一种微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备及检测方法技术

本发明专利技术是一种微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备及检测方法，试纸条包括样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、双面胶和底板，样品垫及胶体金结合垫均进行了封闭处理和免疫反应加强处理，缩短了胶体金标记物的层析时间以及检测反应所需时间，有效避免因胶体金标记垫中残留的金颗粒的影响而导致加强之后产生的假阳、背景差等现象，明显提高胶体金免疫层析检测微量白蛋白的灵敏度和检测线性范围，具有准确、快速、能够定量检测的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学检验领域，尤其涉及一种微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备及检测方法。
技术介绍
20世纪70年代，Faulk和Taylor首次将胶体金作为示踪物用于免疫电镜检测技术，后来该技术发展成了多种分析方法，如免疫渗滤试验和免疫层析试验等。胶体金免疫层析技术已经成为快速诊断的一个重要发展方向，随着纳米技术和单克隆抗体技术的完善、成熟，该技术也得到了迅速的发展，并在多个领域得到广泛地应用，如临床医学、农业应用、环境检测、兽医学应用、食品安全等。目前虽然某些胶体金检测产品的灵敏度很高，达到使用要求，但是还是有很多产品因为灵敏度原因无法投入应用，使胶体金免疫层析技术应用受到限制。无疑灵敏度的提高能拓宽胶体金免疫层析检测法的应用范围。随着免疫分析技术的发展，人们对产品的性能要求也越来越高，高灵敏度也是胶体金免疫层析技术发展的一个趋势。微量白蛋白(又名微量尿白蛋白，Micoralbuminuria，MAU)是指尿中出现的微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白，在正常生理条件下尿液中也会出现极少微量白蛋白，排泄量一般在30mg/天(或20mg/L)之内。人尿液中的白蛋白达到在30～3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述试纸条包括样品垫(1)、金标结合垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水垫(4)、双面胶(5)和底板(6)，所述微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备方法包括以下步骤：①制备胶体金溶液将氯金酸溶液加热至沸腾后，迅速加入质量百分含量为1％的柠檬酸三钠溶液，氯金酸溶液与柠檬酸三钠溶液的体积比为100：1.4，待颜色稳定后继续煮沸10min，制备出胶体金溶液，然后冷却，并在4℃保存备用；②制备胶体金标记抗体采用梯度试验法分别确定胶体金最小蛋白标记量和胶体金最佳标记PH，然后调节胶体金溶液至最佳pH，按最适标记蛋白量缓慢向胶体金溶液中添加标记抗体，通过...

【技术特征摘要】
1.一种微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述试纸条包括样品垫(1)、金标结合垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水垫(4)、双面胶(5)和底板(6)，所述微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备方法包括以下步骤：①制备胶体金溶液将氯金酸溶液加热至沸腾后，迅速加入质量百分含量为1％的柠檬酸三钠溶液，氯金酸溶液与柠檬酸三钠溶液的体积比为100：1.4，待颜色稳定后继续煮沸10min，制备出胶体金溶液，然后冷却，并在4℃保存备用；②制备胶体金标记抗体采用梯度试验法分别确定胶体金最小蛋白标记量和胶体金最佳标记PH，然后调节胶体金溶液至最佳pH，按最适标记蛋白量缓慢向胶体金溶液中添加标记抗体，通过磁力搅拌器混合均匀后，加入BSA即牛血清白蛋白溶液，使BSA终浓度为0.5％～2％，储存于4℃备用；对上步得到的胶体金标记抗体进行离心纯化，先低速离心20～40min，去除聚合凝集杂质，再高速离心20～40min，加入含有1％BSA的PB溶液，高速离心重复2～3次，最终用含有1％BSA的PB溶液将胶体金标记抗体复溶至原体积的1/10，即得胶体金标记抗体；③金标结合垫(2)预处理将玻璃纤维膜或聚酯纤维膜放入pH7.2的0.01MPBS缓冲液中浸泡30min，所述缓冲液含有2％BSA、2％海藻糖和0.1％TritonX-100，然后37℃烘干备用；④样品垫(1)预处理将玻璃纤维膜或聚酯纤维膜放入pH7.2的0.01MPBS缓冲液中浸泡30min，所述缓冲液含1％BSA和0.1％TritonX-100，然后37℃烘干备用；⑤试纸条制备用喷膜仪于硝酸纤维素膜(3)上喷捕获线(T/C)试剂，所述捕获线(T/C)试剂分别为人白蛋白和羊抗鼠二抗，喷金系数为1.2μL/cm；用喷金仪将胶体金标记抗体溶液喷于预处理后的金标结合垫(2)的玻璃纤维膜或聚酯纤维膜上，得到金标结合垫(2)，按2.5μL/cm喷入，并进行干燥；底板(6)采用PVC板，将样品垫(1)、金标结合垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水垫(4)顺次搭接粘贴在PVC底板(6)上，按照设定的规格切条，制成微量白蛋白快速定量检测试纸...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓峰，
申请(专利权)人：天津果实科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12