一种甘草子叶诱导组织培养方法技术

本发明专利技术提供一种甘草子叶诱导组织培养方法，其以MS培养基为基础培养基，添加6‑BA (6‑苄氨基腺嘌呤)、2,4‑D（2,4‑二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖，在后期诱导培养中添加增强颜色光源，极大地提高了甘草子叶的诱导率，本发明专利技术具有诱导率高低的优点。

Method for inducing tissue culture of Glycyrrhiza cotyledon

The invention provides a licorice from Cotyledon Explants of tissue culture method, with MS as basic medium, adding 6 BA (6 benzylaminopurine), 2,4 D (2,4 two chlorophenoxyacetic acid), activated carbon, cerium nitrate, vitamin, agar powder and white sugar, late in the trap the color of the light source added enhanced training, greatly improve the induction rate of cotyledons of licorice, the invention has the advantages of high induction rate.

【技术实现步骤摘要】
一种甘草子叶诱导组织培养方法
本专利技术属于甘草组织培养
，尤其涉及一种甘草子叶诱导组织培养方法。
技术介绍
甘草，（学名：GlycyrrhizauralensisFisch）别名：国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子。豆科、甘草属多年生草本，根与根状茎粗壮，是一种补益中草药。对人体很好的一种药，药用部位是根及根茎，药材性状根呈圆柱形，长25～100厘米，直径0.6～3.5厘米。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜阴暗潮湿，日照长气温低的干燥气候。甘草多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带。根和根状茎供药用。传统的甘草获取方法是采挖叶生植物资源，造成水土流失和严重土壤沙漠化。另外，甘草种子主要来自野生甘草，其品种混杂，种子稀缺，发芽率极低，野生资源不适应规模化和标准化生产的需要。同时由于人们破坏性地对叶生甘草采挖，使野生植物几乎灭绝，对甘草的保护性利用迫在眉睫，但由于甘草种植发芽率不高和人们对其此生代谢物的需求，从而使甘草的组织培养对研究和生产具有重要作用。稀土元素是17种特殊的元素的统称，它的得名是因为瑞典科学家在提取稀土元素时应用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是历史遗留下来的名称，稀土是从18世纪末开始陆续发现，当时人们常把不溶于水的固体氧化物称为土，例如，将氧化铝称为“陶土”，氧化钙称为”碱土“等。稀土一般是以氧化物状态分离出来的，当时比较稀少，因而得名为稀土（RareEarth，简称RE或R），然而经过大量的科学研究，在组织培养当中添加了稀土元素会大大地提高组织培养的质量。铈是周期系第ΙΙΙ族副族镧系元素，一种稀土元素。原子序数58。稳定同位素：136、138、140、142。灰色金属，有展性。密度：正方晶体6.9，立方晶体6.7。熔点799℃，沸点3426℃。铈是一种银灰色的活泼金属，粉末在空气中易自燃，易溶于酸。铈的名称来源于小行星谷神星的英文名。铈在地壳中的含量约0.0046%，是稀土元素中丰度最高的。
技术实现思路
基于现有技术中甘草的需求量巨大但供给品质参差不齐，且现有培养基的诱导效率低的问题，本专利技术提供一种甘草子叶诱导组织培养方法，其以MS培养基为基础培养基，添加6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖，在后期诱导培养中添加增强颜色光源，极大地提高了甘草子叶的诱导率，本专利技术具有诱导率高低的优点。一种甘草子叶诱导组织培养方法，其包括以下步骤：步骤S10，按以下配方配制培养基：以MS培养基为基础培养基，添加6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为3mg/L、活性炭的浓度为0.1mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L；步骤S20，选择品质优良、健康的甘草无菌苗作为母本，用手术刀将无菌子叶切出，备用；步骤S30，使用镊子将子叶以伤口向下的竖直方向插入培养基中，将装有子叶的组培瓶密封取出，并转移到组培室中；步骤S40，将组培室中的环境温度调整为25℃～30℃，黑暗培养一周，一周后调整光源为2000～2500Lxs，光照时间为光照12小时/黑暗12小时；步骤S50，在接种后一周添加80%红色增强光源和20%蓝色增强光源。优选地，所述的步骤S10中还包括步骤S11，对培养基进行121℃的高温蒸汽灭菌20分钟。优选地，所述的步骤S50中的增强光源是LED灯，红色增强光源是红色LED灯，蓝色增强光源蓝色LED灯。优选地，所述的步骤S50中的红色光源是波段为650nm-670nm的红光，蓝色光源是波段为450nm-470nm的蓝光。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的描述。一种甘草子叶诱导组织培养方法，其包括以下步骤：步骤S10，按以下配方配制培养基：以MS培养基为基础培养基，添加6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为3mg/L、活性炭的浓度为0.1mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L；步骤S20，选择品质优良、健康的甘草无菌苗作为母本，用手术刀将无菌子叶切出，备用；步骤S30，使用镊子将子叶以伤口向下的竖直方向插入培养基中，将装有子叶的组培瓶密封取出，并转移到组培室中；步骤S40，将组培室中的环境温度调整为28℃，黑暗培养一周，一周后调整光源为2500Lxs，光照时间为光照12小时/黑暗12小时；步骤S50，在接种后一周添加80%红色增强光源和20%蓝色增强光源。作为优选实施例，所述的步骤S10中还包括步骤S11，对培养基进行121℃的高温蒸汽灭菌20分钟。作为优选实施例，所述的步骤S50中的增强光源是LED灯，红色增强光源是红色LED灯，蓝色增强光源蓝色LED灯。作为优选实施例，所述的步骤S50中的红色光源是波段为660nm的红光，蓝色光源是波段为460nm的蓝光。。将已经消毒的外植体接种到培养基中进行常规组织培养作为对照组，然后设置实验组使用本专利技术提供的组织培养方法，20天后统计诱导率得出对照组的诱导率为80%，实验组诱导率为91%，实验组诱导率远远高于对照组。以上所述实施例仅表达了本专利技术的一种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本专利技术专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本专利技术的保护范围。因此，本专利技术专利的保护范围应以所附权利要求为准。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘草子叶诱导组织培养方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤S10，按以下配方配制培养基：以MS培养基为基础培养基，添加6‑BA (6‑苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4‑D（2,4‑二氯苯氧乙酸）的浓度为3 mg/L、活性炭的浓度为0.1 mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L；步骤S20，选择品质优良、健康的甘草无菌苗作为母本，用手术刀将无菌子叶切出，备用；步骤S30，使用镊子将子叶以伤口向下的竖直方向插入培养基中，将装有子叶的组培瓶密封取出，并转移到组培室中；步骤S40，将组培室中的环境温度调整为25℃～30℃，黑暗培养一周，一周后调整光源为2000～2500Lxs，光照时间为光照12小时/黑暗12小时；步骤S50，在接种后一周添加80%红色增强光源和20%蓝色增强光源。

【技术特征摘要】
1.一种甘草子叶诱导组织培养方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤S10，按以下配方配制培养基：以MS培养基为基础培养基，添加6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的浓度为3mg/L、活性炭的浓度为0.1mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为30g/L；步骤S20，选择品质优良、健康的甘草无菌苗作为母本，用手术刀将无菌子叶切出，备用；步骤S30，使用镊子将子叶以伤口向下的竖直方向插入培养基中，将装有子叶的组培瓶密封取出，并转移到组培室中；步骤S40，将组培室中的环境温度调整为25℃～30℃，黑暗培养一周，一周...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：陈志育，
类型：发明
国别省市：广东,44