一种快速检测转基因大豆MON89788的实时荧光PCR方法技术

一种快速检测转基因大豆MON89788的实时荧光PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：1）制样与DNA提取取大豆或其加工产品的样品，粉碎，用常规核酸提取方法提取DNA，确保DNA纯度应符合PCR检测要求；2）实时荧光PCR反应体系为25μL：2?5μL的DNA模板，12.5μL?LightCycler?480?Probes?Master，0.75μL引物MON89788?F、0.75μL引物MON89788?R，0.5μL探针MON89788?P，去离子水补齐体积；反应条件为：预变性95℃?10min；变性95℃?15s，退火延伸60℃?1min，45个循环；同时设置阴阳性对照与空白对照，阳性对照为质粒标准分子pMD19T?MON89788，阴性对照为非转基因大豆基因组DNA，空白对照为无菌水；其中，引物与探针序为：引物MON89788?F：5’?CGCTTCAATCGTGGTTATCA?3’，引物MON89788?R：5’?CGAGCAGGACCTGCAGAAG?3’；探针MON89788?P：FAM?CTGAAGGCGGGAAACGACAATCTGA?BHQ1；质粒标准分子pMD19T?MON89788为克隆有SEQ?ID?NO.3所示序列的质粒；3）结果判定质控标准：空白对照无荧光增幅现象；阴性目标DNA对照无荧光增幅现象；阳性目标DNA对照检测Ct值小于或等于34；如有一项不符合者，重复步骤1）和2）；结果判断：待测样品Ct值大于或等于40，设置的对照结果正常者，则判定该样品未检出转基因大豆MON89788；待测样品Ct值小于或等于36，设置的对照结果正常者，则判定该样品检出转基因大豆MON89788；待测样品Ct值在36～40之间，重复步骤2），再次扩增后的结果Ct值仍小于40，且设置的对照结果正常，则可判定该样品检出转基因大豆MON89788；再次扩增后结果Ct值大于40，且设置的对照结果正常，判定该样品未检出转基因大豆MON89788。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种快速检测转基因大豆MON89788的实时荧光PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：1）制样与DNA提取取大豆或其加工产品的样品，粉碎，用常规核酸提取方法提取DNA，确保DNA纯度应符合PCR检测要求；2）实时荧光PCR反应体系为25μL：2?5μL的DNA模板，12.5μL?LightCycler?480?Probes?Master，0.75μL引物MON89788?F、0.75μL引物MON89788?R，0.5μL探针MON89788?P，去离子水补齐体积；反应条件为：预变性95℃?10min；变性95℃?15s，退火延伸60℃?1min，45个循环；同时设置阴阳性对照与空白对照，阳性对照为质粒标准分子pMD19T?MON89788，阴性对照为非转基因大豆基因组DNA，空白对照为无菌水；其中，引物与探针序为：引物MON89788?F：5’?CGCTTCAATCGTGGTTATCA?3’，引物MON89788?R：5’?CGAGCAGGACCTGCAGAAG?3’；探针MON89788?P：FAM?CTGAAGGCGGGAAACGACAATCTGA?BHQ1；质粒标准分子pMD19T?MON89788为克隆有SEQ?ID?NO.3所示序列的质粒；3）结果判定质控标准：空白对照无荧光增幅现象；阴性目标DNA对照无荧光增幅现象；阳性目标DNA对照检测Ct值小于或等于34；如有一项不符合者，重复步骤1）和2）；结果判断：待测样品Ct值大于或等于40，设置的对照结果正常者，则判定该样品未检出转基因大豆MON89788；待测样品Ct值小于或等于36，设置的对照结果正常者，则判定该样品检出转基因大豆MON89788；待测样品Ct值在36～40之间，重复步骤2），再次扩增后的结果Ct值仍小于40，且设置的对照结果正常，则可判定该样品检出转基因大豆MON89788；再次扩增后结果Ct值大于40，且设置的对照结果正常，判定该样品未检出转基因大豆MON89788。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄明，刘欣，祝长青，黄继超，周兴虎，
申请(专利权)人：南京佳邦食品有限公司，
类型：发明
国别省市：