【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学分析，具体地说，涉及利用顶空固相微萃取技术测定恰玛古中挥发性风味物质的方法。
技术介绍
1、恰玛古，学名为芜菁(brassica rapa l.)，是十字花科芸薹属芸薹种下的芜菁亚种。恰玛古表现出抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、降血糖和调节免疫功能等多种生物活性。在临床上，恰玛古根的提取物已被制成“恰玛古蜜膏”和“恰玛古胶囊”，用于肿瘤的免疫辅助治疗。因恰玛古具有很好的药用价值及特殊风味，深受广大人民喜爱，其产品也深受喜爱。
2、恰玛古中含有多种营养成分和微量元素，其中有维生素b1、维生素b2、维生素c、维生素pp、蛋白质、粗纤维、粗脂肪、多糖、皂苷、亚油酸、类黄酮、芸苔素、多种氨基酸、以及钙、铁等无机元素。恰玛古因具有舒胸顺气，健胃消食，解毒，抑制细菌、真菌、酵母及人的某些寄生虫的作用，常被用于治疗食欲不振、胃腹冷痛、消化不良、体虚多梦、气管炎、腹泻和疮疖肿毒等疾。其中黄酮类化合物有抗病原微生物、抗炎、抗过敏、抗血栓和降脂等药理作用，因而广泛用于医药、食品等行业。因恰玛古具有诸多对人体有益的功效，且食用简便。
3、挥发性成分是构成风味的重要物质，也是决定品质的主要因素，研究其挥发性成分有助于了解恰玛古的风味化学组成，对深加工以及产品质量控制都具有重要的意义。气相色谱-质谱-嗅闻仪联用法(gc-ms-go)泛用于挥发性成分的测定，为挥发性成分的研究提供了更简便和准确的方法，但前处理时通常需要通过水蒸气蒸馏、液-液萃取、超临界萃取等技术，这些技术都不同程度地存在着所需样品量大、耗时长、高温或
4、固相微萃取(spme)技术是一种新型的无溶剂样品预处理技术，这种技术集取样、萃取、浓缩和进样为一体，具有操作简单、样品用量小、无需使用溶剂、萃取样品后可直接色谱进样等优点，现已广泛应用于食品、环境、医药等领域。挥发性化合物的提取是对风味物质研究的一个重要前提，风味物质挥发性强、含量低且种类复杂等这些问题使提取过程有一定的困难。只有选择合适的萃取方法才能够完全地提取恰玛古的风味成分。
技术实现思路
1、本专利技术提供恰玛古挥发性风味物质的检测方法，特别是采用顶空固相微萃取(hs-spme)结合气相色谱-质谱(gc-ms)联用及气相色谱-嗅闻-质谱(gc-o-ms)联用检测恰玛古中的挥发性风味物质。顶空固相微萃取时间短、操作简便，无需溶剂，绿色化、易实现自动化。采用本专利技术所述的方法确定了恰玛古特征性风味物质，检测到的风味物质种类及成分明显多于已发表的文献
2、一种测定恰玛古中挥发性风味物质的方法，包括：(1)恰玛古样品的制备；(2)顶空固相微萃取样品中的挥发性风味物质；(3)气相色谱-质谱(gc-ms)联用及气相色谱-嗅闻-质谱(gc-o-ms)联用测定挥发性风味物质，对挥发性风味物质进行定性和/或定量分析。
3、作为优选，步骤(2)向20ml顶空瓶中加入3ml～6ml样品，置于自动进样器中，顶空瓶到达固相微萃取加热装置中，固相微萃取纤维头经前处理后进行萃取。
4、所述前处理的方法包括：取dvb/car/pdms(二乙烯基苯/羧基/聚二甲基硅氧烷)固相微萃取纤维头插入气相色谱质谱联用仪的进样口，270℃老化40min，然后进行空白实验，直至无色谱峰出现。
5、作为优选，步骤(2)中的萃取条件：加热温度40℃～80℃，平衡时间20min～30min，吸附时间10min～30min，解析时间3min～10min。
6、作为进一步地优选，步骤(2)中的萃取条件：加热温度80℃，平衡时间20min，吸附时间30min，解析时间3min。
7、作为优选，步骤(3)中的气相色谱条件：db-wax色谱柱30m×0.25mm×0.50μm；载气为氦气，纯度为99.999％，恒流模式：1.0ml/min；进样口温度：230℃；进样方式为不分流进样；流出物以1∶1的分流模式分别流入质谱和嗅闻检测器。
8、柱箱升温程序：30℃保持2min，以4℃/min升到90℃保持5min，以3℃/min升到230℃保持10min。
9、作为优选，步骤(3)中的质谱条件：电离方式为ei，电子能量为70ev，检测器电压：调谐电压+0.1kv，离子源温度为230℃，接口温度为230℃，辅助加热：230℃；检测模式为全扫描质量，扫描范围35～1000m/z，阈值1000；传输线温度150℃，嗅闻检测器接口温度为150℃，为防止评价员鼻腔干燥，在检测时通入湿润氮气。
10、进一步地，步骤(3)还包括色谱柱的前处理：色谱柱在gc-ms上安装好，进行老化；柱箱升温程序为40℃保持3min，以8℃/min升到240℃保持10min，以-8℃/min升到40℃保持10min，老化213min，然后进行空白实验，直至无色谱峰出现。
11、进一步地，步骤(3)中气相色谱质谱联用对挥发性风味物质进行定性分析包括：通过化学工作站检索nist17-1、nist17、nist17s标准质谱图库，并结合质谱图嗅闻文献解析，确定挥发性风味物质的成分。
12、进一步地，步骤(3)中气相色谱质谱联用对挥发性风味物质进行定量分析包括：加入0.1～2.0μg内标2-甲基-3-庚酮，通过化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法进行计算，求出各成分的浓度和相对百分含量。
13、作为优选，步骤(1)恰玛古样品的制备包括：榨取恰玛古汁液，过滤，-80℃冷冻2天，冻干；称取0.1g～1.0g，用4ml～10ml ddh2o(双蒸水)溶解，制成恰玛古原液。
14、作为优选，步骤(1)样品制备包括：称取新鲜、无病害的恰玛古(2kg～3kg)，清洗去泥，刷子去皮，榨汁，200目纱布过滤，-80℃冷冻2天，冻干，4℃保存，进样前称取0.1g～1.0g样品，用4ml～10ml ddh2o溶解，制成恰玛古原液。
15、进一步地，步骤(1)中的恰玛古原液，加入0.1～2.0μg内标2-甲基-3-庚酮，拧紧spme进样瓶瓶盖，制成恰玛古样品a；将恰玛古原液稀释100～10000倍后，加入0.1～2.0μg内标2-甲基-3-庚酮，拧紧spme进样瓶瓶盖，制成恰玛古样品b。
16、进一步地，所述测定恰玛古中挥发性风味物质的方法，包括：
17、(1)固相微萃取纤维头前处理：取dvb/car/pdms萃取纤维头插入气相色谱-质谱联用仪的进样口，270℃老化40min，然后进行空白实验，直至无色谱峰出现。
18、(2)气相色谱柱前处理：色谱柱在gc-ms上安装好，进行老化；柱箱升温程序为40℃保持3min，以8℃/min升到240℃保持10min，以-8℃/min升到40℃保持10min，老化213min，然后进行空白实验，直至无色谱峰出现。
19、(3)样品制备：称取新鲜、无病害的恰玛古(2kg～3kg)，清洗去泥，刷子去皮，榨汁，200目纱布过滤，-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.测定恰玛古中挥发性风味物质的方法，其特征在于，包括：(1)恰玛古样品的制备；(2)顶空固相微萃取样品中的挥发性风味物质；(3)气相色谱-质谱联用和气相色谱-嗅闻-质谱联用鉴定挥发性风味物质，对风味物质进行定性和/或定量分析。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)向20mL顶空瓶中加入3mL～6mL恰玛古样品，置于自动进样器中，顶空瓶到达固相微萃取加热装置中，固相微萃取纤维头经前处理后进行萃取；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中的萃取条件：加热温度40℃～80℃，平衡时间20min～30min，吸附时间10min～30min，解析时间3min～10min；优选地，萃取条件：加热温度80℃，平衡时间20min，吸附时间30min，解析时间3min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中的气相色谱条件：DB-WAX色谱柱30m×0.25mm×0.50μm；载气为氦气，纯度为99.999％，恒流模式：1.0mL/min；进样口温度：230℃；进样方式为不分流进样；流出物以1∶1的分流模式分别流
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中的质谱条件：电离方式为EI，电子能量为70eV，检测器电压：调谐电压+0.1kV，离子源温度为230℃，接口温度为230℃，辅助加热：230℃；检测模式为全扫描质量，扫描范围35～1000m/z，阈值1000；传输线温度150℃，嗅闻检测器接口温度为150℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)还包括色谱柱的前处理：色谱柱在GC-MS上安装好，进行老化；柱箱升温程序为40℃保持3min，以8℃/min升到240℃保持10min，以-8℃/min升到40℃保持10min，老化213min，然后进行空白实验，直至无色谱峰出现。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中气相色谱质谱联用对挥发性风味物质进行定性分析包括：通过化学工作站检索NIST17-1、NIST17、NIST17s标准质谱图库，并结合嗅闻仪及质谱图嗅闻文献解析，确定挥发性风味物质的成分。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中气相色谱质谱联用对挥发性风味物质进行定量分析包括：加入0.1～2.0μg内标2-甲基-3-庚酮，通过化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法进行计算，求出各成分的浓度和相对百分含量，计算公式如下：挥发性物质含量/(μg/kg)＝(A1/A2)×(M1/M2)×1000，式中：A1为待测物质峰面积；A2为内标物峰面积；M1为内标物质量/μg；M2为样品质量/g。
9.根据权利要求1～8任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)样品制备包括：榨取恰玛古汁液，过滤，-80℃冷冻2天，冻干；称取0.1g～1.0g，用4mL～10mL ddH2O溶解，制成恰玛古原液。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，取步骤(1)中的恰玛古原液，加入0.1～2.0μg内标2-甲基-3-庚酮，制成恰玛古样品A；将恰玛古原液稀释100～10000倍后，加入0.1～2.0μg内标2-甲基-3-庚酮，制成恰玛古样品B。
...【技术特征摘要】
1.测定恰玛古中挥发性风味物质的方法，其特征在于，包括：(1)恰玛古样品的制备；(2)顶空固相微萃取样品中的挥发性风味物质；(3)气相色谱-质谱联用和气相色谱-嗅闻-质谱联用鉴定挥发性风味物质，对风味物质进行定性和/或定量分析。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)向20ml顶空瓶中加入3ml～6ml恰玛古样品，置于自动进样器中，顶空瓶到达固相微萃取加热装置中，固相微萃取纤维头经前处理后进行萃取；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中的萃取条件：加热温度40℃～80℃，平衡时间20min～30min，吸附时间10min～30min，解析时间3min～10min；优选地，萃取条件：加热温度80℃，平衡时间20min，吸附时间30min，解析时间3min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中的气相色谱条件：db-wax色谱柱30m×0.25mm×0.50μm；载气为氦气，纯度为99.999％，恒流模式：1.0ml/min；进样口温度：230℃；进样方式为不分流进样；流出物以1∶1的分流模式分别流入质谱和嗅闻检测器；
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中的质谱条件：电离方式为ei，电子能量为70ev，检测器电压：调谐电压+0.1kv，离子源温度为230℃，接口温度为230℃，辅助加热：230℃；检测模式为全扫描质量，扫描范围35～1000m/z，阈值1000；传输线温度150℃，嗅闻检测器接口温度为150℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳萌，范蓓，王凤忠，孙晶，郑佳欢，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：
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