联盐酸克仑特罗的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹和用羊抗鼠IgG溶液印制的直线式对照印迹，检测印迹和对照印迹平行组合排列为“ Il ”，检测印迹位于靠近样品结合垫的末端的一侧，对照印迹位于远离样品结合垫的末端的一侧。底板是用不吸水的硬质塑胶条或硬纸条制成。样品结合垫用包埋盐酸克仑特罗荧光微球标记抗体的玻璃棉制成，盐酸克仑特罗荧光微球标记抗体为荧光微球标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。层析膜用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成。吸水垫用吸水纸制成。本技术的盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条具有以下优点:(I)特异性强、灵敏度高。该试纸条采用将荧光微球标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体包埋在样品结合垫上，具有亲水性佳、可大容量吸附抗体偶联物、迅速重湿润、抗体结合物释放充分、性能好、释放快、形态好等优势，从而减少误差，降低成本，增加整个体系的反应灵敏度。因此，本技术试纸条具有较高的特异性和灵敏度，对盐酸克仑特罗的检测灵敏度为I μ g/L。(2)操作简便、快速。使用试纸条检测时无需任何其它试剂，只需吸取待检样本溶液约100 μ L垂直滴加于样品结合垫上，液体流动时开始计时，反应lOmin，用荧光检测仪分析检测结果。(3)成本低、投资少。使用本技术试纸条，可随时随地进行检测，费用低廉，节省了大量贵重仪器及设备费用。(4)应用范围广，便于推广应用。试纸条操作简单，能较好满足不同层次人员的需要，如专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。【专利附图】【附图说明】图1为本技术试纸条结构示意图。图2为本技术试纸卡结构示意图。【具体实施方式】一、盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条的结构(图1)图中I为包埋有盐酸克仑特罗荧光微球标记抗体的样品结合垫，用玻璃棉制成，2为层析膜，采用硝酸纤维素膜，3为吸水垫，用吸水纸制成，6为底板，用硬质塑胶条制成，将编号1、2、3各层从左至右依次粘贴固定在底板6上，样品结合垫I的末端与层析膜2的始端相连，层析膜2的末端与吸水垫3的始端相连，样品结合垫I的始端与底板6的始端对齐，吸水垫3的末端与底板6的末端对齐。在层析膜2上，4为用偶联盐酸克仑特罗的载体蛋白溶液印上检测印迹“ I ”，5为用羊抗鼠IgG溶液印上对照印迹“ I ”，两印记平行排列形成组合印迹带“ Il ”。二、盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条的制备制备盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条，首先需制备偶联盐酸克仑特罗的载体蛋白和荧光微球标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体，从而制备检测印迹和样品结合垫；其次需制备羊抗鼠IgG抗体，用于制备对照印迹。以下是相关材料的制备方法:1、盐酸克仑特罗半抗原的制备(I)取1.4g盐酸克仑特罗，溶入25mL 二甲基甲酰胺(DMF)中，(TC下分3次加入1.Sg氯铬酸吡啶(PCC)，逐步升温到室温，继续反应3h后，除去大部分溶剂，乙酸乙酯萃取，洗涤，干燥，除去溶剂后柱层析纯化，得到白色固体，为盐酸克仑特罗氧化物；(2)取1.0g步骤(I)所得的盐酸克仑特罗氧化物，溶入20mL DMF中，加入ImL丙二胺，60°C反应10h，除去溶剂，乙醇-水中重结晶，得到白色固体，为盐酸克仑特罗的丙二胺单缩合物，即为盐酸克仑特罗半抗原，经核磁共振氢谱实验鉴定，结构正确。2、盐酸克仑特罗半抗原与载体蛋白的偶联将盐酸克仑特罗半抗原与牛血清白蛋白(BSA)采用活泼酯法进行偶联制备免疫原。(I)取 BSA50mg 用 4mL 水溶解；(2)取碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)各50mg用2mL水溶解完全后加入蛋白溶液中，室温揽祥反应30min ；(3)取半抗原15mg用2mL DMF溶解后，缓慢加入到步骤(2)所得的溶液中，室温搅拌反应24h ；(4)将经步骤(3)反应后的溶液装于透析袋，在4°C用0.02mol/L的PBS溶液透析3天，期间每天换透析液3次，即得到目的产物，分装后_20°C保存。将盐酸克仑特罗半抗原与卵清蛋白(OVA)采用同样的方法进行偶联制备包被原。3、抗盐酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种盐酸克仑特罗荧光微球免疫层析试纸条，包括底板及附着在底板上依次紧密相连的样品结合垫、层析膜、吸水垫，其特征在于：层析膜上有用偶联盐酸克仑特罗的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹和用羊抗鼠IgG溶液印制的直线式对照印迹，检测印迹和对照印迹平行组合排列为“‖”。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯才伟，何方洋，赵正苗，刘玉梅，崔廷婷，王建霞，李勇，刘叶，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：北京;11