【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物工程领域。更具体地说，本专利技术涉及一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基及其制备方法。
技术介绍
1、嗜黏蛋白阿克曼氏菌(akkermansia muciniphila)是疣微菌门的代表细菌，属于阿克曼氏菌属，是一种厌氧、不运动、不形成孢子、可以单独和成对生长的椭圆形革兰氏阴性细菌。它可以利用黏蛋白作为唯一的碳和氮源进行生长，在调节机体免疫代谢和保护肠道器官上起着重要的生理和健康作用。
2、作为近年来的“明星菌株”，阿克曼菌与肠道中的其他微生物相互作用，协助人体消化食物，促进营养吸收，并通过消除有害微生物的生长来保护人体免受疾病的侵害。目前对阿克曼菌的研究集中于该菌的体内作用效果和体外评价，临床研究较少。研究发现阿克曼菌在健康人的肠道中含量更多，在炎症性肠病、肥胖和其他疾病患者中则减少，且与肠道黏液层完整性有关，因此阿克曼菌可以作为肠道健康的生物标志物。而且已有研究表明嗜黏蛋白阿克曼氏菌具有一系列与人类健康积极相关的生物活性，在改善肥胖、糖尿病、肝病和心脏代谢紊乱等疾病上起着积极的作用。
3、但目前嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基普遍存在培养时间较长、培养基制备复杂、安全性低等问题，极大的限制了该菌的研究和应用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基及其制备方法，将阿克曼菌的生长速度缩短至原来的三分之一倍，极大地促进了阿克曼菌的生长，且与传统阿克曼培养基体系需要纯化黏蛋白的步骤相比，酶解动物蛋白肽的制备方法更加简便且快速。
2、为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，培养基中包括0.5～10g/l的动物蛋白肽、40g/l的脑心浸液培养基、0.5mg/l的刃天青和1g/l的l-半胱氨酸盐酸盐。
3、优选的是，所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，培养基中包括：
4、动物蛋白肽 10g/l
5、脑心浸液培养基 40g/l
6、刃天青 0.5mg/l
7、l-半胱氨酸盐酸盐 1g/l。
8、优选的是，所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，培养基中包括：
9、动物蛋白肽 0.5g/l
10、脑心浸液培养基 40g/l
11、刃天青 0.5mg/l
12、l-半胱氨酸盐酸盐 1g/l
13、壳聚糖 2.5g/l
14、鼠李糖 2.5g/l
15、唾液酸 5g/l
16、半乳糖 2.5g/l。
17、优选的是，所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，其动物蛋白肽的制备方法为：
18、步骤a、底物浓度为5%称取动物蛋白肽于蒸馏水中，45℃水浴30min，调节溶液ph为7.2，得到蛋白液；
19、步骤b、向步骤a所配制的溶液中加入中性蛋白酶，于45℃，ph7.0～7.8下酶解5h，得到酶解液；其中，酶解的前45min，每隔5min滴加浓度为3mol/l的naoh调节酶解反应液ph维持在7.0～7.8；酶解45min后，每隔20min滴加浓度为3mol/l的naoh调节酶解反应液ph维持在7.0～7.8；酶解结束后，调节ph至7.2；
20、步骤c、将酶解液置于沸水浴中煮沸10min后冷却至室温，随后于8000r/min下离心15min取上清液，得到动物蛋白肽并于-20℃冷冻保存备用。
21、本专利技术还提供一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基的制备方法，其包括以下步骤：
22、步骤一、向容器中加入一定量蒸馏水；
23、步骤二、将脑心浸液培养基、刃天青添加到蒸馏水中进行混合；
24、步骤三、将动物蛋白肽在常温下添加到蒸馏水中混合；
25、步骤四、向容器中补足蒸馏水至1l得混合液；
26、步骤五、将混合液于灭菌锅中121℃灭菌15min；
27、步骤六、无菌条件下将l-半胱氨酸盐酸盐浓缩液过滤除菌，然后混合液搅拌均匀，即得所述培养基。
28、本专利技术提供一种所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基的制备方法，其包括以下步骤：
29、步骤一、向容器中加入一定量蒸馏水；
30、步骤二、将脑心浸液培养基、刃天青添加到蒸馏水中进行混合；
31、步骤三、将动物蛋白肽、壳聚糖、鼠李糖、唾液酸、半乳糖在常温下添加到蒸馏水中混合；
32、步骤四、向容器中补足蒸馏水至1l得混合液；
33、步骤五、将混合液于灭菌锅中121℃灭菌15min；
34、步骤六、无菌条件下将l-半胱氨酸盐酸盐浓缩液过滤除菌，然后混合液搅拌均匀，即得所述培养基。
35、本专利技术至少包括以下有益效果：
36、1、本专利技术提供的培养基通过加入酶解方法制备的动物蛋白肽，加大的简化了培养基成分和其制备过程，将阿克曼菌的生长速度缩短至原来的三分之一倍，且使其培养过程中的od600nm值达到1.06，极大地促进了阿克曼氏菌的生长。
37、2、本专利技术在培养基中加入的动物蛋白肽是易获得的，酶解动物蛋白肽的制备操作简便，制备时间短，对后期阿克曼菌的工业化生产奠定了一定的基础；相较于常规技术中阿克曼氏菌培养基中加入的胃粘蛋白，本专利技术的动物蛋白肽稳定性更好，在菌的生长过程中更易被吸收利用率更高，极大促进了阿克曼氏菌的生长，且得到的阿克曼氏菌平台期维持时间更久，菌的稳定性较高不易衰亡。
38、3、本专利技术制备的培养基由于将动物蛋白进行酶解，以肽的方式添加至培养基中，该方法制备的培养基与添加了纯化黏蛋白的培养基相比更加的澄清，且经高压灭菌锅灭菌后不会产生蛋白沉淀，培养过程中更易于观察菌的生长状态，对菌的生长促进作用更加优异。
39、4、本专利技术制备的培养基通过添加壳聚糖、鼠李糖、唾液酸、半乳糖4种益生元，在保证阿克曼菌生长效果的前提下，提高了培养基的安全性。
40、本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
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1.一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，其特征在于，培养基中包括0.5～10g/L的动物蛋白肽、40g/L的脑心浸液培养基、0.5mg/L的刃天青和1g/L的L-半胱氨酸盐酸盐。
2.如权利要求1所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，其特征在于，培养基中包括：
3.如权利要求1所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，其特征在于，培养基中包括：
4.如权利要求2~3任一项所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，其特征在于，动物蛋白肽的制备方法为：
5.一种如权利要求2所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.一种如权利要求3所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，其特征在于，培养基中包括0.5～10g/l的动物蛋白肽、40g/l的脑心浸液培养基、0.5mg/l的刃天青和1g/l的l-半胱氨酸盐酸盐。
2.如权利要求1所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，其特征在于，培养基中包括：
3.如权利要求1所述的嗜黏蛋白阿克曼氏菌培养基，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：逄晓阳，吕加平，孟祥宇，张书文，王筠钠，李旭，谢宁，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：
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