一株沼泽红假单胞菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)DC‑2，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2016677，本发明专利技术菌株为能高效降解苯系物和甲醛的光合细菌，可用于处理苯系物和甲醛污染的污水，对苯系物的耐受浓度高，降解作用强；对甲醛有去除能力，且此菌株培养条件简单，易于工业产业化实施。

A Rhodopseudomonas palustris and its application

The invention discloses a strain of Rhodopseudomonas palustris (Rhodopseudomonas palustris DC) 2, the culture collection center in Chinese typical preservation number is CCTCC NO:M 2016677, the invention strain was capable of Degrading Benzene and formaldehyde in photosynthetic bacteria, can be used for treatment of benzene and formaldehyde pollution sewage, tolerance concentration of BTEX, degradation; removal ability of formaldehyde, and the bacterial culture conditions is simple, easy to implement industrialization.

【技术实现步骤摘要】
一株沼泽红假单胞菌及其应用
本专利技术涉及一株光合细菌沼泽红假单胞菌DC-2及其应用，属于污水处理领域。
技术介绍
苯系物是环境中常见的污染物，有致癌、致畸、致突变毒性，国家有关饮用水的水质标准均将其列为监测项目。长期接触苯即可能慢性中毒，导致再生障碍性贫血以及白血病。其主要污染来源于装潢材料及油漆等行业排放的废气，作为消毒剂应用于医疗卫生、水产行业产生的废水等。目前，净化苯系物的方法主要有化学反应方法、物理吸附技术、植物净化等，但是这些方法存在成本高，处理时间长等缺点。相比之下，微生物对污染物有较强的降解能力、成本低，效果好，而且无二次污染等优点，利用微生物治理苯系物污染已成为了目前重点研究的方向。光合细菌(PhotosyntheticBacteria，简称PSB)是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物的总称。光合细菌广泛分布于自然界的土壤、水田、沼泽、湖泊、江海等处，主要分布于水生环境中光线能透射到的缺氧区。相比真菌来说，光合细菌可在恶劣条件下处理有机物，并且其生命力强，营养要求低，容易培养，生长繁殖速度快，本身无毒，富含蛋白质、类胡萝卜素、维他命，在分解有机物的同时并不会对环境造成二次污染等特点，为微生物治理苯系物污染方面提供了广泛的应用前景。目前国内外关于能降解苯系物的光合细菌报道很少。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供了一株从昆明滇池湿地公园入口处污水中分离筛选得到的光合细菌沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonaspalustris）DC-2，其于2016年11月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址:中国.武汉，武汉大学；保藏编号为CCTCCNO：M2016677。本专利技术另一目的是将上述菌种应用在处理苯系物污染水体中。本专利技术另一目的是将上述菌种应用在处理甲醛污染水体中本专利技术中沼泽红假单胞菌DC-2具有以下微生物学特性：1、本专利技术沼泽红假单胞菌DC-2最适生长的培养基组分为CH3CH2COONa·3H2O8.29g/L、NH4HCO32.0g/L、MgSO4·7H2O0.2g/L、NaH2PO4·H2O0.5g/L、K2HPO40.66g/L、CaCl2·2H2O0.1g/L。2、形态学特征本专利技术菌株DC-2的菌落呈红色、其边缘整齐、表面较光滑湿润，菌落较小且呈圆形；菌株的菌体细胞呈稍弯曲的杆状，且为革兰氏阴性菌，菌体大小为(0.5～0.7)μm×(2～2.5)μm；3、生理生化特征菌株DC-2最适温度为30℃，最适pH值为7～8，最适接种量为20％～25％，且在微氧条件下更适合菌株DC-2的生长；菌株DC-2的生理生化特征如下(见表1)；表1本专利技术菌株的生理生化特征实验项目结果运动性+接触酶试验+吲哚试验+明胶液化试验+H2S生成试验+硝酸盐还原试验+淀粉水解试验+注：“+”代表阳性，“-”代表阴性。4、本专利技术菌种在200-800nm波长范围内有4个特征吸收峰，分别位于375、475、509、590nm处；说明该菌种中含有细菌叶绿素a和类胡萝卜素。5、本专利技术中所述菌株DC-2能够利用乙醇、甘油、葡萄糖、蔗糖、乙酸钠、丙酸钠、硫代硫酸钠、碳酸氢钠、L-苹果酸、L-谷氨酸等为碳源来进行生长繁殖；能够利用蛋白胨、酵母膏、氯化铵、硫酸铵、硝酸铵、磷酸二氢铵、碳酸氢铵、硝酸钠等为氮源来进行生长繁殖，菌株DC-2可利用碳源和氮源范围广。6、本专利技术中所述菌株DC-2，其16SrDNA序列具有SEQIDNO：1所示的核苷酸序列，将所测得的16SrDNA序列在GenBank数据库中进行同源比对，比对结果显示和RhodopseudomonaspalustrisDX-1CP002418.1的相似性99％，确定该菌种为沼泽红假单胞菌，命名为DC-2。本专利技术的优点及效果：通过对该菌株的生理活性进行研究，用分子生物学方法确定它的分类地位；证明本专利技术提供的沼泽红假单胞菌具有以下优点：生长速度快、生长力强、可利用碳源和氮源范围广等优点；并且该菌株对苯和甲醛的耐受浓度及去除效果较好，能将8mM/L的苯和4mM/L的甲醛全部降解；可用于处理苯系物和甲醛污染的污水，且此菌株培养条件简单，易于工业产业化实施。附图说明图1为本专利技术菌株形态学示意图；图2为本专利技术菌株DC-2的显微示意图；图3为菌株DC-2吸收光谱；图4为不同碳源对菌株DC-2生长的影响；图5为不同氮源对菌株DC-2生长的影响；图6为菌株DC-2根据16SrDNA序列所作的系统进化树；图7为温度对菌株DC-2生长的影响；图8为pH值对菌株DC-2生长的影响；图9为接种量对菌株DC-2生长的影响；图10为氧气对菌株DC-2生长的影响；图11为不同苯浓度下菌株DC-2的生长情况；图12为不同苯浓度下菌株DC-2净化苯的能力。图13为不同甲醛浓度下菌株DC-2的生长情况；图14为不同甲醛浓度下菌株DC-2净化甲醛的能力。具体实施方式下面通过实施例和附图对本专利技术作进一步详细说明，但本专利技术保护范围不局限于所述内容。实施例中方法如无特殊说明，按常规操作进行，如无特殊说明使用试剂均为常规购试剂或按常规方法配制的试剂。实施例1：沼泽红假单胞菌DC-2的分离、纯化和鉴定1、将从昆明滇池湿地公园入口处采集到污水除杂后，倒入装有500mL富集培养液(配方NaCl2.5g、MgSO4·7H2O0.05g、NH4Cl1.0g、NaHCO32.5g、KH2PO42.75g、CH3COONa6g、酵母粉2g，蒸馏水1000mL，pH值为7.0)的矿泉水瓶中，混合均匀，封口；最后置于28℃，60W白炽灯下光照培养7-8天；待培养液变成红色或者血红色，吸出50mL红色液体，倒入装有新鲜富集培养液的矿泉水瓶中，连续富集培养2-3次；用RCVBN培养液(配方为CH3COONa5.0g、CH3CH2COONa3.0g、NaCl2.5g、MgSO4·7H2O1.5g、(NH4)2SO40.5g、KH2PO41.5g、K2HPO40.6g、CaCl20.05g、MnSO45mg、FeSO45mg、酵母膏0.5g、蛋白胨20mg、谷氨酸0.5mg、H2O1000mL、pH7.0)对富集液中的光合细菌进行筛选分离；用1mL移液管取不同稀释度的样品菌液(10－5、10－6、10－7、10－8CFU/mL)加到灭菌的试管中，后加入15mL灭菌的45℃光合细菌分离培养基(乙酸钠3.0g、酵母膏3.0g、氯化钙0.3g、硫酸镁0.5g、调节pH值至7.4，底层培养基：琼脂0.8％、上层培养基：琼脂1％)，混合均匀后，倒入平皿；待培养基冷凝后，上层加5mL分离培养基，冷却后置于28℃60W的白炽灯照射下培养7天，如果菌落不明显，则继续培养；挑取红色不同形态菌落，采用双层平板法，用纯化培养基反复划线纯化2～3次，将获得了纯净单菌落(见图1)。图为菌株DC-2双层平层法照片，由图可以看出菌株DC-2的菌落，呈红色、其边缘整齐、表面较光滑湿润，菌落较小且呈圆形。2、用灭菌的牙签挑取平板上的纯培养物，转入装有RCVBN培养液的25mL厌氧管中，混合均匀，装满密封，置于28℃，60W白炽灯下光照培养7-8天；待培养液变成血红色。3、对平板上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)DC‑2，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2016677。

【技术特征摘要】
1.一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)DC-2，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：李昆志，雷玉珠，包燚，唐彧文，陈丽梅，徐慧妮，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：云南,53