【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种选择性生物催化氢化组合物及其合成(3R,5S)-3,5,6-三羟基己酸叔丁酯的方法。具体来说,本专利技术属于医药中间体制备
,具体来说,本专利技术涉及生物催化合成降血脂药物罗素伐他汀手性中间体(3R,5S)-3,5,6-三羟基乙酸叔丁酯。
技术介绍
以胆固醇和甘油三酯水平过高或伴有血清高密度脂蛋白胆固醇水平过低为特征的高脂血症是引起动脉粥样硬化进而导致冠心病、高血压和脑血管疾病的主要原因。羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂类降脂药是目前降低胆固醇的首选药物。他汀类药物就是通过抑制HMG-CoA还原酶的通路效率来限制体内胆固醇的代谢途径,降低血浆中胆固醇和脂蛋白水平,从而起到降血脂的作用。目前已上市或正处于开发中的他汀类药物有洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、罗素伐他汀、匹伐他汀等多种。其中,罗素伐他汀是2003年上市,降低胆固醇的能力优于同类他汀类药物的新型降脂药,该药物自上市以来年销售额已远超过60亿美元,该药疗效好、安全性高、市场前景乐观。罗素伐他汀上市后,各种合成该药物及其中间体的制备方法不断公开。美国专利US5399722提供了一种制备(3R,5S)-3,5,6-三羟基己酸叔丁酯的方法:以4-氯乙酰乙酸乙酯为原料,经苄氧化后用RuCl2[(R)-BINAP]催化氢化,然后经克莱森酯缩合增长碳链,再用三乙硼不对称还原3号 ...
【技术保护点】
一种选择性生物催化氢化组合物,其特征在于,包括葡萄糖脱氢酶、酮基还原酶和辅酶。
【技术特征摘要】
1.一种选择性生物催化氢化组合物,其特征在于,包括葡萄糖脱氢酶、酮
基还原酶和辅酶。
2.如权利要求1所述的选择性生物催化氢化组合物,其中底物:葡萄糖脱
氢酶:酮基还原酶:辅酶的加入比例为1kg:(0.5kg-0.6kg):(1kg-1.2kg):
(0.00030kg-0.00032kg);所述辅酶为NAD+,NADP+中的一种。
3.如权利要求1或2所述的选择性生物催化氢化组合物,其中所述酮基还
原酶或葡萄糖脱氢酶的培养方法均如下:将重组的大肠杆菌接种到斜面培养基
上,之后进行一级培养、二级培养、发酵罐培养、经过后处理得到酮基还原酶
或葡萄糖脱氢酶;其中所述一级培养、二级培养以及发酵罐培养的温度为25℃
-35℃,发酵液pH为6.5-7.5,优选一级培养、二级培养以及发酵罐培养的温
度为30℃,发酵液pH为7.0。
4.如权利要求3所述的选择性生物催化氢化组合物,其中所述发酵罐培养
通过检测OD600确定是否结束发酵,优选所述OD600为0.6-0.8时,且不再增长
时,结束发酵。
5.如权利要求3或4所述的选择性生物催化氢化组合物,其中所述酮基还
原酶或葡萄糖脱氢酶的二级培养后进行处理的过程均是:将二级培养液离心,
收集菌体,并称量菌体湿重,然后按质量体积比为m菌体:v缓冲液=1:(5~
10)的浓度超声/高压破碎;破碎完全后,离心收集液体,即得酮基还原酶粗
酶液或葡萄糖脱氢酶粗酶液;将得到的酮基还原酶粗酶液经絮凝、添加防腐剂、
添加保护剂后得酮基还原酶或葡萄糖脱氢酶。
6.如权利要求5所述的选择性生物催化氢化组合物,其中在所述二级培养
的过程中,超声破碎时间为15-20分钟;所述的絮凝过程加入絮凝剂的量为
2.5‰-3.5‰,所述比例是质量体积比,即1000ml粗酶液中加入2.5g-3.5g的絮
凝剂;所述防腐剂为N-羟甲基甘氨酸钠,其添加量为3‰-5‰,所述比例是质
量体积比,即1000ml粗酶液中加入3g-5g的防腐剂;所述保护剂为丙三醇,
其添加量为20%-40%,该比例是体积比,即100mL粗酶液加入20-40mL丙三
\t醇。
7.如权利要求3-6任一项所述的选择性生物催化氢化组合物,其中所述一
级培养、二级培养以及发酵罐培养的培养基成分为:蛋白胨10g/L-12g/L,酵
母抽提物20g/L-24g/L,甘油3g/L-5g/L,磷酸二氢钾1.8g/L-2.2g/L,磷酸氢二
钾14.5g/L-16.5g/L,硫酸镁0.5g/L-1g/L。
8.如权利要求2-7任一项所述的选择性生物催化氢化组合物,所述底物为
(S)-5,6-二羟基-3-氧代己酸叔丁酯,得到的产物为(3R,5S)-3,5,6-三羟基己酸酸
叔丁酯。
9.一种(3R,5S)-3,5,6-三羟基己酸叔丁酯的制备方法,其特征在于,将
(S)-5,6-二羟基-3-氧代己酸叔丁酯与葡萄糖脱氢酶、酮基还原酶和辅酶混合进
行反应制备得到(3R,5S)-3,5,6-三羟基己酸叔丁酯。
10.如权利要求9所述制备方法,其中所述(S)-5,6-...
【专利技术属性】
技术研发人员:戴秋红,俞学锋,李知洪,姚鹃,邹林汉,余华顺,李明,付坤林,平磊,
申请(专利权)人:安琪酵母股份有限公司,
类型:发明
国别省市:湖北;42
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。