一种波缘盘菌菌种分离方法技术

本发明专利技术公开了一种波缘盘菌菌种分离方法，其特征在于，包括如下步骤：配制培养基分注到培养瓶中，盖好瓶盖，经高压灭菌，冷却后放到培养室预培养3天，若没有杂菌污染，才可进行材料的接种；将取来的材料先用自来水冲洗干净后，消毒灭菌后，用无菌滤纸将水吸掉，再切取所需部位，取5毫米大小，然后将材料接种到所得的培养瓶上培养；将接种好的培养瓶放入温度在25℃左右的培养房中培养，7‑10天愈伤组织形成；将形成的愈伤组织分成小块接种到新鲜的PDA培养基上，接种后将其放入25℃左右恒温环境中培养，3‑5天即有菌丝萌发长出，15天菌丝即可满试管。本发明专利技术解决了波缘盘菌菌种难以获得的难题，获得了高纯度波缘盘菌菌种。

【技术实现步骤摘要】
一种波缘盘菌菌种分离方法
本专利技术涉及食用菌领域，具体涉及一种波缘盘菌菌种分离方法。
技术介绍
常规大型食用菌菌种获得方式为组织分离，即从子实体上取出小块组织体放入PDA培养基中培养获得菌丝，所获得的菌丝作为菌种用于生产、种质保藏、功能物质提取等用途。波缘盘菌属盘菌目、盘菌科、盘菌属，其初期杯状，后伸展，边缘完成整和波状向内卷，黄褐色至褐色，外侧近白色，粗糙。波缘盘菌肉质脆，水分含量高达95％左右，子实体层薄，采用传统的组织分离方法无法获得高纯度菌种。高纯度菌种的获得是野生食用菌驯化栽培的关键。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种波缘盘菌菌种分离方法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种波缘盘菌菌种分离方法，包括如下步骤：S1、配制培养基：将土豆煮水，待土豆熟而不烂时，取过滤后液体，将琼脂溶化，再按比例加入磷酸二氢钾、硫酸镁、生长调节物质细胞分裂素和生长素后分注到培养养瓶中，盖好瓶盖，经高压灭菌，冷却后放到培养室预培养3天，若没有杂菌污染，才可进行材料的接种；S2、将取来的新鲜采回来的波缘盘菌子实体先用自来水冲洗十几分钟，刷去其表面的泥垢，冲洗干净后，用70％的酒精浸泡10-15秒钟消毒，接着用无菌水(经高压灭菌的蒸馏水)冲洗3-4次；S3、将经步骤S2表面灭菌后的材料，用无菌滤纸将水吸掉，再用解剖刀切取所需部位，取5毫米大小，然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到步骤S1所得的培养瓶上培养；S4、将接种好的培养瓶放入培养房中培养，培养温度控制在25℃左右，7-10天愈伤组织形成；S5、将形成的愈伤组织分成小块接种到新鲜的PDA培养基上，接种时愈伤组织块不宜小于10mm，接种后将其放入25℃左右恒温环境中培养，3-5天即有菌丝萌发长出，15天菌丝即可满试管，此时即获得高纯度波缘盘菌菌种。优选地，配制1升(1000毫升)培养基时，200克土豆、磷酸二氢钾0.20克、硫酸镁0.20毫克、蔗糖20克和琼脂7克；生长调节物质细胞分裂素和生长素比例在1∶1，细胞分裂素，生长素浓度均为0.25mg/L。优选地，所述步骤S2的操作皆应在接种箱或超净工作台等无菌环境条件中进行。优选地，工具用完即应在95％酒精中蘸一下，或用火焰消毒法消毒，避免工具带菌造成交叉污染。优选地，操作时应穿工作服、戴工作帽，事先洗净手，后再用酒精棉擦试一遍。本专利技术具有以下有益效果：解决了波缘盘菌菌种难以获得的难题，获得了高纯度波缘盘菌菌种，为波缘盘菌实现人工驯化栽培提供优质种源保证。具体实施方式为了使本专利技术的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。以下实施例中PDA培养基配方为：200克土豆、20克琼脂、20克葡萄糖、1000毫升水；本专利技术实施例提供了一种波缘盘菌菌种分离方法，包括如下步骤：S1、配制培养基：将土豆煮水，待土豆熟而不烂时，取过滤后液体，将琼脂溶化，再按比例加入磷酸二氢钾、硫酸镁、生长调节物质细胞分裂素和生长素后分注到培养养瓶中，盖好瓶盖，经高压灭菌，冷却后放到培养室预培养3天，若没有杂菌污染，才可进行材料的接种；S2、将取来的新鲜采回来的波缘盘菌子实体先用自来水冲洗十几分钟，刷去其表面的泥垢，冲洗干净后，用70％的酒精浸泡10-15秒钟消毒，接着用无菌水(经高压灭菌的蒸馏水)冲洗3-4次；S3、将经步骤S2表面灭菌后的材料，用无菌滤纸将水吸掉，再用解剖刀切取所需部位，取5毫米大小，然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到步骤S1所得的培养瓶上培养；S4、将接种好的培养瓶放入培养房中培养，培养温度控制在25℃左右，7-10天愈伤组织形成；S5、将形成的愈伤组织分成小块接种到新鲜的PDA培养基上，接种时愈伤组织块不宜小于10mm，接种后将其放入25℃左右恒温环境中培养，3-5天即有菌丝萌发长出，15天菌丝即可满试管，此时即获得高纯度波缘盘菌菌种。优选地，配制1升(1000毫升)培养基时，200克土豆、磷酸二氢钾0.20克、硫酸镁0.20毫克、蔗糖20克和琼脂7克；生长调节物质细胞分裂素和生长素比例在1∶1，细胞分裂素，生长素浓度均为0.25mg/L。所述步骤S2的操作皆应在接种箱或超净工作台等无菌环境条件中进行。工具用完即应在95％酒精中蘸一下，或用火焰消毒法消毒，避免工具带菌造成交叉污染。操作时应穿工作服、戴工作帽，事先洗净手，后再用酒精棉擦试一遍。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种波缘盘菌菌种分离方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、配制培养基：将土豆煮水，待土豆熟而不烂时，取过滤后液体，将琼脂溶化，再按比例加入磷酸二氢钾、硫酸镁、生长调节物质细胞分裂素和生长素后分注到培养养瓶中，盖好瓶盖，经高压灭菌，冷却后放到培养室预培养3天，若没有杂菌污染，才可进行材料的接种；S2、将取来的新鲜采回来的波缘盘菌子实体先用自来水冲洗十几分钟，刷去其表面的泥垢，冲洗干净后，用70％的酒精浸泡10‑15秒钟消毒，接着用无菌水(经高压灭菌的蒸馏水)冲洗3‑4次；S3、将经步骤S2表面灭菌后的材料，用无菌滤纸将水吸掉，再用解剖刀切取所需部位，取5毫米大小，然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到步骤S1所得的培养瓶上培养；S4、将接种好的培养瓶放入培养房中培养，培养温度控制在25℃左右，7‑10天愈伤组织形成；S5、将形成的愈伤组织分成小块接种到新鲜的PDA培养基上，接种时愈伤组织块不宜小于10mm，接种后将其放入25℃左右恒温环境中培养，3‑5天即有菌丝萌发长出，15天菌丝即可满试管，此时即获得高纯度波缘盘菌菌种。

【技术特征摘要】
1.一种波缘盘菌菌种分离方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、配制培养基：将土豆煮水，待土豆熟而不烂时，取过滤后液体，将琼脂溶化，再按比例加入磷酸二氢钾、硫酸镁、生长调节物质细胞分裂素和生长素后分注到培养养瓶中，盖好瓶盖，经高压灭菌，冷却后放到培养室预培养3天，若没有杂菌污染，才可进行材料的接种；S2、将取来的新鲜采回来的波缘盘菌子实体先用自来水冲洗十几分钟，刷去其表面的泥垢，冲洗干净后，用70％的酒精浸泡10-15秒钟消毒，接着用无菌水(经高压灭菌的蒸馏水)冲洗3-4次；S3、将经步骤S2表面灭菌后的材料，用无菌滤纸将水吸掉，再用解剖刀切取所需部位，取5毫米大小，然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到步骤S1所得的培养瓶上培养；S4、将接种好的培养瓶放入培养房中培养，培养温度控制在25℃左右，7-10天愈伤组织形成；S5、将形成的愈伤组织分成小块接种到新鲜的PDA培养基上，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小艳，王小蓉，袁绍保，姜性坚，
申请(专利权)人：陆良爨乡绿圆菇业有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53