一株广谱抗病促生抗逆产氮假单胞菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株广谱抗病促生抗逆产氮假单胞菌及其应用，所述的广谱抗病促生抗逆产氮假单胞菌为产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)WXCDD51，保藏日期为2016年7月12日，保藏编号为CGMCC No.12760。本发明专利技术的生防菌株具有耐紫外耐干旱的特性，对番茄灰霉病和叶霉病的防治效果较强，能够抑制多种农作物枯萎病菌、玉米茎基腐病菌、水稻立枯病菌、刺五加根腐病菌、黄瓜褐斑病菌、黄瓜炭疽病菌、玉米大斑病菌、番茄斑枯病菌、葵花菌核病菌、草莓灰霉病菌、尖孢镰刀菌、轮枝镰刀菌、链格孢等真菌病害，并且对番茄种子具有促生长作用，还能改善果实品质，降低腐烂率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，涉及一株对番茄灰霉病、叶霉病、黄瓜褐斑病和刺五加根腐病等多种植物病害具有较强拮抗作用的产氮假单胞菌及其应用。
技术介绍
农作物病害的发生常常破坏植株的生长，威胁其产量及品质，造成巨大的损失。常见的植物病害的主要防治方法有选育抗病品种、化学防治和生物防治等。针对一些如番茄灰霉病、叶霉病、黄瓜褐斑病和刺五加根腐病等的常见病害，国内外在筛选抗资源材料方面做了较长时间的研究，一直未筛选出理想的抗源材料，抗病育种进展缓慢。而且化学农药的长期大量使用，会使病菌抗药性增强，农药残留危害人畜健康，此外，化学农药在杀死病菌的同时也杀死农田有益微生物，破坏农业生态系统。而生物防治可将病害控制在最低水平，其优点是低毒、低残留、低污染，对环境友好且安全、高效。“十三五”乃至今后更长时期农业工作更是将“保供给、保收入、保生态”确立为“三保”目标。搞绿保生态，就要减少农药、化肥的不合理使用，因此生态友好型的微生物农药成为农作物病害防治的重要手段。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株防治番茄灰霉病、叶霉病、黄瓜褐斑病和刺五加根腐病等植物病害的广谱抗病促生抗逆产氮假单胞菌及其应用，该菌株防治番茄灰霉病、叶霉病、黄瓜褐斑病和刺五加根腐病等常见农作物病害效果较好，并具有抑菌谱广、促进植物生长、改善果实品质、耐紫外耐干旱等特性，具有较高的应用价值，在生物防治中具有潜在的研究和开发优势。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一株广谱抗病促生抗逆产氮假单胞菌，它为产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)WXCDD51，以下简称为WXCDD51，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2016年7月12日，保藏编号为CGMCC No.12760。WXCDD51形态特性：革兰氏阳性，不产芽孢；在LB培养基上菌落呈乳白色，圆形、突起、表面光滑，边缘整齐，会产生代谢物使培养基颜色变深棕色。WXCDD51生理生化特性：WXCDD51为好氧型细菌，能利用葡萄糖和果糖，氧化型产酸，其中硝酸盐还原反应、甲基红反应、V.P.试验呈阴性，淀粉水解、接触酶反应、明胶液化、柠檬酸盐利用试验呈阳性。生长温度范围4-37℃，最适生长温度是25-30℃。WXCDD51分子生物学鉴定结果：将WXCDD51菌株的16SrDNA序列提交到NCBI的GenBank数据库中并进行Blast比对，比对结果发现与其同源性较高的菌株均属于假单胞菌属(Pseudomonas)，采用相似度97％以上的50株菌构建系统发育树，由构建出的系统发育树可看出，WXCDD51菌株与Pseudomonas azotoformans(D84009)在同一个分支上，这说明WXCDD51菌株与Pseudomonas azotoformans亲缘关系最近，相似性为98.75％。通过形态观察、生理生化特性鉴定和16SrDNA序列分析，将WXCDD51菌株鉴定为假单胞菌组中的Pseudomonas azotoformans。本专利技术的WXCDD51对番茄灰霉病菌和叶霉病菌菌丝生长均有显著抑制作用，对灰霉病菌及叶霉病菌菌丝生长量的抑制率分别为94.9％、90.7％。本专利技术的WXCDD51对番茄灰霉病和叶霉病的温室盆栽效果表明，先接种生防细菌后接种病原菌的防治效果灰霉病可达54.51％，叶霉病可达61.46％；先接种病原菌后接种生防菌的防治效果灰霉病可达45.27％，叶霉病可达50.61％。本专利技术的WXCDD51能够有效的抑制黄瓜枯萎病菌、甜瓜枯萎病菌、玉米茎基腐病菌、尖孢镰刀菌、西瓜枯萎病菌、水稻立枯病菌、刺五加根腐病菌、番茄枯萎病菌、黄瓜褐斑病菌、草莓灰霉病菌、黄瓜炭疽病菌、番茄斑枯病菌、玉米大斑病菌、葵花菌核病菌、链格孢等病原真菌的生长，抑菌谱较广，其中对草莓灰霉病和黄瓜褐斑病的抑制作用较强。本专利技术的WXCDD51菌悬液对番茄种子胚根的生长具有促进作用。不同浓度的WXCDD51菌悬液及不同处理时间对番茄种子胚根生长量的影响最高为CK的1.49倍，最低为CK的1.06倍，其中在稀释103倍菌悬液中浸泡3h时，胚根最长。本专利技术的WXCDD51对番茄果实营养品质没有产生不良的影响，具有改善果实品质的作用。经生防细菌处理的番茄果实腐烂率约为30％，而CK对照组的腐烂率达56％，生防细菌具有较好的贮藏防腐作用。由生防细菌处理过的番茄果实失重率明显低于对照组。贮藏第15d，WXCDD51和CK对照组的的硬度分别比第0d下降了28.6％和42.9％，生防细菌处理的果实相对于对照组硬度较高。贮藏结束时可溶性固形物、可滴定酸含量没有显著差别。本专利技术的WXCDD51能够在30℃培养箱中进行干燥培养长达30天。不同人工模拟的干旱处理条件下，菌数变化幅度不大，相比之下对照菌株在不同人工模拟干旱条件下菌数变化明显。经过10-180min不同时间段紫外线照射处理过的细菌液放置LB培养基上培养48h，均可正常生长。180min紫外照射的处理组与对照组相比，菌数几乎不变，抑菌活性也几乎保持一致。本专利技术的WXCDD51具有如下优点：1、与普通的生防菌株相比，具有优良的特性，对番茄灰霉病和叶霉病皿内平均仿效均能达到90％以上，并通过盆栽试验验证了生防细菌对番茄灰霉病和叶霉病的防治效果。2、不仅对番茄灰霉病和叶霉病的防治效果较强，而且能够抑制多种农作物枯萎病菌、玉米茎基腐病菌、水稻立枯病菌、刺五加根腐病菌、黄瓜褐斑病菌、黄瓜炭疽病菌、玉米大斑病菌、番茄斑枯病菌、葵花菌核病菌、草莓灰霉病菌、尖孢镰刀菌、轮枝镰刀菌、链格孢等真菌病害，抑菌效果均较好，抑菌谱较广，其中对草莓灰霉病和黄瓜褐斑病抑制作用较强。3、对番茄种子具有促生长作用，还能改善果实品质，降低腐烂率。4、具有耐紫外耐干旱的特性，能产生代谢物使培养基颜色变深棕色，辨识度高，可为下一步制备成生物农药做基础，并且制备方法简单，成本低廉，是一株性能优良的生防菌株，具有良好的开发应用前景。保藏信息：分类命名：产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2016年7月12日；保藏编号：CGMCC No.12760。附图说明图1为菌株WXCDD51的筛选结果，a为对番茄灰霉病的抑制作用，b为对番茄叶霉病的抑制作用；图2为菌株WXCDD51的菌落形态；图3为菌株WXCDD51的发育树；图4为生防细菌对灰霉病菌菌丝生长量的抑制作用；图5为生防细菌对叶霉病菌菌丝生长量的抑制作用；图6为不同浓度的WXCDD51菌悬液及不同处理时间对番茄种子胚根生长量的影响，其中CK、0-5分别表示水、原菌液、稀释10倍菌悬液、稀释102菌悬液、稀释103菌悬液、稀释104菌悬液、稀释WXCDD51菌悬液；图7为生防细菌对番茄果实腐烂率的影响；图8为生防细菌处理对番茄果实失重率的影响；图9为生防细菌对番茄果实贮藏品质的影响；图10为生防细菌的耐旱性测定；图11为耐紫外抑菌活性测定；图12为WXCDD51的抑菌效果图，其中a-p分别表示草莓灰霉病、黄瓜褐斑病、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株广谱抗病促生抗逆产氮假单胞菌，其分类命名为产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)，保藏编号为CGMCC No.12760。

【技术特征摘要】
1.一株广谱抗病促生抗逆产氮假单胞菌，其分类命名为产氮假单胞菌(Pseudomonas azotoformans)，保藏编号为CGMCC No.12760。2.如权利要求1所述的广谱抗病促生抗逆产氮假单胞菌用于防治番茄灰霉病菌和叶霉病菌。3.如权利要求1所述的广谱抗病促生抗逆产氮假单胞菌用于抑制病原真菌的生长。4.如权利要求3所述的广谱抗病促生抗逆产氮假单胞菌用于抑制病原真菌的生长，其特征在于所述病原真菌为黄瓜枯...

【专利技术属性】
技术研发人员：王傲雪，石玉莹，张淑梅，陈秀玲，王窦逗，奚启新，王迎春，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23