男性不育的生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于诊断男性不育的方法，包含指示男性不育的生物标志物，包含鉴定和检测指示男性不育的生物标志物的方法，还包含用于诊断或检测男性不育的试剂盒。本发明专利技术结合精液常规检查，可实现对男性不育症的准确诊断。

【技术实现步骤摘要】
男性不育的生物标志物及其应用
本专利技术涉及生物标志物，特别是涉及男性不育的生物标志物，包含用于鉴定筛选男性不育相关生物标志物的方法，包含用于检测男性不育生物标志物的方法，还包含用于诊断或检测男性不育的试剂盒。
技术介绍
男性不育已经成为世界范围内的重大公共健康问题。传统的精液常规分析(精子数量、存活力、活动率和形态等常规精液分析)是目前判断男性生育力的常用手段，但是仅仅依靠精液常规分析来预测男性生育状况仍是很不准确的。临床上对绝大部分的男性不育患者的真正不育原因仍然不清楚，尤其是临床上大约有近30%的男性不育患者的常规精液分析结果均正常和接近正常，因此长期以来临床对男性不育的诊断存在很大的困难，主要原因是精子数量、存活力、活动率和形态等常规精液分析指标只能反映最基本的精液质量，而不能反映所有的精子功能，因此需要发现新的生物标志物并辅助传统的精液常规分析，实现对男性不育症的准确诊断。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术提供了一种诊断男性不育的方法，一般涉及体液样品的分析性测试。在一些方面中，包含了用于指示男性不育的生物标志物，包含用于鉴定和检测指示男性不育生物标志物的方法，还包含用于诊断或检测男性不育的试剂盒。本专利技术作为一种辅助诊断方法，可实现对男性不育的准确诊断。在本专利技术的一个方面中，本文提供了一种诊断男性不育的方法，包括: (a)提供男性受试者体液样品，体液样品选自受试者尿液、血清、血浆、血液、精液、精子、精浆、唾液，尤其是尿液； (b)体液样品经过必要的前处理，包括使其保持液体状态，稀释，离心或过滤去除沉淀； (C)通过酶免疫测定或液相色谱-质谱联用技术方法测定受试者体液中乙酰肉碱、天冬氨酸、肉碱C3: 1、酮肉碱、亮氨酰脯氨酸、肉碱C8、甲基黄嘌呤、肉碱C10:2、肉碱C10: 1、腺嘌呤的一种或两种或多种任意组合的指示男性不育生物标志物的水平，并与所对应的参考水平进行比较，其中所述至少一种指示男性不育生物标志物的水平与参考水平的差异指示该受试者患有男性不育。在一个实施方案中，参考水平是指未患男性不育的受试者对照群体中对应的所述体液中对应的所述至少一种指示男性不育生物标志物的水平。在一个实施方案中，所述男性受试者不局限于人类，还包括所有的哺乳动物。在一个实施方案中，所述酶免疫测定是指固相酶免疫测定(ELISA)。在本专利技术的另一方面，本文提供了一种用于鉴定和检测指示男性不育生物标志物的方法，该方法包括: (a)通过液相色谱-质谱联用技术测定患有男性不育受试者群体和未患男性不育受试者群体的体液样品中所有可检测生物标志物的水平； (b)将测得的患有男性不育受试者群体和未患男性不育受试者群体的体液样品中所有可检测生物标志物的水平一一对应进行比较，显著差异的生物标志物被鉴定为指示男性不育的生物标志物。在一个实施方案中，所述体液选自受试者尿液、血清、血楽:、血液、精液、精子、精浆、唾液，尤其是尿液。在一个实施方案中，所述液相色谱-质谱联用方法并不局限于鉴定指示男性不育生物标志物，还包括独立用于指示男性不育生物标志物的测定。在本专利技术的另一方面，本文提供了一种用于诊断检测男性不育的试剂盒，其包括: (a)所述乙酰肉碱、天冬氨酸、肉碱C3:1、酮肉碱、亮氨酰脯氨酸、肉碱CS、甲基黄嘌呤、肉碱C10:2、肉碱C10: 1、腺嘌呤指示男性不育生物标志物的标准品； (b)用于检测所述指示男性不育生物标志物的存在的介质； (c)用于检测所述指示男性不育生物标志物的所述介质的试剂和/或说明书。在一个实施方案中，用于检测所述指示男性不育生物标志物的存在的所述介质为抗体、抗体片段或抗体衍生物。在一个实施方案中，其中所述的抗体、抗体片段或抗体衍生物可特异性地结合于所述指示男性不育生物标志物或其修饰配体。在一个实施方案中，其中所述试剂盒用于测定来自受试者的体液样品中所述乙酰肉碱、天冬氨酸、肉碱C3: 1、酮肉碱、亮氨酰脯氨酸、肉碱C8、甲基黄嘌呤、肉碱C10:2、肉碱C10: 1、腺嘌呤的至少一种指示男性不育生物标志物的水平，并与所对应的参考水平进行比较，其中所述至少一种指示男性不育生物标志物的水平与参考水平的差异指示该受试者患有男性不育。在一个实施方案中，所述参考水平可以通过使用未患男性不育的受试者对照群体来确定，对于人类受试者，一种更常见的测定是来自多个正常个体的结果的统计学组合。在一个实施方案中，所述测定通过固相酶免疫测定(ELISA)进行。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是:(1)检测所需样品为体液，获取方便，避免了机体损伤、射线成像等有害复杂的过程；(2)作为一种辅助诊断方法，结合常规精液检查，可实现对不育症，尤其是对常规精液检查正常而被认为不明原因的不育症的准确诊断。【附图说明】图1为:肉碱C8的ROC分析。实线是肉碱C8风险因子的ROC分析(AUC=0.65，P=4.06E-04);虚线是参比线并且表示0.5的AUC (即无差别)。图2为:肉碱C10:1的ROC分析。实线是肉碱ClO:1风险因子的ROC分析(AUC=0.62，P=L 71E-03);虚线是参比线并且表示0.5的AUC (即无差别)。图3为:肉碱C10:2的ROC分析。实线是肉碱ClO: 2风险因子的ROC分析(AUC=0.64，P=2.30E-04);虚线是参比线并且表示0.5的AUC (即无差别)。图4为:酮肉碱的ROC分析。实线是酮肉碱风险因子的ROC分析(AUC=0.66，P=L 67E-04);虚线是参比线并且表示0.5的AUC (即无差别)。图5为:乙酰肉碱的ROC分析。实线是乙酰肉碱风险因子的ROC分析(AUC=0.69，P=2.11E-03);虚线是参比线并且表示0.5的AUC (即无差别)。图6为:甲基黄嘌呤的ROC分析。实线是甲基黄嘌呤风险因子的ROC分析(AUC=0.65，P=8.77E-04);虚线是参比线并且表示0.5的AUC (即无差别)。图7为:亮氨酰脯氨酸的ROC分析。实线是亮氨酰脯氨酸风险因子的ROC分析(AUC=0.66，P=2.64E-04);虚线是参比线并且表示0.5的AUC (即无差别)。图8为:肉碱C3:1的ROC分析。实线是肉碱C3:1风险因子的ROC分析(AUC=0.68，P=2.19E-06);虚线是参比线并且表示0.5的AUC (即无差别)。图9为:腺嘌呤的ROC分析。实线是腺嘌呤风险因子的ROC分析(AUC=0.61，P=9.63E-04);虚线是参比线并且表示0.5的AUC (即无差别)。图10为:天冬氨酸的ROC分析。实线是天冬氨酸风险因子的ROC分析(AUC=0.68，P=5.22E-05);虚线是参比线并且表示0.5的AUC (即无差别)。【具体实施方式】通过借助以下实施例将更详细说明本专利技术。以下实施例仅是说明性的，本专利技术并不受这些实施例的限制。实施例样品收集 尿液样品来自135名不育症男性患者和158名正常健康男性对照。本文中男性不育症患者为与其配偶经过一年以上没采取避孕措施的正常性生活仍然不育，但其配偶经临床检查被评估为生育功能正常。正常对照为与其配偶一年内正常生育的男性。男性不育患者的平均年龄为29.45+4.47，年龄范围为24-3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于诊断男性不育的方法，其特征在于：（a）检测受试者体液中至少一种指示男性不育生物标志物的水平，其中至少一种指示男性不育生物标志物选自乙酰肉碱、天冬氨酸、肉碱?C3:1、酮肉碱、亮氨酰脯氨酸、肉碱C8、甲基黄嘌呤、肉碱C10:2、肉碱C10:1、腺嘌呤；（b）将所述受试者体液中至少一种指示男性不育生物标志物的水平与参考水平进行比较，其中所述至少一种指示男性不育生物标志物的水平与参考水平的差异指示该受试者患有男性不育。

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断男性不育的方法，其特征在于: (a)检测受试者体液中至少一种指示男性不育生物标志物的水平，其中至少一种指示男性不育生物标志物选自乙酰肉碱、天冬氨酸、肉碱C3: 1、酮肉碱、亮氨酰脯氨酸、肉碱C8、甲基黄嘌呤、肉碱ClO: 2、肉碱C10: 1、腺嘌呤； (b)将所述受试者体液中至少一种指示男性不育生物标志物的水平与参考水平进行比较，其中所述至少一种指示男性不育生物标志物的水平与参考水平的差异指示该受试者患有男性不育。2.根据权利要求1所述方法，其中，所述参考水平是未患男性不育的受试者对照群体中对应的所述体液中对应的所述至少一种指示男性不育生物标志物的水平。3.根据权利要求1-2任一项所述方法，其中，所述体液选自受试者尿液、血清、血浆、血液、精液、精子、精浆、唾液，尤其是尿液。4.根据权利要求1-3任一项所述方法，其中，所述受试者为男性，但不局限于人类，包括其它所有哺乳动物。5.根据权利要求1-4任一项所述方法，其中，所述测定通过酶免疫测定或液相色谱-质谱联用方法测定进行。6.一种用于鉴定和检测指示男性不育生物标志物的方法，其特征在于: (a)测定患有男性不育受试者群体和未患男性不育受试者群体的体液样品中的所有可检测生物标志物的水平； (b)将测得的患有男...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洁，申河清，王展林，
申请(专利权)人：中国科学院城市环境研究所，
类型：发明
国别省市：