一种荧光假单胞菌在植物白粉病防治中的应用制造技术

本发明专利技术涉及功能微生物应用技术领域，具体提供了一种荧光假单胞菌在植物白粉病防治中的应用。所述的荧光假单胞菌，保藏编号为CCTCC NO:M 2014274，对单丝壳白粉菌的抑制效果特别显著，抑菌圈直径达到28 mm，能有效防治黄瓜、草莓和烟草的白粉病。本发明专利技术提供的含荧光假单胞菌微生物制剂可开发成生物农药，专门用于植物白粉病的防治，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物病害防治
，具体涉及一种荧光假单胞菌在植物白粉病防治中的应用。
技术介绍
随着植物种类的不断增多，植物栽培方式的不断多样化，植物病害日趋严重，而传统的化学防治方法存在着许多弊端，比如：化学农药的大量使用引起了严重的环境污染，农产品的农药残留也越来越严重，病菌抗药性产生速度也越来越快等一系列对人民生活有害的影响。在当今倡导低碳经济、环保节约型社会中，寻求能保护人类生活又可增产的新技术十分适应当今社会的发展。生物防治是利用一种生物或其产物对付另外一种生物的方法，分为以虫治虫、以菌治虫、以菌治菌三大类。它利用了生物物种间的相互关系，以一种或一类生物或其产物抑制另一种或另一类生物。生物防治的方法有很多，微生物防治就是其中一种。微生物防治主要是利用有益的微生物，通过生物间的竞争作用、抗生作用、寄生作用、溶菌作用及诱导抗性等，来抑制某些病原物的存活和活动，其优越性在于资源丰富、选择性强、无残留、无污染、成本低，兼防兼治、增产增收、保持生态平衡，起到长效的作用。生防菌的种类繁多，生产上广泛应用的主要是真菌和细菌。生防真菌主要包括木霉菌、毛壳菌、青霉菌、厚壁孢子轮枝菌及菌根真菌、盾壳霉、粘帚霉等，已知的木霉菌至少可寄生18属29种植物病原菌，如核盘菌属、长孺孢属、镰刀菌属、蜜环菌属、炭疽菌属、丝核菌属、轮枝孢属、黑星菌属；毛壳菌具有降解纤维素、有机质特性，鉴于此，其广泛应用于植物病原菌的生物防治方面，其中，球毛壳菌、角毛壳菌均可以较好地预防甘蔗猝倒病，以及较好地防治番茄枯萎病和苹果斑点病的发生，对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌有抑制作用，此外，球毛壳菌还可以较好地保护谷物、燕麦和大麦免受由雪腐镰刀菌和禾旋孢霉引起的幼苗枯萎。生防细菌一般包括芽孢杆菌属、游动放线菌属、假单孢菌属、黄单孢菌属、链霉菌属、土壤杆菌属、产碱菌属、节杆菌属、固氮菌属、欧文氏菌属、黄杆菌属、小单孢菌属和根瘤菌属。其中枯草芽孢杆菌C-22对棉花炭疽病菌、枯萎病菌、立枯病菌、黄萎病菌、棉花疫霉病菌和棉花叶斑病菌均有较好的抑制作用；枯草芽孢杆菌XG-1对西瓜枯萎病菌菌丝生长具有较强的抑制作用，同时，枯草芽孢杆菌Henu11对禾谷丝核菌具有较好的抑制作用。目前，生防菌在植物病害防治中存在自然条件下定殖能力差、抗药能力弱及防治效果不稳定等问题，因此进一步筛选性能优良、稳定性好的微生物菌种用于防治植物病害，是目前本领域内的研究重点。
技术实现思路
本专利技术为解决现有技术问题，提供了一种防治植物病害的方法。所述方法是通过在植物叶面施用含荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）的微生物制剂，有效抑制恶苗病和白粉病，效果显著。本专利技术一方面提供了一种微生物制剂，是通过将荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）进行发酵制备得到的。所述荧光假单胞菌优选荧光假单胞菌HF-3（PseudomonasfluorescensHF-3），已于2014年6月24日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO:M2014274。所述微生物制剂的制备方法，包括如下步骤：将荧光假单胞菌接种至摇瓶中的LB液体培养基中，28～30℃、转速为150rpm条件下培养18h，获得液体发酵种子；将液体发酵种子接种到装有液体发酵培养基的发酵罐中，28～30℃、接种量5～10％，发酵罐搅拌速度130～180rpm，通气量5～10％的条件下，发酵24～48h，即得到含荧光假单胞菌的微生物制剂。所述液体发酵培养基中各组分及其含量分别为：麦芽糖30g/L，葡萄糖3g/L，酵母膏5g/L，硫酸铵4.5g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4.7H2O0.05g/L，CaCl20.02g/L，NaCl0.15g/L。本专利技术一方面提供了一种防治植物病害的方法，是通过在植物叶面施用上述包含荧光假单胞菌的微生物制剂实现的。所述植物病害为白粉病。所述微生物制剂为液体制剂。所述微生物制剂中荧光假单胞菌的活菌数超过109CFU/mL。所述防治植物病害的方法，具体为：将上述包含荧光假单胞菌的微生物制剂稀释0-900倍，按10-15mL/m2的用量将含荧光假单胞菌的微生物制剂均匀喷洒在植物叶面上；7-10天后再按相同用量喷洒一遍；连用3-5次。本专利技术提供的含荧光假单胞菌微生物制剂对尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、白腐垫壳孢菌和粉红单端孢菌的抑制效果不明显，但其对单丝壳白粉菌的抑制效果特别显著，抑菌圈直径达到28mm，能有效防治植物白粉病。所述微生物制剂稀释100倍后，对黄瓜白粉病的防治效率高达95.8%；稀释至900倍时，对草莓白粉病的防治效率仍能高于85%，效果非常显著；稀释300倍后，对烟草白粉病的防治效率超过80%，与化学药物对照组的防治效率相当，取得了意料不到的技术效果。本专利技术提供的含荧光假单胞菌微生物制剂可开发成生物农药，专门用于植物白粉病的防治，应用前景广阔。具体实施方式本专利技术实施例中所述荧光假单胞菌选用荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）HF-3，已于2014年6月24日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO:M2014274。该菌株筛选自烟台东方海洋集团三文鱼循环水养殖废水处理塔内的水样中。现有研究发现该菌株能高效降解养殖废水中的亚硝态氮，具有净化水体的功效。申请人在本专利技术中进一步发现该菌株在植物病害防治方面也有显著的应用效果。下面结合具体实施例进一步阐述本专利技术。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本专利技术技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本专利技术实施例的具体记载。实施例1含荧光假单胞菌微生物制剂的制备方法1、种子液制备将荧光假单胞菌HF-3接种至摇瓶中的LB液体培养基中，28～30℃、转速为150rpm条件下培养18h，获得液体发酵种子；2、发酵方法：将液体发酵种子按5～10％的接种量接种到装有液体发酵培养基（培养基中各组分及其含量分别为：麦芽糖30g/L，葡萄糖3g/L，酵母膏5g/L，硫酸铵4.5g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4.7H2O0.05g/L，CaCl20.02g/L，NaCl0.15g/L）的发酵罐中，28～30℃，130～180rpm，通气量5～10％的条件下，发酵24～48h，即得到含荧光假单胞菌的微生物制剂。其中，荧光假单胞菌的活菌量约为109CFU/mL。实施例2抑菌实验（1）病原菌制备：将尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、白腐垫壳孢菌、粉红单端孢菌和单丝壳白粉菌（由青岛农业大学赠送）的菌块（Φ7mm）分别接于PDA固体培养基中央，30℃培养7d；（2）打孔扩散法筛选：将灭菌后的PDA培养基温度保持在55℃，然后用无菌水轻轻冲洗上述病原菌的斜面获得病原菌孢子悬液，并取适量分别加入PDA培养基中，混匀后倒平板。待凝固后，即制得病原菌含量约为107cfu/ml的PDA固体培养基。用牛津杯在距培养皿中央25mm的对称两侧各打一个孔（Φ7mm），并加入150μl实施例1制备得到的微生物制剂于孔内，每种病原菌设3个平行。将平板放入30℃培养箱，72h后测量抑菌圈的直径本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂是通过将荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）进行发酵制备得到的。

【技术特征摘要】
1.一种微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂是通过将荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）进行发酵制备得到的。2.如权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于，所述的荧光假单胞菌的保藏编号为CCTCCNO:M2014274。3.权利要求1或2所述的微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：将荧光假单胞菌接种至摇瓶中的LB液体培养基中，28～30℃、转速为150rpm条件下培养18h，获得液体发酵种子；将液体发酵种子接种到装有液体发酵培养基的发酵罐中，28～30℃、接种量5～10％，发酵罐搅拌速度130～180rpm，通气量5～10％的条件下，发酵24～48h，即得到含荧光假单胞菌的微生物制剂。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的液体发...

【专利技术属性】
技术研发人员：宗睿，李佩佩，刘鲁民，刘金，
申请(专利权)人：青岛蔚蓝生物集团有限公司，青岛和协生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37