一种检测Lp-PLA2的诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种检测Lp‑PLA2的诊断试剂盒，该试剂盒包含药剂和辅助剂，其中所述的药剂由包被缓冲液、洗涤缓冲液、细胞核染色体和Lp‑PLA2抗体组成，所述的辅助剂是由正常人血清、过氧化脲、酶稳定剂和生物防腐剂组成，所述的药剂和辅助剂的体积之比为3∶5‑10，其中包被缓冲液为pH为9.6时0.08M的碳酸盐缓冲液，洗涤缓冲液为pH7.4时0.15M的(NH1)2SO1。对于病情的预防心血管疾病具有重要的临床意义和社会经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于多肽化学和免疫学领域，具体涉及一种根据Lp-PLA2定量测定试剂盒
技术介绍
心脑血管疾病的病理基础是动脉粥样硬化。近年来，研究发现动脉粥样硬化是一种炎性反应性疾病，炎性细胞及其释放的产物被认为是最主要的促动脉粥样硬化的因素。在粥样斑块形成、进展和最终破裂的过程中均有炎性反应介质的参与。脂蛋白相关磷脂酶A2由PLA2G7基因编码，又被称为血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)，属于磷脂酶家族中PLA2的一种，是丝氨酸依赖的磷脂酶，其催化活性不需要Ca2+。人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2的分子量为45KDa，其主要由巨噬细胞、单核细胞、T淋巴细胞、肥大细胞、肝细胞等分泌生成，并受到炎性介质的调节。比如，γ-干扰素和脂多糖抑制其分泌，血小板活化因子促进其分泌。脂蛋白相关磷脂酶A2的主要作用包括：产生十二烷酸类炎性物质、参与磷脂重建及生物膜的稳定平衡、脂蛋白代谢、细胞信号传递、宿主反应、促进机体坏死组织自体消失。急性心脑血管疾病是动脉粥样硬化导致器官病变的最常见类型。近年来，随着对动脉粥样硬化研究的不断深入，许多炎性因子被发现，炎性已经被公认是动脉粥样硬化发展过程中的核心因素。传统的炎性标志物如白细胞介素、肿瘤坏死因子、细胞间黏附分子、血管细胞黏附分子、纤维蛋白原、C反应蛋白等，在促进动脉粥样硬化斑块形成中的作用逐渐被众多实验所证实。脂蛋白相关磷脂酶A2作为一种新近研究的炎性反应介质，具有促进动脉粥样硬化作用，与心脑血管事件的发生有密切关系，为心脑血管疾病的诊断增添了一种新的手段，并成为治疗该类疾病新的潜在目标靶点。当动脉粥样硬化的炎症发展到严重程度时，Lp-PLA2将会被大量释放入血液中，致使其血液内的水平大幅增高，因此Lp-PLA2在血液中的浓度能够反映动脉粥样斑块的炎症程度。因此，通过检测血液中的Lp-PLA2，可以有效地了解动脉粥样硬化斑块的炎症程度及其稳定性。这样就可预警心肌梗死和脑血栓的发生，对预防心脑血管突发事件具有相当重要的意义。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种检测Lp-PLA2的诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含药剂和辅助剂，其中所述的药剂由包被缓冲液、洗涤缓冲液、细胞核染色体和Lp-PLA2抗体组成，所述的辅助剂是由正常人血清、过氧化脲、酶稳定剂和生物防腐剂组成，所述的药剂和辅助剂的体积之比为3∶5-10。所述包被缓冲液优选为pH为9.6时0.08M的碳酸盐缓冲液，稀释缓冲液为pH7.4时0.15M的(NH4)2SO4。所述细胞核染色剂优选为3，3’，5，5’-四甲基联苯胺和或溴化丙啶，进一步优选由重量比2∶1的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺和溴化丙啶组成。所述药剂中包被缓冲液、稀释缓冲液的体积比优选为1∶1，其中细胞核染色体占所述药剂总体积的15-35％。所述的辅助剂中正常人血清与过氧化脲的体积比优选为5∶2-3，而生物防腐剂和酶稳定剂之比优选0.3g/ml。所述酶稳定剂优选由EDTA、蔗糖、甘油、NaCl、牛血清蛋白、叠氮化钠和水组成，进一步优选由重量百分比0.1％EDTA、3％的蔗糖、52％甘油、1.3％NaCl、1％牛血清蛋白和0.02％叠氮化钠和42.58％的水组成。所述生物防腐剂优选为50wt％ε-聚赖氨酸的酒精溶液。有益效果可根据对上述方案的叙述得知，冠心病和中风风险诊断试剂盒利用特异和高度灵敏免疫检测法(ELISA)来定量检测人血清或血浆中的Lp-PLA2的含量，进而用于预测冠心病，缺血性心肌梗死及中风的危因。对于病情的预测、预防具有重要的临床意义和社会经济效益。用本专利技术制备的Lp-PLA2抗体能够高度特异地与血液样本中的Lp-PLA2结合。本专利技术的人Lp-PLA2体外诊断试剂盒可以有效地监测动脉粥样硬化斑块的炎症程度及其稳定性，可预警心肌梗死和脑血栓的发生，预防心脑血管突发事件。本专利技术的Lp-PLA2定量测定试剂盒对于样品浓度为90-897ng/ml的Lp-PLA2，回收率)97％。对低浓度(200ng/ml)，中浓度(500ng/ml)和高浓度(780ng/ml)，其组内变异系数分别为3.7％，5.0％和4.1％(N＝30)，而组间的变异系数分别为5.5％，7.4％和7.8％(N＝10)；试剂盒真阳性率：95.2％；特异度(真阴性率)：99％左右；假阳性率：3％；假阴性率：16.0％。具体实施方式下面结合具体的实施例对本专利技术进行进一步的详细描述。实施例中所使用的Lp-PLA2抗体购自北京索莱宝科技有限公司，其性质如下：靶点：25；浓度为：1mg/ml；抗体来源：鼠；保存温度：-20℃；亚型：IgG。实施例中酶稳定剂为重量百分比0.1％EDTA、3％的蔗糖、52％甘油、1.3％NaCl、1％牛血清蛋白和0.02％叠氮化钠和42.58％的水组成；生物防腐剂为50wt％ε-聚赖氨酸的酒精溶液，实施例1一种检测Lp-PLA2的诊断试剂盒，该试剂盒包含药剂和辅助剂，其中所述的药剂由包被缓冲液、洗涤缓冲液、3，3’，5，5’-四甲基联苯胺和Lp-PLA2抗体组成，所述的辅助剂是由正常人血清、过氧化脲、酶稳定剂和生物防腐剂组成，所述的药剂和辅助剂的体积之比为3∶10，其中包被缓冲液为pH为9.6时0.08M的碳酸盐缓冲液，洗涤缓冲液为pH7.4时0.15M的(NH4)2SO4，3，3’，5，5’-四甲基联苯胺呈微酸性。其中药剂中包被缓冲液、洗涤缓冲液的体积比为1∶1，其中3，3’，5，5’-四甲基联苯胺占所述药剂总体积的30％。所述的辅助剂中正常人血清与过氧化脲的体积比为5∶3，而生物防腐剂和酶稳定剂之比为0.3g/ml。实施例2一种检测Lp-PLA2的诊断试剂盒，该试剂盒包含药剂和辅助剂，其中所述的药剂由包被缓冲液、洗涤缓冲液、溴化丙啶和Lp-PLA2抗体组成，所述的辅助剂是由正常人血清、过氧化脲、酶稳定剂和生物防腐剂组成，所述的药剂和辅助剂的体积之比为3∶10，其中包被缓冲液为pH为9.6时0.08M的碳酸盐缓冲液，洗涤缓冲液为pH7.4时0.15M的(NH4)2SO4。其中药剂中包被缓冲液、洗涤缓冲液的体积比为1∶1，其中溴化丙啶占所述药剂总体积的30％。所述的辅助剂中正常人血清与过氧化脲的体积比为5∶3，而生物防腐剂和酶稳定剂之比为0.3g/ml。实施例3一种检测Lp-PLA2的诊断试剂盒，该试剂盒包含药剂和辅助剂，其中所述的药剂由包被缓冲液、洗涤缓冲液、3，3’，5，5’-四甲基联苯胺、溴化丙啶和Lp-PLA2抗体组成，所述的辅助剂是由正常人血清、过氧化脲、酶稳定剂和生物防腐剂组成，所述的药剂和辅助剂的体积之比为3∶10，其中包被缓冲液为pH为9.6时0.08M的碳酸盐缓冲液，洗涤缓冲液为pH7.4时0.15M的(NH4)2SO4。其中药剂中包被缓冲液、洗涤缓冲液的体积比为1∶1，其中3，3’，5，5’-四甲基联苯胺与溴化丙啶的重量比为1∶1，两者占所述药剂总体积的30％。所述的辅助剂中正常人血清与过氧化脲的体积比为5∶3，而生物防腐剂和酶稳定剂之比为0.3g/ml。本专利技术的具体实施方式仅为本创作的较佳实施例，并不用以限制本创作，凡在本创作的精神及原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本创作的保护本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测Lp‑PLA2的诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含药剂和辅助剂，其中所述的药剂由包被缓冲液、洗涤缓冲液、细胞核染色体和Lp‑PLA2抗体组成，所述的辅助剂是由正常人血清、过氧化脲、酶稳定剂和生物防腐剂组成，所述的药剂和辅助剂的体积之比为3∶5‑10。

【技术特征摘要】
1.一种检测Lp-PLA2的诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含药剂和辅助剂，其中所述的药剂由包被缓冲液、洗涤缓冲液、细胞核染色体和Lp-PLA2抗体组成，所述的辅助剂是由正常人血清、过氧化脲、酶稳定剂和生物防腐剂组成，所述的药剂和辅助剂的体积之比为3∶5-10。2.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述包被缓冲液为pH为9.6时0.08M的碳酸盐缓冲液，稀释缓冲液为pH7.4时0.15M的(NH4)2SO4。3.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述细胞核染色剂为3，3’，5，5’-四甲基联苯胺和或溴化丙啶。4.如权利要求3所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述细胞核染色剂由重量比2∶1的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺和溴化丙啶组成...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨永芳，
申请(专利权)人：浙江聚康生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33