一种分离溶菌酶的方法技术

本发明专利技术分离溶菌酶的方法，以鸡蛋清为原料，加水适当稀释后，搅拌均匀，加酸调ｐＨ值至４．０－５．０，静置、过滤除去沉淀，将滤液升温至７５－８０℃，冷却至室温，静置不少于１０小时，过滤得上清液，加碱调ｐＨ值为７．５－８．０，加乙醇至产生白色沉淀，过滤，冲洗，干燥即得产品；本方法工艺步骤简、生产周期短、溶菌酶得率高；所制得的溶菌酶可用作防腐用的食品添加剂。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及溶菌酶分离方法
为防止食品因污染微生物而腐败，通常采用添加化学合成的防腐剂来抑止细菌增殖以延长食品的保藏期限。这些添加的化学物质，大多数对人体有一定的毒性或副作用。寻找天然无毒防腐剂，是科技工作者长期以来共同努力的目标。《食品科学》(1994年第11期第37-40页)指出，溶菌酶是一种天然的蛋白质，它能溶解许多细菌的细胞壁，引起溶菌现象，既具有防腐功能，又对人体无副作用，具有很大的应用价值。《食品科学》(1995年第12期第6-9页)报道，鸡蛋蛋清中含溶菌酶较为丰富，其含量约占蛋清的3.5-4％，还有96％左右的蛋白质无溶菌活性而成为杂蛋白。据美国《食品科学杂志》(Journal of Food Science，1986年第4期第1032-1036页)、《食品科学》(1995年第12期第6-9页)以及日本公开特许公报昭61-134323报道，现有溶菌酶的分离方法有亲和层析法、离子交换法、沉淀法和沉淀与层析结合法。亲和层析法和离子交换法都需经过对载体预处理后装柱、原料上柱吸附、缓冲液洗涤、洗脱液洗脱、产品盐析透析、冻干、载体清洗再生等操作过程，步骤多、周期长，溶菌酶得率低，仅为40-45％；沉淀法和沉淀与层析结合法也同样存在步骤多、周期长的缺点。本专利技术的目的是提出一种工艺步骤简短、得率高、成本低，操作易行的溶菌酶分离方法，以克服现有技术的上述缺点。本专利技术分离溶菌酶的方法，其特征在于以鸡蛋清为原料，加水适当稀释后，搅拌均匀，加入重量浓度为5-10％的酸调PH值至4.0-5.0，静置，过滤除去沉淀；将滤液升温至75-80℃，冷却至室温，静置不少于10小时，过滤得上清液，加入重量浓度为1-5％的碱溶液调PH值至7.5-8.0，再加入乙醇至产生白色沉淀，静置6-10小时；过滤，将沉淀用无水乙醇冲洗，干燥即得产品。所述在鸡蛋清中加水适当稀释，是为了降低蛋白质水溶液的粘度，有利于调PH值或加热后使杂蛋白沉降，从而达到杂蛋白与溶菌酶分离之目的。所述调PH值用的酸选用重量浓度为5-10％的食用级盐酸、柠檬酸或乳酸；所述调PH值用的碱选用重量浓度为1-5％的食用级NaOH、Na2CO3或NaHCO3水溶液。酸、碱溶液的浓度太大会破坏蛋白质溶菌酶的活性。通过检测可知，蛋清中蛋白质，除溶菌酶外，其它蛋白质的等电点大都在PH4.0-5.0之间，而溶菌酶的等电点高达PH10.7-11.0，因此，本专利技术采用了等电点沉淀方法，加酸调PH值至4.0-5.0，使大部分杂蛋白沉淀除去，则溶液中所剩下的蛋白质主要为溶菌酶；由于溶菌酶具有耐热性，在酸性条件下能经受较长时间的高温处理而不丧失活性，而杂蛋白则在受热到75℃时就会变性而沉淀，因此本专利技术方法采用了短时加热溶菌酶溶液至75-80℃使杂蛋白变性沉淀冷却后，可用一定浓度的酒精取代水与溶菌酶形成氢键，降低溶菌酶的溶解性，从而可沉淀溶菌酶。采用本专利技术方法分离溶茵酶，整个过程在室温下24小时即可完成，工艺步骤简短、操作简单易行；原材料消耗少，杂蛋白可回收利用，溶菌酶收率高，成本低所得的溶菌酶呈乳白色晶体，味甜，适用于防腐用的食品添加剂，对食品无不良反应。将采用本专利技术方法所得的溶菌酶按一定比例加入新鲜牛奶和涂布在馒头上，与未使用溶菌酶的新鲜牛奶和馒头进行对比试验，结果证明用本方法所制溶菌酶具有良好的防腐作用。本专利技术方法与传统离子交换树脂法比较 由此可见，采用本专利技术方法分离溶菌酶，工艺步骤简、生产周期短、溶菌酶得率高；所制得的溶菌酶可用作防腐用的食品添加剂，防腐效果好。以下是本专利技术的实施例。实施例1取鲜鸡蛋清1.5公斤，加去离子水3.0公斤稀释以降低粘度，搅拌均匀后，加入重量浓度为10％的食用盐酸调PH值至4.0，此时有白色沉淀产生，停止加酸，静置1小时，过滤除去沉淀；将滤液移至水浴上加热至75℃，保持3分钟，取下装滤液的容器，用自来水在容器外面淋冷至室温，静置10小时后，用滤纸过滤，取出上清液，用重量浓度为4％的NaOH水溶液将滤液调PH值至7.5，加入体积浓度为95％的食用级乙醇至产生沉淀，静置8小时后用滤纸过滤，将沉淀用无水乙醇冲洗，真空下干燥，得到呈乳白色的晶体，味甜，即为产品溶菌酶。在室温25±3℃，平均湿度46％的实验环境下，在100ml新鲜牛奶中加入0.2克溶菌酶，搅拌使其溶解，另外在100ml新鲜牛奶中不加任何东西作对照，每天观察其外观变化；在相同环境条件下，按0.1％(与馒头的重量比)的比例取0.2克溶于10ml去离子水中搅拌成糊状涂布于一片馒头上，另一片不加任何东西作对照，每天观察其外观变化。结果如下表1牛奶的防腐对比实验 上表中(-)表示无变化，(+)表示有异味，(++)表示上层变绿色，(+++)表示溶液分层。表2面食馒头的防腐对比实验 上表中(-)表示无变化，(+)表示有馊味，(++)表示出现霉点，(+++)表示出现大片霉点。实施例2取鲜鸡蛋清1.5公斤，加去离子水2.0公斤，搅拌均匀后，加入重量浓度为6％的食用柠檬酸调PH值至4.5，此时有白色沉淀产生，停止加酸，静置2小时，过滤除去沉淀，将滤液移至水浴上加热至75℃，保持3分钟，取下容器，用自来水在容器外面淋冷至室温，静置12小时后，用滤纸过滤取出上清液，用重量浓度为5％的NaHCO3水溶液将滤液调至PH 8.0，加入体积浓度为95％的食用级乙醇至产生沉淀，静置10小时后用滤纸过滤，将沉淀用无水乙醇冲洗，真空下干燥即得成品溶菌酶。将本实施例所得的溶菌酶采用与实施例1相同的方式作防腐对比试验，结果与实施例1的相同。实施例3取鲜鸡蛋清1.5公斤，加去离子水3.0公斤，搅拌均匀后，加入重量浓度为10％的食用乳酸调PH值至5.0，此时有白色沉淀产生，停止加酸，静置1.5小时，过滤除去沉淀，将滤液移至水浴上加热至80℃，保持3分钟，取下容器，用自来水在容器外面淋冷至室温，静置10小时后，用滤纸过滤取出上清液，用重量浓度为2％的Na2CO3水溶液将滤液调PH值至8.0，加入体积浓度为95％的食用级乙醇至产生沉淀，静置7小时后用滤纸过滤，并将沉淀用无水乙醇冲洗，真空下干燥即得成品溶菌酶。将本实施例所得的溶菌酶采用与实施例1相同的方式作防腐对比试验，结果与实施例1的相同。权利要求1.，其特征在于以鸡蛋清为原料，加水适当稀释后，搅拌均匀；加入重量浓度为5-10％的酸调PH值至4.0-5.0，静置，过滤除去沉淀；将滤液升温至75-80℃，冷却至室温，静置不少于10小时；过滤取出上清液，加入重量浓度为1-5％的碱溶液调PH值为7.5-8.0；加入乙醇至产生白色沉淀，静置6-10小时，过滤，将沉淀用无水乙醇冲洗，干燥即得产品。2.如权利要求1所述分离溶菌酶的方法，其特征是所述调PH值用的酸选用重量浓度为5-10％的食用级盐酸、柠檬酸或乳酸。3.如权利要求1所述分离溶菌酶的方法，其特征是所述调PH值用的碱溶液选用重量浓度为1-5％的食用级NaOH、Na2CO3或NaHCO3水溶液。全文摘要本专利技术分离溶菌酶的方法,以鸡蛋清为原料,加水适当稀释后,搅拌均匀,加酸调pH值至4.0—5.0,静置、过滤除去沉淀,将滤液升温至75—80℃,冷却至室温,静置不少于10小时,过滤得上清液,加碱调pH值为7.5—8.0,加乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离溶菌酶的方法，其特征在于：以鸡蛋清为原料，加水适当稀释后，搅拌均匀；加入重量浓度为５－－１０％的酸调ＰＨ值至４．０－５．０，静置，过滤除去沉淀；将滤液升温至７５－－８０℃，冷却至室温，静置不少于１０小时；过滤取出上清液，加入重量浓度为１－５％的碱溶液调ＰＨ值为７．５－８．０；加入乙醇至产生白色沉淀，静置６－－１０小时，过滤，将沉淀用无水乙醇冲洗，干燥即得产品。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：文章军，钱生球，
申请(专利权)人：中国科学技术大学，
类型：发明
国别省市：34[中国|安徽]