本发明专利技术公开了一株拮抗枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌，其分类命名为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)GQJK17，已于2016年11月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，菌种保藏号为CGMCC NO.13254。本发明专利技术分离得到的萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)GQJK17，该菌株对枸杞根腐病具有较强拮抗作用，为枸杞根腐病的生物防治提供了新的生防菌，增加了生防制剂的种类。
【技术实现步骤摘要】
一株拮抗枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌及其应用
本专利技术涉及一株拮抗枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌及其应用，属于生物
技术介绍
枸杞是一种名贵的中药，枸杞果实有较高的营养保健和药用价值，与琼珍灵芝、长白山人参，东阿阿胶并称为“中药四宝”。随着经济的发展和社会的进步，人们也越来越认识到枸杞的价值，促使人们对枸杞进行了广泛的产品开发，并取得了重要成果。宁夏枸杞在中国栽培面积最大，随着枸杞种植面积不断扩大，老产区与新产区枸杞根腐病发病率连年上升，日益严重，已经严重影响到了当地农民经济收入，对整个产业链有一定的破坏作用。枸杞根腐病是一种系统感染病害，病株根和根颈部发生腐烂，茎杆维管束变褐色。潮湿时病部偶尔长出白色或粉红色霉层(病原菌)。由于根腐，叶片变小，缺少光泽，枝条矮化，果实瘦小；或叶片变黄萎蔫，严重时植株逐渐枯死。目前人们防治枸杞根腐病主要是喷洒农药，配方施肥，增施磷钾肥的方式。但这些方法费时费力，很难从根源上有效防治病害的发生，而且对环境污染大，对人体健康也有一定的伤害，而生物防治方法因其具有专一性和绿色环保的优点，越来越受到人们的关注。应用比较成熟的有芽孢杆菌对于棉花枯萎病、马铃薯疮痂病、苹果红癌病、小麦根腐病等多种植物病害的生防作用，但还没有枸杞根腐病生物防治方面的报道，而找到拮抗枸杞根腐病的菌种资源是关键。萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)是枯草芽孢杆菌的一类变种，在农业、工业、科研、医疗和卫生领域等都有广泛的应用。在美国、日本、欧盟等国家和地区常将该菌株作为质量控制标准检测菌株及杀菌效果评价试验指示菌。但该菌应用于防治植物病害方面的报道较少，所涉及的研究主要有：防治苦瓜灰霉病(CN105670964A)、防治马铃薯甲虫幼虫(CN104164378A)、防治棉铃疫病(CN102747005A)、防治番茄立枯病、辣椒早疫病、棉花立枯病(CN104531545A)等，但目前还未有防治枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌的报道。而且，生防微生物与土壤环境中的微生物群落之间往往存在相互作用，外源拮抗菌的引入可以引起作物根际土壤微生物群落的组成发生变化，不同植物根际同种细菌的定植和功能具有较大差异性；而且，生防微生物在土壤环境中能否存活并且快速生长也是实现防治作用的关键。因此，筛选能够对枸杞根腐病具有防治作用的生防菌株具有十分重要的实际应用价值。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一株拮抗枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌及其应用。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：根据本专利技术的第一方面，提供一株拮抗枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌，其分类命名为萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17，已于2016年11月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，菌种保藏号为CGMCCNO.13254。该菌株是从枸杞根际土壤中分离得到，该菌株的菌落及菌体特征为：在LB平板上培养24h后菌落呈近圆形，乳白色，菌落扁平状，边缘小齿状，表面干燥，菌落直径为2.62mm。菌体呈长杆状，产芽孢，革兰氏阳性。该菌株的生理生化特征为：氧化酶实验阴性，接触酶实验阳性，柠檬酸盐利用实验阳性，硝酸盐利用实验阴性，淀粉水解实验阳性，M-R实验阴性，V-P实验阳性，葡萄糖发酵实验阳性，蔗糖发酵实验阳性，麦芽糖发酵实验阴性，阿拉伯糖发酵实验阳性，木糖发酵实验阴性，纤维二糖发酵实验阴性，乳糖发酵实验阴性，山梨醇发酵实验阳性，甘露醇发酵实验阳性。根据本专利技术的第二方面，提供一种生防制剂，其活性成分为上述萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17的发酵产物。优选的，所述生防制剂为液态菌剂。进一步的，所述生防制剂中萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17的含量大于或等于2×108cfu/mL。本专利技术还提供上述生防制剂的制备方法，包括如下步骤：发酵上述的萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17，得到发酵产物。上述制备方法中，发酵采用的培养基为液体豆芽汁培养基，其原料组成为：黄豆芽100g，蔗糖50g，水1000mL，pH自然；所述液体豆芽汁培养基的制备方法为：黄豆芽沸水蒸煮30min，用四层纱布过滤，加入蔗糖定容到1000mL。上述制备方法中，发酵的条件为：35-40℃，恒温摇床培养20-30h；优选为，37℃，恒温摇床培养24h。根据本专利技术的第三方面，提供上述萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17和/或生防制剂在防治枸杞根腐病中的应用。上述应用中，所述防治枸杞根腐病体现在抑制枸杞根腐病的发作，降低发病率。根据本专利技术的第四方面，提供上述萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17和/或生防制剂在促进枸杞增产中的应用。本专利技术还提供一种能防治枸杞根腐病，同时增产的产品，其活性成分为上述的萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17或上述生防制剂。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术分离得到的萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17，该菌株对枸杞根腐病具有较强拮抗作用，为枸杞根腐病的生物防治提供了新的生防菌，增加了生防制剂的种类。(2)研究表明，在大田条件下，采用本专利技术的萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17的菌悬液对枸杞根腐病发病严重的地块的枸杞树进行灌根处理后，能明显抑制枸杞根腐病的发作，降低发病率；本专利技术的萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17还能改善植株的生长状况，提高枸杞的产量，对枸杞树平均增产在484％以上。以上研究结果表明，本专利技术的拮抗枸杞根腐病的芽孢杆菌对宁夏枸杞根腐病具有一定的防治效果。(3)不同植物的根腐病，其病原菌不同，发病机理也会存在差异。对其他植物的根腐病有防治效果的芽孢杆菌，并不能直接推知其对枸杞根腐病有防治效果。我们在实验过程中发现，在平板对峙实验中对植物病原菌有拮抗效果的菌株，但并不能保证其在大田实验中的效果。大田实验的结果也证明，拥有较好的平板对峙实验结果的菌株，在大田实验中，对枸杞根腐病病原菌也未必拥有明显的抑制效果。因此，对其他植物的根腐病有防治效果的芽孢杆菌而言，由于宁夏地区恶劣的生存环境，菌株能否存活并且快速生长成为关键问题，因此未必对枸杞根腐病有防治效果。附图说明图1：萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17的菌落形态图；图2：萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17的系统进化树图。具体实施方式下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。实施例1：菌株的分离、筛选(1)菌种的分离从宁夏省中宁县石啦叭村采集健康、垂死、已死枸杞树根际土壤样品5个。称取10.0克枸杞根际土，按每10克土加90mL无菌水的比例放入事先准备好的装有玻璃珠的三角瓶中，置于37℃恒温摇床上18本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株拮抗枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌，其分类命名为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)GQJK17，已于2016年11月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，菌种保藏号为CGMCC NO.13254。
【技术特征摘要】
1.一株拮抗枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌，其分类命名为萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17，已于2016年11月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，菌种保藏号为CGMCCNO.13254。2.一种生防制剂，其活性成分为权利要求1所述的萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17的发酵产物。3.如权利要求2所述的生防制剂，其特征在于，所述生防制剂为液体菌剂。4.如权利要求3所述的生防制剂，其特征在于，所述生防制剂中萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)GQJK17的含量大于或等于2×108cfu/mL。5.权利要求2-4任一项所述的生防制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：发酵权利要求1所述的萎缩芽孢杆菌(Bac...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁延芹，杜秉海，马锦锦，姚良同，汪城墙，刘凯，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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