本发明专利技术公开了荧光假单胞菌、荧光假单胞菌脂肪酶及其应用；具体为，一株荧光假单胞菌，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC No.9873，保藏日期为：2016年11月15日；本发明专利技术还公开了一种荧光假单胞菌的脂肪酶，其为自原料乳分离出的荧光假单胞菌BJ‑10中开发得到的一种新的脂肪酶；本发明专利技术还公开一种荧光假单胞菌脂肪酶基因，并通过生物工程技术构建了含有脂肪酶基因的重组表达载体和基因工程菌，经培养基因工程菌后获得脂肪酶；本发明专利技术还公开一种荧光假单胞菌脂肪酶在生产生物柴油、洗涤剂和酯交换等生产工艺中的应用。
【技术实现步骤摘要】
荧光假单胞菌、荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10及其应用
本专利技术涉及生物化工和生物工程
，特别涉及一种荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10及其应用。
技术介绍
脂肪酶(lipaseE.C.3.1.1.3)亦称酰基甘油水解酶(acylglycerolhydrolases)，是一类能催化脂肪酸甘油酯水解为甘油和脂肪酸的酶类(或者是此反应的逆反应)，广泛存在于原核生物和真核生物中，脂肪酶的活性中心通常具有Gly-X1-Ser-X2-Gly的五肽模型(除个别如枯草芽胞杆菌为Ala-X1-Ser-X2-Gly)。脂肪酶的天然底物是甘油酯类,然而研究表明，脂肪酶除了能够催化甘油酯类化合物的水解和合成之外，还可以用于催化酯交换反应、生物表面活性剂的合成、多肽合成、聚合物的合成和药物的合成等，尤其是利用某些脂肪酶的立体专一性，催化旋光异构体的拆分和手性药物的合成成为酶工程领域研究的新热点。目前，脂肪酶已广泛用于多个工业领域，如在洗涤剂中加入少量的假单胞菌脂肪酶,能提高洗涤剂的去污能力并降低表面活性剂和三聚磷酸钠的用量,减少去污剂对环境的污染；废水处理时加入一定量的脂肪酶；可高效除去脂肪，减少废水处理的成本和降低二次污染。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种荧光假单胞菌；本专利技术还有一个目的是提供一种荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10，其为自原料乳分离出的荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)BJ-10中开发得到的一种新的脂肪酶LIPASEBJ10；本专利技术还有一个目的是提供一种荧光假单胞菌的脂肪酶基因lipaseBJ10，并通过生物工程技术构建了含有脂肪酶基因lipaseBJ10的重组表达载体和基因工程菌，经培养基因工程菌后获得脂肪酶LIPASEBJ10；本专利技术还有一个目的是提供一种荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10在生产生物柴油、洗涤剂和酯交换等生产工艺中的应用。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一株荧光假单胞菌，其特征在于，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCCNo.13279，保藏日期为：2016年11月15日，分类命名为：荧光假单胞菌Pseudomonasfluorescens；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；编码所述荧光假单胞菌的16SrRNA的基因的多核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。一种荧光假单胞菌的脂肪酶LIPASEBJ10基因，该基因编码的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。优选的是，其中，所述荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10基因的多核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。如上述的基因编码的荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10。一种基因工程菌株，所述基因工程菌株含有表达如上述的荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10的质粒。优选的是，其中，所述质粒含有如上述的荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10基因和表达载体片段。优选的是，其中，所述表达载体为pET-28b(+)载体。优选的是，其中，所述基因工程菌株通过将如权利要求1或2所述的荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10基因构建重组表达质粒，然后转化大肠杆菌BL21(DE3)而获得。优选的是，其中，所述重组表达质粒为pET-22b(+)-lipaseBJ10，其制备方法为将如权利要求1所述的荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10基因经NdeI和XhoI酶切，然后与同样经NdeI和XhoI酶切的pET-28b(+)载体连接，筛选，即得到重组质粒pET-22b(+)-lipaseBJ10。如上述的基因工程菌株在催化生产生物柴油中的应用。本专利技术至少包括以下有益效果：本专利技术提供的荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10具有良好的稳定性，和耐热性能，在62.5℃热处理1小时，脂肪酶LIPASEBJ10酶活残留97.37％，62.5℃下的D值为72.5小时；其具有酯类水解活性，最适的作用温度为45℃，最适作用pH值为9.4；本专利技术提供的脂肪酶及其编码基因在食品加工，医药化妆品制备以及洗涤行业具有重要的应用潜力；另外，本专利技术提供的荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10可应用于生产洗涤剂或应用于废水处理，在生产洗涤剂时，将假单胞菌脂肪酶少量加入洗涤剂中后，能很大提高洗涤剂的去污能力并降低表面活性剂和三聚磷酸钠的用量，减少去污剂对环境的污染；在废水处理时，加入一定量的脂肪酶，可高效除去脂肪，减少废水处理的成本和降低二次污染；本专利技术提供的基因工程菌株还可用于催化生产生物柴油。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。除非另外定义，否则本文所用的所有技术及科学术语都具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所了解相同的含义。虽然在本专利技术的实践或测试中可使用与本文所述者类似或等效的任何方法、装置和材料，但现在描述优选方法、装置和材料。术语“表达载体”意指在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。如本申请中提及的表达载体pET-22b(+)是一个具有典型表达结构的大肠杆菌高效表达载体。术语“多核苷酸”意指单股或双股形式的脱氧核糖核苷酸、脱氧核糖核苷(DNA)、核糖核苷或核糖核苷酸(RNA)及其聚合物。除非特定限制，否则所述术语涵盖含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，所述类似物具有类似于参考核酸的结合特性并以类似于天然产生的核苷酸的方式进行代谢。除非另外特定限制，否则所述术语也意指寡核苷酸类似物，其包括PNA(肽核酸)、在反义技术中所用的DNA类似物(硫代磷酸酯、磷酰胺酸酯等等)。除非另外指定，否则特定核酸序列也隐含地涵盖其保守修饰的变异体(包括(但不限于)简并密码子取代)和互补序列以及明确指定的序列。特定而言，可通过产生其中一个或一个以上所选(或所有)密码子的第3位经混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现简并密码子取代(Batzer等人,NucleicAcidRes.19:5081(1991)；Ohtsuka等人,J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985)；和Cassol等人,(1992)；Rossolini等人,MolCell.Probes8:91-98(1994))。术语“氨基酸”意指构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使他的分子具有生化活性。蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酵素和酶。不同的氨基酸脱水缩合形成肽(蛋白质的原始片段)，是蛋白质生成的前体。术语“蛋白”意指氨基酸残基的聚合物。所述术语适用于天然产生氨基酸聚合物以及其中一个或一个以上氨基酸残基为非天然编码氨基酸的氨基酸聚合物。术语“PCR”意指聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction)，简称PCR。聚合酶链反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株荧光假单胞菌，其特征在于，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC No.9873，保藏日期为：2016年11月15日，分类命名为：荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens；编码所述荧光假单胞菌的16S rRNA的基因的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
【技术特征摘要】
1.一株荧光假单胞菌，其特征在于，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCCNo.9873，保藏日期为：2016年11月15日，分类命名为：荧光假单胞菌Pseudomonasfluorescens；编码所述荧光假单胞菌的16SrRNA的基因的多核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。2.一种如权利要求1所述的荧光假单胞菌的脂肪酶LIPASEBJ10基因，其特征在于，该基因编码的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。3.如权利要求1所述的荧光假单胞菌的脂肪酶LIPASEBJ10基因，其特征在于，所述脂肪酶LIPASEBJ10基因的多核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。4.如权利要求2或3所述的基因编码的荧光假单胞菌脂肪酶LIPASEBJ10。5.一种基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株含有表达如权利要求3所述的脂肪酶的质粒。6.如权利要求5所述的基因工程菌株，...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕加平，张维清，逄晓阳，张书文，刘鹭，芦晶，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11
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