The invention provides a multiplex PCR method for detecting foodborne pathogenic bacteria in micro ecological live bacteria preparation. The method mainly adopts multiple PCR technology, in which a plurality of specific primers are added in the same reaction system, and the PCR reaction of multiple nucleic acid fragments is amplified simultaneously. The invention of Salmonella, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus niger seven common foodborne pathogen specific primers in the same system and amplified seven bands, and the specificity of each other well, the detection limit of 200fg/ L (the template concentration), the concentration of bacteria was 120CFU/mL, can meet the food safety standards, common pathogenic bacteria can cause pathogenic effect reached 1000CFU/mL. So it is a high sensitivity, fast and simple method, and the cost is very low.
【技术实现步骤摘要】
一种多重PCR检测微生态活菌制剂中食源性致病菌的方法1
本专利技术涉及食品安全性检测领域,具体地说,涉及一种多重PCR技术检测微生态活菌制剂中是否食源性致病菌超标的方法。2
技术介绍
食源性疾病是指通过摄食而进入人体的有毒有害物质(包括生物性病原体)等致病因子所造成的疾病。一般可分为感染性和中毒性,包括常见的食物中毒、肠道传染病、人畜共患传染病、寄生虫病以及化学性有毒有害物质所引起的疾病。食源性致病菌能引起食源性疾病或者食物中毒,甚至会影响人类的人身安全,造成重大经济财产损失,降低人们的生活质量。据世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)报道,全球每年发生腹泻病的病例数高达1.5亿,其中70%病例与各种致病性微生物污染的食品有关。我国的研究资料也显示,微生物是食源性疾病的主要病原,占46.4%。食品中的生物性污染无论在发达国家还是发展中国家都是影响食品安全的最主要原因。食品安全是全球性的重大公共卫生问题。致病微生物污染带来的食品安全事故也不断的被报道,如英国的疯牛病、法国的李斯特氏菌病、日本的肠出血性大肠杆菌O157:H7和雪印牛奶的葡萄球菌肠毒素中毒事件、我国安徽阜阳劣质婴幼儿配方粉事件等。国家依据“食源性疾病监控技术的研究”建立了全国食源性疾病监测网络,对食品中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠埃希菌O157:H7等目前国际公认的食源性致病菌进行了监测和预警,以期为有针对性地预防和控制食源性疾病的发生提供参考。目前食源性致病菌的检测方法过主要是通过化学、微生物学、生物物理学、免疫学以及血分子生物学技术对食源性致病菌进行检测 ...
【技术保护点】
一种多重PCR检测微生态活菌制剂中食源性致病菌的方法,其特征在于,所述方法为:根据设计的特异性引物能用多重PCR快速高效的检测乙型副伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌七种。
【技术特征摘要】
1.一种多重PCR检测微生态活菌制剂中食源性致病菌的方法,其特征在于,所述方法为:根据设计的特异性引物能用多重PCR快速高效的检测乙型副伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌七种。2.根据权利要求1所述的一种多重PCR检测微生态活菌制剂中食源性致病菌的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:1)微生态活菌制剂的再水化:准确称取微生态活菌制剂0.05g,于EP管中,加入0.95mL灭菌PBS缓冲液,37℃摇床100rpm缓慢摇晃30min;2)基因组提取:使用基因组提取试剂盒进行提取;3)引物合成:根据本发明所设计的各种常见致病菌的引物,进行引物合成;4)用多重PCR致病菌检测:将处理后的微生态制剂为模板,同时加入乙型副伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的特异性引物为引物进行多重...
【专利技术属性】
技术研发人员:房学迅,李庆超,于大海,杨吉雨,
申请(专利权)人:吉林大学,
类型:发明
国别省市:吉林,22
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