【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物
，涉及一种抗体辅助的凝集素液相悬浮芯片多重检测糖蛋白糖链结构的新方法；具体涉及抗体辅助的凝集素液相悬浮芯片的制备、抗体辅助的凝集素液相芯片对触珠蛋白(Hp)上的糖型进行多重检测；该方法可对糖蛋白上的糖链结构进行多重检测，提高凝集素芯片技术的通量。
技术介绍
真核蛋白的糖基化是一种普遍、至关重要但复杂的翻译后修饰；糖基化结构的变化在癌症中一种广泛的标志。一些定位于糖链末端的糖，包括唾液酸化Lewisx (sLex)，唾液酸化Tn (sTn)，Globo H，Lewis y (Ley)以及多聚唾液酸会在许多恶性组织中过表达。尽管糖链具有重要的功能，但是针对糖基化的研究却受阻于因其合成缺乏模板而造成的结构异质性和多样性。为了解析糖链，应运而生了许多分析手段如液相色谱、质谱、毛细管电泳等。然而，质谱无法分辨同分异构体并且在解析数据中也存在困难，并且色谱、质谱等传统的糖链结构解析方法由于样品前处理步骤多，重复性不好，并且通量不低，难以应用于大规模的临床样品中糖链结构的分析中。现有技术公开了凝集素芯片技术是一种非常有吸引力的糖链结构解析技...
【技术保护点】
一种抗体辅助的凝集素液相悬浮芯片多重检测糖蛋白糖链结构的方法，其特征是，步骤如下：（1）凝集素与标记有不同染料的磁珠共价偶联，制备凝集素液相芯片，采用清洗缓冲液清洗磁珠后，加入活化缓冲液重悬磁珠；向磁珠内加入50μg/μL?EDC和50μg/μL?sulfo?NHS振荡条件下避光室温反应20分钟；用PBS清洗过量的EDC和sulfo?NHS，并重复清洗过程一次；最后，用PBS重悬活化的磁珠；用PBS配置一系列的凝集素与活化后的磁珠4℃过夜反应；离心去上清后，加入“Stabil?Guard?Choice”无蛋白封闭溶液重悬，室温孵育30分钟；离心后，用贮存缓冲液重悬磁珠；（2...
【技术特征摘要】
1.一种抗体辅助的凝集素液相悬浮芯片多重检测糖蛋白糖链结构的方法，其特征是，步骤如下: (1)凝集素与标记有不同染料的磁珠共价偶联，制备凝集素液相芯片， 采用清洗缓冲液清洗磁珠后，加入活化缓冲液重悬磁珠；向磁珠内加入50 μ g/ μ L EDC和50 μ g/ μ L SUIfO-NHS振荡条件下避光室温反应20分钟；用PBS清洗过量的EDC和sulfo-NHS，并重复清洗过程一次；最后，用PBS重悬活化的磁珠；用PBS配置一系列的凝集素与活化后的磁珠4°C过夜反应；离心去上清后，加入“Stabil Guard Choice”无蛋白封闭溶液重悬，室温孵育30分钟；离心后，用贮存缓冲液重悬磁珠； (2)用氨基反应生物素标记试剂盒标记抗体 将抗体加入到50kDa MWCO离心超滤管超滤，并用清洗溶液清洗；将10 μ LDMSO加入到氨基反应生物素，吹打使其溶解；向超滤管中加入反应缓冲液和氨基反应生物素溶液，于37°C反应10分钟；超滤除去反应液，收集生物素标记的抗体； (3)抗体辅助凝集素液相悬浮芯片反应 向孵育缓冲液中加入糖蛋白和一种或多种磁珠，4°C反应过夜；反应结束后，加入100 μ L清洗缓冲液清洗磁珠；加入20 μ g/孔未被生物素标记的Ig G，进一步封闭未与触珠蛋白结合的凝集素结合位点；室温下孵育30分钟；孵育反应结束后，加入?οομ L清洗缓冲液清洗磁珠，重复3次；加入溶于100 μ L孵育缓...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。