可用于诊断人肠道病毒71型感染的试剂盒及诊断方法技术

本发明专利技术提供可用于诊断人肠道病毒71型感染的试剂盒及诊断方法，试剂盒包括一个或多个固体载体，所述固体载体包括彼此分离的I区和II区；所述I区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合I，所述多肽集合1包含独立的下述多肽：SEQ ID NO：1所示的多肽；和SEQ ID NO：2所示的多肽；所述II区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合II，所述多肽集合II包含独立的SEQ ID NO：1所示的多肽。本发明专利技术用于检测人血清中肠道病毒71型抗体(IgM和IgG)具有良好的准确率，灵敏度和特异性，适用于肠道病毒71型的病原学实验室辅助诊断，且操作简单，适合各级医疗和疾控部门使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术主要涉及诊断试剂盒及诊断方法。具体而言，本专利技术涉及可用于诊断人肠道病毒71型感染的试剂盒及诊断方法。
技术介绍
肠道病毒EV71型感染是由人肠道病毒71型(EV71)引起的疾病的总称，临床上主要表现为手足口病，手足口病多在婴幼儿中爆发流行，部分EV71感染患儿表现为疱疹性咽峡炎，重症患者出现病毒性脑炎、病毒性脑脊髓膜炎、肺水肿、肺出血等。引起手足口病的病原，最常见的是柯萨奇病毒A16和肠道病毒71型；由肠道病毒71型感染引起的疾病发生重症感染的比例较大，病死率也较高，重症病例病死率可达10％-25％，因此病原学诊断意义重大。肠道病毒71型(EV71)基因组为含有大约7.5Kb的单股正链RNA，包括5'端非编码区、3'端非编码区和由Pl，P2，P3所组成的多蛋白，共编码11种蛋白，其中4个结构蛋白VPl,VP2,VP3,VP4,7个非结构蛋白2A，2B，2C，3A，3B，3C，3D。其中VP1,VP2,VP3暴露于病毒外壳的表面，为EV71主要的抗原变异位置；VP4包埋在病毒外壳的内侧与内部的RNA结合，其功能类似病毒外壳的锚，用以稳定病毒蛋白的结构。非结构蛋白2A为分裂初期先驱蛋白质，也与终止宿主细胞合成其本身所需蛋白有关；3C则参与大部分的蛋白裂解反应；3D为RNA聚合酶，在病毒RNA复制时主导转录及复制反应；2B,2C,3A,3B等四种蛋白则与病毒RNA的复制有关。肠道病毒EV71的临床诊断主要依据三个方面:一是临床表现，二是血清学证据，三是病原学证据。由于肠道病毒EV71型感染临床表现多，因此肠道病毒EV71的血清学检测和病原学检测是目前最主要的依据。EV71感染产生免疫保护，感染后可检出IgM和IgG抗体。肠道病毒71型抗体(IgM)的检测已有相关文献报道，基本上是以肠道病毒71型的病毒培养物作为包被抗原的间接ELISA，试剂盒在特异性、灵敏度和稳定性方面尚存诸多不足之处；并且，由于病毒培养成本高，效率低，无法大量供应市场。中国专利技术专利CN102243232A，公开日2011年11月16公开了一种肠道病毒71型抗体(IgM)的酶联免疫测定试剂盒(酶联免疫法)，技术方案是首先将血清加入到微孔板中，其中的IgM抗体被预包被在微孔板上的抗μ链捕获，然后，加入酶标记物，被捕获的IgM中的EV71-IgM会与HRP标记的EV71重组抗原特异性结合，洗涤后，HRP会和后续加入的底物反应，最终达到检测EV71-IgM抗体的目的，但是这种方法所需(如血清的体积)大、消耗的试剂等耗材量也大，且该方法仅限用于IgM检测，对检测病人体内IgG则不理想。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供新的可用于诊断人肠道病毒71型感染的试剂盒及诊断方法。本专利技术人令人惊奇地发现，当以SEQIDNO：1所示的多肽和SEQIDNO：2所示的多肽对受试者来源的血液样本中的IgM有响应、和/或SEQIDNO：1所示的多肽对受试者来源的血液样本中的IgG有响应作为判定受试者是否已被人肠道病毒71型感染的指标的情况下，可以以90％以上的灵敏度诊断人肠道病毒71型感染，这是目前我们知道的任何仅使用2个以下的诊断分子的诊断试剂盒均未达到的高灵敏度。因此，本专利技术包括：1.一种诊断试剂盒，其包括一个或多个固体载体，所述固体载体包括彼此分离的I区和II区；所述I区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合I，所述多肽集合1包含独立的下述多肽：SEQIDNO：1所示的多肽；和SEQIDNO：2所示的多肽；所述II区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合II，所述多肽集合II包含独立的SEQIDNO：1所示的多肽。2.根据项1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合I中的全部多肽独立地连接于同一固体载体上。3.根据项1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合II中的全部多肽独立地连接于同一固体载体上。4.根据项1所述的试剂盒，其中，所述I区和II区位于不同固体载体上。5.根据项1所述的试剂盒，其用于诊断人肠道病毒71型感染。6.根据项1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合I还包含独立的下述多肽：SEQIDNO：3所示的多肽。7.根据项1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合II还包含独立的下述多肽：SEQIDNO：3所示的多肽；和/或SEQIDNO：4所示的多肽；和/或SEQIDNO：5所示的多肽。8.一种诊断受试者是否为人肠道病毒71型感染的方法，该方法包括：使用项1～7中任一项所述的试剂盒检测所述多肽集合I中的多肽对受试者来源的血液样本中的IgM是否有响应、以及所述多肽集合II中的多肽对受试者来源的血液样本中的IgG是否有响应；当检测到所述多肽集合I中的任一个或一个以上多肽对受试者来源的血液样本中的IgM有响应、和/或所述多肽集合II中的任一个或一个以上多肽对受试者来源的血液样本中的IgG有响应时，判定该受试者为人肠道病毒71型感染。9.根据项8所述的方法，其中，所述血液样本为全血、血浆或血清。10.根据项8所述的方法，其中，所述受试者为具有手足口病临床症状的受试者。专利技术的具体实施方式多肽集合本说明书中，多肽集合I是指位于I区的全部多肽，该多肽集合I包含SEQIDNO：1所示的多肽和/或SEQIDNO：2所示的多肽。在优选的实施方案中，该多肽集合I还可以包含SEQIDNO：3所示的多肽。本说明书中，多肽集合II是指位于II区的全部多肽，该多肽集合II包含SEQIDNO：1所示的多肽。在优选的实施方案中，该多肽集合II还可以包含SEQIDNO：3所示的多肽；和/或SEQIDNO：4所示的多肽；和/或SEQIDNO：5所示的多肽。其中，SEQIDNO：1所示的多肽序列为APTGQNTQVSSHRLDTGKVP；SEQIDNO：2所示的多肽序列SHRLDTGKVPALQAAEIGAS；SEQIDNO：3所示的多肽序列为DKFANPVKDIFTEMAAPLKS；SEQIDNO：4所示的多肽序列为AAAQKNFTMKLCKDASDILQ；SEQIDNO：5所示的多肽序列为LDLPYSTYVKDELRSIDKIK。所述多肽可以适宜采用(1)化学合成方法、或(2)酶反应合成方法等公知方法来获得，其中化学合成更为简便。在化学合成本专利技术的多肽情况下，通过使用肽合成仪合成或者半合成该多肽来进行。作为化学合成方法，可以列举出例如肽固相合成法等。这样合成的肽可以采用常规手段例如离子交换色谱、反相高效液体色谱、亲和色谱等进行纯化。这样的肽固相合成方法以及其后的肽纯化都是本
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【技术保护点】
一种诊断试剂盒，其包括一个或多个固体载体，所述固体载体包括彼此分离的I区和II区；所述I区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合I，所述多肽集合1包含独立的下述多肽：SEQ ID NO：1所示的多肽；和 SEQ ID NO：2所示的多肽；所述II区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合II，所述多肽集合II包含独立的SEQ ID NO：1所示的多肽。

【技术特征摘要】
1.一种诊断试剂盒，其包括一个或多个固体载体，所述固体载体包括彼此分离的I区和II区；
所述I区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合I，所述多肽集合1包含独立的下述多肽：
SEQIDNO：1所示的多肽；和
SEQIDNO：2所示的多肽；
所述II区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合II，所述多肽集合II包含独立的SEQIDNO：1所示的多肽。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合I中的全部多肽独立地连接于同一固体载体上。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合II中的全部多肽独立地连接于同一固体载体上。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述I区和II区位于不同固体载体上。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其用于诊断人肠道病毒71型感染。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合I还包含独立的下述多肽：
SEQIDNO：3所示的多肽。
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【专利技术属性】
技术研发人员：马雄明，张慧英，滕焕，
申请(专利权)人：苏州偲聚生物材料有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32