指示阿尔茨海默氏病的微RNA生物标志物制造技术

本发明专利技术提供了通过测定源自受试者的样品中的至少一种miRNA的水平来诊断受试者中的阿尔茨海默氏病的方法，其中所述至少一种miRNA的水平相对于合适对照的变化指示受试者中的阿尔茨海默氏病。还提供了监测阿尔茨海默氏病的进程的方法，治疗患有阿尔茨海默氏病的受试者的方法，和用于诊断阿尔茨海默氏病的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】指示阿尔茨海默氏病的微RNA生物标志物相关申请本申请要求2011年6月27日提交的美国临时申请号61/501,720的优先权，其整个内容通过引用并入本文。
技术介绍
阿尔茨海默氏病是人中枢神经系统的一种进行性疾病。它表现为痴呆（通常在老年人中），且征状包括定向障碍，记忆缺失，语言、计算或视觉-空间技能的困难，以及精神病学表现。阿尔茨海默氏病与脑的几个区域中的变性神经元有关。阿尔茨海默氏病的神经病理学的特征在于，存在淀粉样蛋白斑块、神经原纤维缠结、突触损失和选择性的神经元细胞死亡。淀粉样蛋白斑块源自异常的细胞外淀粉样蛋白β肽水平，而神经原纤维缠结与细胞内的过度磷酸化的tau蛋白的存在有关。征状通常首先在临床上表现出记忆减退和随后的其它认知功能的衰退以及异常行为。全世界大约2400万人患有痴呆，其中大多数(～60%)是由于阿尔茨海默氏病(FerriC.P.等人(2005)Lancet366(9503):2112-2117)。据估计，超过500万美国人患有阿尔茨海默氏病，并且预计在本世纪中叶之前该数目将会增加至1430万，这代表从2000年开始350%的增加。在发达国家中日益增加的痴呆患者的数目将对社会和健康护理体系造成巨大负担。早期诊断是治疗阿尔茨海默氏病的一个基本步骤，因为早期诊断允许受试者接受可能减慢疾病进展的药物。目前使用临床标准的组合来诊断阿尔茨海默氏病，所述标准可能包括神经学检查、精神状态试验和脑成像。经常通过消除其它痴呆来诊断阿尔茨海默氏病。基于这些标准，准确诊断可以是困难的，特别对于患有轻度或早期阿尔茨海默氏病的患者而言。通过检查脑组织的病理学可以做出明确诊断，但是这仅仅在死后才可行。因此，需要可以用于诊断应用中的指示阿尔茨海默氏病的标志物。
技术实现思路
本专利技术提供了新颖的miRNA生物标志物，其指示阿尔茨海默氏病，且其可以用于准确地诊断受试者中的阿尔茨海默氏病。这些生物标志物包括miR-191、miR-15b、miR-142-3p、Let-7g、Let-7d、miR-301a和miR-545。在某些实施方案中，所述方法需要检测在合适的样品（优选血液、血浆、血清、尿或唾液）中的细胞外循环miRNA。因此，在第一个方面，本专利技术提供了一种通过测定含有源自受试者的循环miRNA的样品中的至少一种miRNA的水平来诊断受试者中的阿尔茨海默氏病的方法，其中所述至少一种miRNA是miR-191、miR-15b、miR-142-3p、Let-7g、Let-7d或它们的组合，且其中所述至少一种miRNA的水平相对于正常受试者的水平的差异（如相对于合适对照所确定的）指示受试者中的阿尔茨海默氏病。例如，在一个实施方案中，所述方法包括：测定含有源自受试者的循环miRNA的样品中的至少一种miRNA的水平，其中所述至少一种miRNA是miR-191、miR-15b、miR-142-3p、Let-7g、Let-7d或它们的组合，且其中所述至少一种miRNA的水平相对于对照的降低指示受试者中的阿尔茨海默氏病。任选地，所述方法可以进一步包括：基于样品中的至少一种miRNA的水平，提供所述受试者患有或不患有阿尔茨海默氏病的诊断。在一个实施方案中，所述方法可以进一步包括：将至少一种miRNA的水平相对于合适对照的差异与所述受试者中的阿尔茨海默氏病的诊断相关联。在一个实施方案中，所述方法包括：测定所述样品中的一种miRNA（例如，miR-191、miR-15b、miR-142-3p、Let-7g或Let-7d）的水平，其中miRNA的水平相对于正常受试者的水平的差异是降低。在另一个实施方案中，所述方法包括：测定所述样品中的2种或更多种miRNA的水平。在该实施方案中，所述方法可以进一步包括：测定所述样品中的miR-301a、miR-545或miR-301a和miR-545的水平。例如，至少一种miRNA可以选自miR-191、miR-15b、miR-142-3p、Let-7g、Let-7d或它们的组合，且任选地，至少一种mRNA可以选自miR-301a、miR-545或miR-301a和miR-545。在一个实施方案中，所述方法包括，测定下述miRNA组合中的一种的水平：miR-545、let7g和miR-15b；miR-15b和miR-545；miR-301a、miR-545、let-7g和miR-15b；miR-191和miR-15b；Let-7g和miR-15b；miR-191、miR-301a和miR-545；miR-301a、let-7g和miR-15b；和miR-191、miR-301a、miR-545和miR-15b。在一个特定实施方案中，所述方法可以包括：测定得自受试者的含有循环miRNA的样品中的2种或更多种miRNA的水平，将所述样品中的2种或更多种miRNA的水平与一组数据进行对比，所述数据代表存在于正常受试者和患有阿尔茨海默氏病的受试者中的相同miRNA的水平，和基于所述对比，将所述受试者诊断为患有或不患有阿尔茨海默氏病。在某些实施方案中，所述2种或更多种miRNA可以包括以下组合：miR-545、let7g和miR-15b；miR-15b和miR-545；miR-301a、miR-545、let-7g和miR-15b；miR-191和miR-15b；Let-7g和miR-15b；miR-191、miR-301a和miR-545；miR-301a、let-7g和miR-15b；和miR-191、miR-301a、miR-545和miR-15b。所述方法可以任选地包括：执行至少一个另外的试验，以促进阿尔茨海默氏病的诊断。在某些实施方案中，所述另外的试验可以是以下的一种或多种：弱智状态检查(MMSE)、mini-cog试验、ADAS-cog试验和画钟试验。任选地或另外，另外的试验可以包括：检测或评估阿尔茨海默氏病的至少一种另外的生物标志物。所述方法可以任选地包括：给所述受试者施用治疗有效量的至少一种阿尔茨海默氏病治疗剂。在某些实施方案中，所述阿尔茨海默氏病治疗剂可以是(加兰他敏)、(利凡斯的明)或(多奈哌齐)。在一个特定实施方案中，所述阿尔茨海默氏病治疗剂是多奈哌齐或其药学上可接受的盐或酯(例如，盐酸多奈哌齐)。通过任意合适的方法，可以检测miRNA的水平。例如，使用与miRNA特异性地杂交的试剂，可以检测miRNA。在某些实施方案中，使用扩增方法、杂交方法和/或测序方法，可以检测miRNA的水平。在一个实施方案中，使用定量PCR，检测miRNA的水平。在另一个方面，本专利技术提供了一种诊断受试者中的阿尔茨海默氏病的方法，所述方法包括：测量得自受试者的血液衍生的样品中的至少一种miRNA的水平，其中所述至少一种miRNA是miR-191、miR-15b、miR-142-3p、Let-7g、Let-7d或它们的组合，和将所述受试者中的水平相对于合适对照的差异与所述受试者中的阿尔茨海默氏病的诊断相关联。在一个实施方案中，所述方法可以进一步包括：测量所述样品中的miR-301a、miR-545或miR-301a和miR-545的水平。在另一个方面，本专利技术提供了一种监测受试者中的阿尔茨海默氏病的进程的方法，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断受试者中的阿尔茨海默氏病的方法，所述方法包括：测定得自所述受试者的含有循环miRNA的样品中的至少一种miRNA的水平，其中所述至少一种miRNA选自：miR‑191、miR‑15b、miR‑142‑3p、Let‑7g、Let‑7d和它们的组合，其中如相对于合适对照所确定的所述至少一种miRNA的水平相对于正常受试者的水平的差异指示所述受试者中的阿尔茨海默氏病。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.06.27 US 61/501,7201.适合选择性地检测至少一种miRNA的试剂在制备诊断人受试者中的阿尔茨海默氏病的试剂盒中的用途，所述试剂用于测定得自所述受试者的血浆或血清样品中的miR-15b的水平，其中相对于合适对照所确定的所述miR-15b的水平相对于正常人受试者的水平的降低指示所述受试者中的阿尔茨海默氏病。2.适合选择性地检测至少一种miRNA的试剂在制备诊断人受试者中的轻度认知损害(MCI)或阿尔茨海默氏病所导致的认知损害的试剂盒中的用途，所述试剂用于测定得自所述受试者的血浆或血清样品中的miR-15b的水平，其中相对于合适对照所确定的所述miR-15b的水平相对于正常人受试者的水平的降低指示所述受试者中的轻度认知损害(MCI)或阿尔茨海默氏病所导致的认知损害。3.适合选择性地检测至少一种miRNA的试剂在制备诊断具有0-26的MMSE评分的人受试者中的认知损害的试剂盒中的用途，所述试剂用于测定得自所述受试者的血浆或血清样品中的miR-15b的水平，其中相对于合适对照所确定的所述miR-15b的水平相对于正常人受试者的水平的降低指示所述受试者中的认知损害。4.适合选择性地检测至少一种miRNA的试剂在制备诊断具有21-26的MMSE评分的人受试者中的认知损害的试剂盒中的用途，所述试剂用于测定得自所述受试者的血浆或血清样品中的miR-15b的水平，其中相对于合适对照所确定的所述miR-15b的水平相对于正常人受试者的水平的降低指示所述受试者中的认知损害。5.根据权利要求1-4中的任一项所述的用途，其中所述试剂用于测定所述血浆或血清样品中的选自以下的至少一种另外的miRNA的水平：miR-191、miR-142-3p、Let-7g、Let-7d、miR-301a、miR-545及其组合。6.根据权利要求5所述的用途，其中所述试剂用于测定所述样品中的两种miRNA的水平。7.根据权利要求5所述的用途，其中所述试剂用于测定所述样品中的至少三种miRNA的水平。8.根据权利要求5所述的用途，其中所述试剂用于测定miR-545、Let-7g和miR-15b的水平。9.根据权利要求5所述的用途，其中所述试剂用于测定miR-15b和miR-545的水平。10.根据权利要求5所述的用途，其中所述试剂用于测定miR-301a、miR-545、Let-7g和miR-15b的水平。11.根据权利要求5所述的用途，其中所述试剂用于测定miR-191和miR-15b的水平。12.根据权利要求5所述的用途，其中所述试剂用于测定Let-7g和miR-15b的水平。13.根据权利要求5所述的用途，其中所述试剂用于测定miR-301a、Let-7g和miR-15b的水平。14.根据权利要求5所述的用途，其中所述试剂用于测定miR-191、miR-301a、miR-545和miR-15b的水平。15.根据权利要求1所述的用途，其中所述试...

【专利技术属性】
技术研发人员：Z·德兹索，P·库玛，
申请(专利权)人：卫材RD管理有限公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP