一种艾塞那肽的固相片段合成方法技术

本发明专利技术公开了一种艾塞那肽的固相片段合成方法，将艾塞那肽的39个氨基酸分成6段全保护片段，先分别合成6段全保护片段，再将6段全保护片段依次进行固相片段组装连接，得到艾塞那肽树脂，然后切割，得到艾塞那肽粗品，粗品经纯化得到艾塞那肽产品。本发明专利技术克服了现有固相合成艾塞那肽过程复杂、效率低下、纯化困难、规模化困难的问题，提高了合成效率，大量简化了连接步骤，减少杂质累积，为有效解决艾塞那肽合成规模化，提高产品纯度，减小纯化难度提供了一种新方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于固相多肽合成
，具体涉及全固相片段组装合成艾塞那肽。
技术介绍
艾塞那肽是一种含有39个氨基酸的活性多肽，氨基酸序列为=H2N-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-1le-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-COOH,是GLP-1的类似物，能够剌激胰岛β细胞再生，促进胰岛素分泌，抑制胰高血糖素的释放，具有控制血糖功效，艾塞那肽注射液通过减少2型糖尿病患者空腹和餐后血糖浓度，从而改善血糖控制。艾塞那肽的制备方法目前主要采用传统经典的固相多肽合成法，即将39个保护氨基酸从C端到N端依次逐个连接，最后切割得粗肽，纯化得纯品，此法合成效率低、产品含量低、纯化成本高；目前的片段缩合方法有固相液相混合使用，此法要求片段纯度较高，且液相反应过程中杂片段累积对产品含量影响大、过程较繁杂、纯化成本高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于克服传统经典的固相多肽合成法合成长肽效率低、产品含量低、纯化成本高的缺点，以及固相液相混合使用时过程较繁杂、纯化成本高的缺点，提供一种合成效率高、纯化成本低、易流程化、易规模化的全固相片段法合成艾塞那肽的方法。 解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成:1、合成 Fmoc-Gly-Pro-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (tBu) -MBHA Resin(I)合成 Fmoc-Ser(tBu)-MBHA Resin将Fmoc-Rink Amide MBHA Resin用N，N- 二甲基甲酰胺溶胀后，用哌啶与N，N-二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc-两次，加入N，N-二甲基甲酰胺、Fmoc-SeHtBu)_0H、l-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N，N，N' ,N'-四甲基脲四氟硼酸、N，N, - 二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌I~3小时，得到Fmoc-SeHtBu)-MBHAResin0(2)合成 Fmoc-Pro-Ser (tBu)-MBHA Resin将Fmoc-Ser (tBu)-MBHA Resin用哌卩定与N，N- 二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc-两次，加入N，N- 二甲基甲酰胺、Fmoc-Pro_0H、l-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N，N，N' ,N'-四甲基脲四氟硼酸、N，N' - 二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌I~3 小时，得到 Fmoc-Pro-Ser (tBu)-MBHA Resin0(3)合成 Fmoc-Gly-Pro-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (tBu) -MBHA Resin按照步骤(2)的方法向Fmoc-Pro-Ser (tBu)-MBHA Resin上依次连接 Fmoc-Pro-OH、 Fmoc-Pro-OH、 Fmoc-Ala-OHΛ Fmoc-Gly-OH、 Fmoc-Ser(tBu)-ΟΗλFmoc-Ser (tBu) -OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Gly-OH，得到 Fmoc-Gly-Pro-Ser (tBu) -Ser (tBu) -GIy-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-MBHA Resin。2、合成 Fmoc-Lys (Boc) -Asn (Trt) -Gly-COOH(I)合成 Fmoc-Gly-2-CTC resin 将2-chlorotrityl chloride resin用二氯甲焼溶胀后，加入二氯甲焼、Fmoc-Gly-OH、N，N ' - 二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌I~3小时，得到Fmoc-Gly-2-CTCresin。(2)合成 Fmoc-Lys (Boc) -Asn (Trt) -Gly-2-CTC resin按照步骤I中(2)的方法，向Fmoc-Gly-2-CTC resin上依次连接Fmoc-Asn (Trt) -0H、Fmoc_Lys (Boc) -OH,得到 Fmoc-Lys (Boc) -Asn (Trt) -Gly-2-CTC resin。(3)切割处理向Fmoc-Lys (Boc)-Asn (Trt)-Gly-2-CTC resin 中加入切割液，常温搅拌 I ~3 小时，过滤，将滤液加入冷乙醚中，析出沉淀，得到Fmoc-Lys (Boc) -Asn (Trt) -Gly-COOH。上述的切割液是三氟乙酸与二氯甲烷的体积比为1:99或2:98的混合液，或者是三氟乙醇与乙酸、二氯甲烷的体积比为2:1:7的混合液。3、合成 Fmoc-Val-Arg (pbf) -Leu-Phe-1le-Glu (otBu) -Trp-Leu-COOH按照步骤2 中(I)的方法，向 2-chlorotrityl chloride resin 上连接Fmoc-Leu-OH，得到 Fmoc-Leu-2-CTC resin，再按照步骤 2 中(2)的方法向 Fmoc-Leu-2-CTCresin 上依次连接 Fomc-Trp-OH、Fmoc-Glu (otBu)-OH、Fmoc-1le_0H、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg (pbf) -ΟΗλFomc-Val-OH,得到 Fmoc-Val-Arg (pbf) -Leu-Phe-1le-Glu (otBu)-Trp-Leu-2-CTC Resin, Fmoc-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-1le-Glu(otBu) -Trp-Leu-2-CTC Resin按照步骤2中(3)的方法进行切割处理，得到Fmoc-Val-Arg (pbf)-Leu-Phe-1Ie-Glu (otBu)-Trp-Leu-COOH。4、合成 Fmoc-Met-Glu (otBu) -Glu (otBu) -Glu (otBu) -Ala-COOH按照步骤2 中(I)的方法，向 2-chlorotrityl chloride resin 上连接Fomc-Ala-OH,得到 Fmoc-Ala-2-CTC resin,再按照步骤 2 中(2)的方法向 Fmoc-Ala-2-CTCresin 上依次连接 Fomc-Glu (otBu)-OH、Fmoc-Glu (otBu)-OH、Fmoc-Glu (otBu)-0H、Fomc-Met-ΟΗ,得到 Fmoc-Met-Glu (otBu) -Glu (otBu) -Glu (otBu) -Ala-2-CTC Resin，Fmoc-Met-Glu (otBu) -Glu (otBu) -Glu (otBu) -Ala-2-CTC Resin 按照步骤 2 中(3)的方法进行切割处理，得到 Fmoc-Met-Glu (otBu) -Glu (otBu) -Glu (otBu) -Ala-COOH。5、合成 Fmoc-Thr (tBu) -Ser (tBu) -本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种艾塞那肽的固相片段合成方法，其特征在于它由下述步骤组成：（1）合成Fmoc?Gly?Pro?Ser(tBu)?Ser(tBu)?Gly?Ala?Pro?Pro?Pro?Ser(tBu)?MBHA?Resin①合成Fmoc?Ser(tBu)?MBHA?Resin将Fmoc?Rink?Amide?MBHA?Resin用N,N?二甲基甲酰胺溶胀后，用哌啶与N,N?二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc?两次，加入N,N?二甲基甲酰胺、Fmoc?Ser(tBu)?OH、1?羟基苯丙三唑、苯并三氮唑?N,N,N′,N′?四甲基脲四氟硼酸、N,N′?二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌1～3小时，得到Fmoc?Ser(tBu)?MBH?A?Resin；②合成Fmoc?Pro?Ser(tBu)?MBHA?Resin将Fmoc?Ser(tBu)?MBHA?Resin用哌啶与N,N?二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc?两次，加入N,N?二甲基甲酰胺、Fmoc?Pro?OH、1?羟基苯丙三唑、苯并三氮唑?N,N,N′,N′?四甲基脲四氟硼酸、N,N′?二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌1～3小时，得到Fmoc?Pro?Ser(tBu)?MBHA?Resin；③合成Fmoc?Gly?Pro?Ser(tBu)?Ser(tBu)?Gly?Ala?Pro?Pro?Pro?Ser(tBu)?MBHA?Resin按照步骤②的方法向Fmoc?Pro?Ser(tBu)?MBHA?Resin上依次连接Fmoc?Pro?OH、Fmoc?Pro?OH、Fmoc?Ala?OH、Fmoc?Gly?OH、Fmoc?Ser(tBu)?OH、Fmoc?Ser(tBu)?OH、Fmoc?Pro?OH、Fmoc?Gly?OH，得到Fmoc?Gly?Pro?Ser(tBu)?Ser(tBu)?Gly?Ala?Pro?Pro?Pro?Ser(tBu)?MBHA?Resin；（2）合成Fmoc?Lys(Boc)?Asn(Trt)?Gly?COOH①合成Fmoc?Gly?2?CTC?resin将2?chlorotrityl?chloride?resin用二氯甲烷溶胀后，加入二氯甲烷、Fmoc?Gly?OH、N,N′?二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌1～3小时，得到Fmoc?Gly?2?CTC?resin；②合成Fmoc?Lys(Boc)?Asn(Trt)?Gly?2?CTC?resin按照步骤（1）中②的方法，向Fmoc?Gly?2?CTC?resin上依次连接Fmoc?Asn(Trt)?OH、Fmoc?Lys(Boc)?OH，得到Fmoc?Lys(Boc)?Asn(Trt)?Gly?2?CTC?resin；③切割处理向Fmoc?Lys(Boc)?Asn(Trt)?Gly?2?CTC?resin中加入切割液，常温搅拌1～3小时，过滤，将滤液加入冷乙醚中，析出沉淀，得到Fmoc?Lys(Boc)?Asn(Trt)?Gly?COOH；上述的切割液是三氟乙酸与二氯甲烷的体积比为1:99或2:98的混合液，或者是三氟乙醇与乙酸、二氯甲烷的体积比为2:1:7的混合液；（3）合成Fmoc?Val?Arg(pbf)?Leu?Phe?Ile?Glu(otBu)?Trp?Leu?COOH按照步骤（2）中①的方法，向2?chlorotrityl?chloride?resin上连接Fmoc?Leu?OH，得到Fmoc?Leu?2?CTC?resin，再按照步骤（2）中②的方法向Fmoc?Leu?2?CTC?resin?上依次连接Fomc?Trp?OH、Fmoc?Glu(otBu)?OH、Fmoc?Ile?OH、Fmoc?Phe?OH、Fmoc?Leu?OH、Fmoc?Arg(pbf)?OH、Fomc?Val?OH，得到Fmoc?Val?Arg(pbf)?Leu?Phe?Ile?Glu(otBu)?Trp?Leu?2?CTC?Resin，Fmoc?Val?Arg(pbf)?Leu?Phe?Ile?Glu(otBu)?Trp?Leu?2?CTC?Resin按照步骤（2）中③的方法进行切割处理，得到Fmoc?Val?Arg(pbf)?Leu?Phe?Ile?Glu(otBu)?Trp?Leu?COOH；（4）合成Fmoc?Met?Glu(otBu)?Glu(otBu)?Glu(otBu)?Ala?COOH按照步骤（2）中①的方法，向2?chlorotrityl?chloride?resin上...

【技术特征摘要】
1.一种艾塞那肽的固相片段合成方法，其特征在于它由下述步骤组成:(1)合成Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-MBHAResin①合成Fmoc-Ser (tBu)-MBHA Resin 将Fmoc-Rink Amide MBHA Resin用N，N-二甲基甲酰胺溶胀后，用哌啶与N，N-二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc-两次，加入N，N- 二甲基甲酰胺、Fmoc-SeHtBu)-OH、l-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N，N，N' ,N'-四甲基脲四氟硼酸、N，N, - 二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌I~3小时，得到Fmoc-SeHtBu)-MBH AResin ； ②合成Fmoc-Pro-Ser (tBu) -MBHA Resin 将Fmoc-Ser (tBu) -MBHA Resin用哌啶与N，N- 二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc-两次，加入N，N-二甲基甲酰胺、Fmoc-PiO-OHU-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N，N，N' ,N'-四甲基脲四氟硼酸、N，N' - 二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌I~.3 小时，得到 Fmoc-Pro-Ser (tBu)-MBHA Resin ； ③合成Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (tBu)-MBHAResin 按照步骤②的方法向Fmoc-Pro-Ser (tBu) -MBHA Resin上依次连接Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ser (tBu) -ΟΗλ Fmoc-Ser (tBu) -ΟΗλFmoc-Pro-OH、Fmoc-Gly-OH，得到 Fmoc-Gly-Pro-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (tBu)-MBHA Resin ；(2)合成Fmoc-Lys (Boc) -Asn (Trt) -Gly-COOH ①合成Fmoc-Gly-2-CTC resin 将2-chlorotrityl chloride resin用二氯甲焼溶胀后，加入二氯甲焼、Fmoc-Gly-OH、N，N, - 二异丙基乙胺，在氮气保护下，常温搅拌I~3小时，得到Fmoc-Gly-2-CTC resin ；②合成Fmoc-Lys (Boc) -Asn (Trt) -Gly-2-CTC resin 按照步骤(1)中②的方法，向Fmoc-Gly-2-CTC resin上依次连接Fmoc-Asn (Trt) -0H、Fmoc-Lys (Boc) -OH,得到 Fmoc-Lys (Boc) -Asn (Trt) -Gly-2-CTC resin ； ③切割处理 向Fmoc-Lys (Boc)-Asn (Trt)-Gly-2-CTC resin中加入切割液，常温搅拌I~3小时，过滤，将滤液加入冷乙醚中，析出沉淀，得到Fmoc-Lys (Boc) -Asn (Trt) -Gly-COOH ； 上述的切割液是三氟乙酸与二氯甲烷的体积比为1:99或2:98的混合液，或者是三氟乙醇与乙酸、二氯甲烷的体积比为2:1:7的混合液；(3)合成Fmoc-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-1le-Glu(otBu)-Trp-Leu-COOH 按照步骤(2)中①的方法，向 2-chlorotrityl chloride resin 上连接 Fmoc-Leu-OH，得到Fmoc-Leu-2-CTC resin，再按照步骤(2)中②的方法向Fmoc-Leu-2-CTC resin上依次连接 Fomc-Trp-OH、Fmoc-Glu (otBu)-OH、Fmoc-1le-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg (pbf) -ΟΗλFomc-Val-OH,得到 Fmoc-Val-Arg (pbf) -Leu-Phe-1le-Glu (otBu) -Trp-Leu-2-CTC Resin,Fmoc-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-1le-Glu(otBu) -Trp-Leu-2-CTC Resin 按照步骤(2)中③的方法进行切割处理，得到Fmoc-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-1le-Glu(otBu)-Trp-Leu-COOH ；(4)合成 Fmoc-Met-Glu (otBu) -Glu (otBu) -Glu (otBu) -Ala-COOH 按照步骤(2)中①的方法，向 2-chlorotrityl chloride resin 上连接 Fomc-Ala-OH，得到Fmoc-Ala-2-CTC resin，再按照步骤(2)中②的方法向Fmoc-Ala-2-CTC resin上依次连接 Fomc-Glu (otBu) -OH、Fmoc-Glu (otBu) -OH、Fmoc-Glu (otBu) -OH、Fomc-Met-ΟΗ,得到 Fmoc-Met-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-2-CTC Resin, Fmoc-Met-Glu(otBu)-Glu(οtBu)-Glu (otBu)-Ala-2-CTC Resin按照步骤(2)中③的方法进行切割处理，得到Fmoc-Met-Glu (otBu)-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Ala-COOH ；(5 )合成 Fmoc-Thr (tBu) -Ser (tBu) -Asp (otBu) -Leu-Ser (tBu) -Lys (Boc) -Gln (Trt) -COOH 按照步骤(2)中①的方法，向2-chlorotrityl chloride resin上连接Fomc-Gln(Trt)-OH,得到 Fmoc-Gln(Trt)-2-CTC resin,再按照步骤(2)中②的方法向 Fmoc-Gln (Trt) -2-CTC resin 上依次连接 Fomc-Lys (Boc)-OH、Fmoc-Ser (tBu)-0H、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asp (otBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -OH、Fomc-Thr (tBu) -OH,得到 Fmoc-Thr(tBu)-Ser (tBu)-Asp(otBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-2-CTC Resin, Fmoc-Thr(tBu) -Ser (tBu) -Asp (otBu) -Leu-Ser (tBu) -Lys (Boc) -Gln (Trt) -2-CTC Resin...

【专利技术属性】
技术研发人员：张忠旗，王慧，张腾，景山岗，韩彬，杨晓琳，
申请(专利权)人：陕西东大生化科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：