本发明专利技术公开了一种利用农杆菌获得转基因籼稻的方法及其专用培养基。本发明专利技术提供了用于制备转基因植物的试剂盒，包括诱导培养基、感染液体培养基、共培养培养基、恢复培养基、筛选培养基、预分化培养基、分化培养基和生根培养基；本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术针对籼稻9311，优化了植物组培的培养基，其中恢复培养基和筛选培养基中添加了有效的抑菌的抗生素，制备转基因水稻，可以得到转化率较高的转基因植物，因此本发明专利技术获得了适合籼稻9311的PMI/甘露糖筛选系统的遗传转化系统，可以重复稳定获得籼稻9311转基因植株，为基因功能鉴定、安全有效转基因水稻材料的创制奠定技术基础。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种利用农杆菌获得转基因籼稻的方法及其专用培养基。本专利技术提供了用于制备转基因植物的试剂盒，包括诱导培养基、感染液体培养基、共培养培养基、恢复培养基、筛选培养基、预分化培养基、分化培养基和生根培养基；本专利技术的实验证明，本专利技术针对籼稻9311，优化了植物组培的培养基，其中恢复培养基和筛选培养基中添加了有效的抑菌的抗生素，制备转基因水稻，可以得到转化率较高的转基因植物，因此本专利技术获得了适合籼稻9311的PMI/甘露糖筛选系统的遗传转化系统，可以重复稳定获得籼稻9311转基因植株，为基因功能鉴定、安全有效转基因水稻材料的创制奠定技术基础。【专利说明】利用农杆菌获得转基因籼稻的方法及其专用培养基
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种利用农杆菌获得转基因籼稻的方法及其专用培养基。
技术介绍
水稻是单子叶植物基因组研究模式作物，组织培养较易于其他禾本科作物，已建立较完善的遗传转化体系。但多数籼稻品种在愈伤组织继代过程容易褐化，导致分化能力降低；迄今为止，籼稻遗传转化只局限于某些品种，适合不同籼稻品种遗传转化的高效组织培养体系尚未建立。随着转基因作物产业化步伐的加快，植物转基因安全性越来越受到普遍关注，抗生素或除草剂抗性的选择标记基因存留于转基因植物中是转基因产品安全性的一个重要隐患。PMI (6-磷酸甘露糖异构酶6-phosphomannose isomerase)基因作为新型的安全选择标记基因具有筛选率高、生物安全性强等优点，已经越来越广泛地应用于植物转基因的研究中。在水稻遗传转 化中也成功得到应用，并且对影响水稻PMI/甘露糖筛选系统转化效率的因素作了一些研究，只有少数研究以籼稻为材料。籼稻9311是我国杂交水稻的骨干恢复系，在水稻生产上占有重要地位，然而该品种的组织培养力较差，愈伤组织继代过程易褐化，作为植物遗传转化受体对通常的筛选剂较敏感，较难获得转基因植株，同时，籼稻9311相对其它品种农杆菌(EHA105)侵染共培养后抑菌较难，因此，适合籼稻9311的遗传转化系统的筛选成为热点。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供用于制备转基因植物的试剂盒。本专利技术提供的试剂盒，包括诱导培养基、感染液体培养基、共培养培养基、恢复培养基、筛选培养基、预分化培养基、分化培养基和生根培养基；所述诱导培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L的2，4_D (2，4_ 二氯苯氧乙酸)、终浓度为20g/L麦芽糖和终浓度为3g/L植物凝胶组成；所述感染液体培养基由终浓度为2950mg/L KC1、终浓度为150mg/L CaCl2.2H20、终浓度为 250mg/LMg04.7H20、终浓度为 150mg/LNaH2P04.H20、终浓度为 3mg/LH3B03、终浓度为 10mg/LMnS04.H20、终浓度为 0.025mg/LCoCl2.6H20、终浓度为 0.025mg/LCuS04.5H20、终浓度为 2mg/L ZnSO4.7H20、终浓度为 0.25mg/L NaMoO4.2H20、终浓度为 0.75mg/LK1、终浓度为27.8mg/L FeSO4.7H20、终浓度为 37.3mg/LNa2-EDTA.2H20、终浓度为 0.4mg/L维生素B1、终浓度为0.5mg/L维生素B6、终浓度为0.5mg/L烟酸、终浓度为100mg/L肌醇、终浓度为500mg/L水解酪蛋白、终浓度为68.5g/L蔗糖、终浓度为36g/L的葡萄糖、终浓度为176.7mg/L的L-精氨酸、终浓度为900mg/L的L-谷氨酰胺、终浓度为300mg/L的L-天冬氨酸、终浓度为20mg/L的乙酰丁香酮和水组成；所述共培养培养基由CC液体基本培养基、终浓度为10g/L葡萄糖、终浓度为2mg/L2，4-D、终浓度为30g/L蔗糖、终浓度为3g/L植物凝胶和终浓度为20mg/L乙酰丁香酮组成；所述恢复培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L的2，4_D、终浓度为20g/L麦芽糖，终浓度为3g/L植物凝胶、终浓度为0-200mg/L特美汀、终浓度为0_250mg/L头孢霉素组成，所述筛选培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L的2，4_D、终浓度为5g/L蔗糖、终浓度为25g/L甘露糖、终浓度为3g/L植物凝胶、终浓度为0-200mg/L特美汀和终浓度为0-250mg/L头孢霉素组成；所述预分化培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L NAA、终浓度为Img/L6-BA、终浓度为20g/L麦芽糖，终浓度为3g/L植物凝胶和终浓度为5mg/L ABA组成；所述分化培养基由CC液体基本培养基B、终浓度为lmg/L NAA、终浓度为2mg/L6-BA、终浓度为20g/L麦芽糖，终浓度为3g/L植物凝胶和终浓度为lmg/L KT组成；所述生根培养基由终浓度为950mg/L KNO3、终浓度为825mg/L NH4NO3、终浓度为 220mg/L CaCl2.2H20、终浓度为 185mg/L MgO4.7H20、终浓度为 85mg/L ΚΗ2Ρ04、终浓度为.6.2mg/L Η3Β03、终浓度为 16.9mg/L MnSO4.H20、终浓度为 0.025mg/L CoCl2.6H20、终浓度为.0.025mg/L CuSO4.5H20、终浓度为 8.6mg/L ZnSO4.7H20、终浓度为 0.25mg/LNaMo04.2H20、终浓度为 0.83mg/L ΚΙ、终浓度为 27.8mg/L FeSO4.7H20、终浓度为 37.3mg/L Na2-EDTA.2H20、终浓度为0.4mg/L维生素B1、终浓度为0.5mg/L维生素B6、终浓度为0.5mg/L烟酸、终浓度为100mg/L肌醇、终浓度为20g/L蔗糖、终浓度为0.5mg/L NAA、终浓度为3g/L植物凝胶和水组成；所述CC液体基本培养基B为将所述CC液体基本培养基中的36.34g/L甘露醇替换为20g/L山梨醇；每IL 所述 CC 液体基本培养基由 1212mg KN03、640mgNH4N03、588mg CaCl2.2H20、247mg MgO4.7H20、136mg KH2P04、27.8mg FeSO4.7H20、37.3mg Na2-EDTA.2H20、3.1mgH3B03、11.15mg MnSO4.4H20、5.76mg ZnSO4.7H20、0.83mgK1、0.24mg NaMoO4.2H20、.0.025mgCuS04.5H20、0.028mg CoCl2.6H20、6mg 烟酸、8.5mg 维生素 B1、Img 维生素 B6、IOOmg肌醇、300mg水解酪蛋白、2.878g脯氨酸、500mg谷氨酰胺、36.43g甘露醇和水组成,用水补足体积。上述试剂盒还包括洗菌液；所述洗菌液由终浓度为0-200mg/L特美汀、终浓度为0-250mg/L头孢霉素和水组成。上述的试剂盒中，所述恢复培养基、所述筛选培养基和所述洗菌液中的特美汀和头孢霉素的终浓度均如下:终浓度为O或200mg/L特美汀、终浓度为O或200mg/L或250mg/L头孢霉素；所述筛选培养基中的蔗糖和甘露糖的终浓度如下:终浓度为15g/L蔗糖、终浓度为本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于制备转基因植物的试剂盒，包括诱导培养基、感染液体培养基、共培养培养基、恢复培养基、筛选培养基、预分化培养基、分化培养基和生根培养基；所述诱导培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L的2,4?二氯苯氧乙酸终浓度为20g/L麦芽糖和终浓度为3g/L植物凝胶组成；所述感染液体培养基由终浓度为2950mg/L?KCl、终浓度为150mg/L?CaCl2.2H2O、终浓度为250mg/LMgO4.7H2O、终浓度为150mg/LNaH2PO4.H2O、终浓度为3mg/LH3BO3、终浓度为10mg/LMnSO4.H2O、终浓度为0.025mg/LCoCl2.6H2O、终浓度为0.025mg/LCuSO4.5H2O、终浓度为2mg/L?ZnSO4.7H2O、终浓度为0.25mg/L?NaMoO4.2H2O、终浓度为0.75mg/LKI、终浓度为27.8mg/L?FeSO4.7H2O、终浓度为37.3mg/LNa2?EDTA.2H2O、终浓度为0.4mg/L维生素B1、终浓度为0.5mg/L维生素B6、终浓度为0.5mg/L烟酸、终浓度为100mg/L肌醇、终浓度为500mg/L水解酪蛋白、终浓度为68.5g/L蔗糖、终浓度为36g/L的葡萄糖、终浓度为176.7mg/L的L?精氨酸、终浓度为900mg/L的L?谷氨酰胺、终浓度为300mg/L的L?天冬氨酸、终浓度为20mg/L的乙酰丁香酮和水组成；所述共培养培养基由CC液体基本培养基、终浓度为10g/L葡萄糖、终浓度为2mg/L2,4?二氯苯氧乙酸、终浓度为30g/L蔗糖、终浓度为3g/L植物凝胶和终浓度为20mg/L乙酰丁香酮组成；所述恢复培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L的2,4?二氯苯氧乙酸、终浓度为20g/L麦芽糖、终浓度为3g/L植物凝胶、终浓度为0?200mg/L特美汀、终浓度为0?250mg/L头孢霉素组成，所述筛选培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L的2,4?二氯苯氧乙酸、终浓度为5g/L蔗糖、终浓度为25g/L甘露糖、终浓度为3g/L植物凝胶、终浓度为0?200mg/L特美汀和终浓度为0?250mg/L头孢霉素组成；所述预分化培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L?NAA、终浓度为1mg/L6?BA、终浓度为20g/L麦芽糖、终浓度为3g/L植物凝胶和终浓度为5mg/L?ABA组成；所述分化培养基由CC液体基本培养基B、终浓度为1mg/L?NAA、终浓度为2mg/L6?BA、、终浓度为20g/L麦芽糖、终浓度为3g/L植物凝胶和终浓度为1mg/L?KT组成；所述生根培养基由终浓度为950mg/LKNO3、终浓度为825mg/LNH4NO3、终浓度为220mg/LCaCl2.2H2O、终浓度为185mg/LMgO4.7H2O、终浓度为85mg/L?KH2PO4、终浓度为6.2mg/LH3BO3、终浓度为16.9mg/LMnSO4.H2O、终浓度为0.025mg/LCoCl2.6H2O、终浓度为0.025mg/LCuSO4.5H2O、终浓度为8.6mg/L?ZnSO4.7H2O、终浓度为0.25mg/L? NaMoO4.2H2O、终浓度为0.83mg/L?KI、终浓度为27.8mg/L?FeSO4.7H2O、终浓度为37.3mg/L?Na2?EDTA.2H2O、终浓度为0.4mg/L维生素B1、终浓度为0.5mg/L维生素B6、终浓度为0.5mg/L烟酸、终浓度为100mg/L肌醇、终浓度为20g/L蔗糖、终浓度为0.5mg/L?NAA、终浓度为3g/L植物凝胶和水组成；所述CC液体基本培养基B为将所述CC液体基本培养基中的36.34g/L甘露醇替换为20g/L山梨醇；每1L所述CC液体基本培养基由1212mg?KNO3、640mgNH4NO3、588mg?CaCl2.2H2O、247mg?MgO4.7H2O、136mg?KH2PO4、27.8mg?FeSO4.7H2O、37.3mg?Na2?EDTA.2H2O、3.1mg?H3BO3、11.15mg?MnSO4.4H2O、5.76mg?ZnSO4.7H2O、0.83mgKI、0.24mg?NaMoO4.2H2O、0.025mgCuSO4.5H2O、0.028mg?CoCl2.6H2O、6mg烟酸、8.5mg维生素B1、1mg维生素B6、100mg肌醇、300mg水解酪蛋白、2.878g脯氨酸、500mg谷氨酰胺、36.43g甘露醇和水组成，用水补足体积。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：付永彩，侯晶晶，李倩倩，朱颖，谭禄宾，朱作峰，刘凤霞，才宏伟，孙传清，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：
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