一种合成胸腺法新的方法技术

本发明专利技术涉及医药合成领域，公开了一种合成胸腺法新的方法。本发明专利技术所述方法按照胸腺法新肽链C端至N端的氨基酸顺序，合成1-8、9-19和20-28片段，然后再将这3个多肽片段偶联得到胸腺法新，本发明专利技术多个片段合成同时进行，合成周期减少了2/3，中间体易纯化，成本低，最终产品纯度高，副产物少，产品收率高，利于胸腺法新的大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及医药合成领域，公开了。本专利技术所述方法按照胸腺法新肽链C端至N端的氨基酸顺序，合成1-8、9-19和20-28片段，然后再将这3个多肽片段偶联得到胸腺法新，本专利技术多个片段合成同时进行，合成周期减少了2/3，中间体易纯化，成本低，最终产品纯度高，副产物少，产品收率高，利于胸腺法新的大规模生产。【专利说明】
本专利技术涉及医药合成领域，具体涉及。
技术介绍
胸腺法新(Thymosin α 1，也称胸腺肽α I)是胸腺素主要的生物活性成分，为体内重要的免疫调节物质，是N端乙酰化的28个氨基酸组成的多肽，其肽序如下:Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-1le-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-LyS-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-COOH本品治疗慢性乙型肝炎和增强免疫系统反应性的作用机制虽尚未完全阐明，但多项体外试验显示，本品通过刺激外周血液淋巴细胞丝裂原来促进T淋巴细胞的成熟，增加抗原或丝裂原激活后T细胞分泌的干扰素α、干扰素Y以及白介素2、白介素3等淋巴因子水平，同时增加T细胞表面淋巴因子受体水平。本品还可通过对CD4细胞的激活，增强异体和自体的人类混合淋巴细胞反应。本品可能增加前NK细胞的聚集，而干扰素可使其细胞毒性增强。体内试验显示，本品可以提高经刀豆蛋白A激活后小鼠淋巴细胞白介素2受体的表达水平，同时提高白介素2的分泌水平。目前胸腺法新制备工艺有基因工程法(如CN1431311)和固相合成法(如CN102199205)，其中基因工程法因工艺繁琐、三废多的不利因素不如固相合成法应用普遍。专利CN102199205公开了一种多肽胸腺法新的合成方法，其采用逐个偶联的合成方式。然而，用逐个偶联法在制备胸腺法新的过程中，合成周期长，杂质较多(在长肽的合成中容易产生缺省肽等杂质)，大部分杂质和目的`多肽相似导致后续的纯化难以进行，收率和纯度无法达到较高水平。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供，使得本专利技术所述方法能够提高其纯度和合成重量收率。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案:，包括以下步骤:步骤1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列在Lys侧链上、Glu侧链上偶联有保护基且在C端偶联有树脂的多肽树脂I ;固相合成在SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列N端、Ser侧链上、Glu侧链上、Thr侧链上、Lys侧链上、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段I ;固相合成在SEQ ID NO: 3所示氨基酸序列N端偶联有乙酰基、在Ser侧链上、Thr侧链上、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段2 ；步骤2、将多肽片段I的C段与多肽树脂I的N端进行偶联反应获得多肽树脂2 ；步骤3、脱去多肽树脂2的N端保护基并与多肽片段2的C段进行偶联反应获得多肽树脂3，加入裂解液去除多肽树脂3的树脂以及所有保护基得到胸腺法新粗品；步骤4、胸腺法新粗品微滤、RP-HPLC纯化后获得胸腺法新纯品。其中，作为优选，步骤2和步骤3所述偶联反应以HOBt/DIC双试剂偶联体系、 PyBOP/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系或HBTU/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系进行偶联。进一步优选地，步骤2所述偶联反应以HBTU/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系进行偶联，步骤3所述偶联反应以PyBOP/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系进行偶联；步骤2和步骤3所采用的偶联体系各偶联试剂之间的摩尔比优选为:PyBOP:HOBt:DIPEA 为 1:1:2, HBTU:HOBt:DIPEA % 1: 1:2，HOBt:DIC 为 1:1。作为优选，步骤3所述裂解液为体积比TFA:苯酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:水为 80-85:1-5:1-5:1-5:1-5 的混合裂解液。作为优选，步骤2和步骤3所述偶联反应以DCM、NMP, DMF、DMSO中的一种或两种以上为溶剂，其中，作为进一步优选方案，步骤2和步骤3均为体积比DMF:DMS0为1:1的混合溶剂。作为优选，步骤I所述固相合成多肽树脂I为:步骤Al、Fmoc-0-Asp (OtBu)-OH在偶联体系作用下与氨基树脂进行偶联反应得到 Fmoc- 3 -Asp (OtBu)-氨基树脂；步骤A2、脱除Fmoc保护基得到H-@ -Asp (OtBu) _氨基树脂，Fmoc-Glu (OtBu)-OH在偶联体系作用下与H-0 -Asp (OtBu)-氨基树脂进行偶联反应得到Fmoc-Glu (OtBu) - ^ -Asp (OtBu)-氨基树脂;步骤A3、按照SEQ ID NO:1所示氨基酸序列C端到N端的顺序，依次逐个将 Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Glu (OtBu) -OH、Fmoc-Glu (OtBu) -OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Val-OH、 Fmoc-Glu (OtBu)-OH、Fmoc-Lys (Boc)-OH按照步骤A2偶联方式进行氨基酸延伸偶联, 最后脱除 N 端 Fmoc 保护基得到 H-Lys (Boc) -Glu (OtBu) -Val-Val-Glu (OtBu) -Glu (OtBu) -Ala-Glu (OtBu)-^-Asp (OtBu)-氨基树脂，即多肽树脂 I ； 其中，所述Fmoc为氨基酸N端保护基，所述OtBu、Boc为氨基酸侧链保护基。在固相合成多肽树脂I的优选方案中，进一步优选地，所述氨基树脂为0.2-1.0mmol /g 的 Rink amide 树脂、Rink amide AM 树脂或 Rink amide MBHA 树脂；在固相合成多肽树脂I的优选方案中，进一步优选地，所述偶联体系为HOBt/DIC 双试剂偶联体系、PyBOP/HOBt双试剂偶联体系、HATU/H0AT双试剂偶联体系或TBTU/HOBt双试剂偶联体系，所采用的偶联体系各偶联试剂之间的摩尔比优选为:PyB0P:H0Bt 为 1: 1，TBTU:H0Bt 为 1: 1，H0Bt:DIC 为 1: 1，HATU:H0AT 为 1:1。在固相合成多肽树脂I的优选方案中，进一步优选地，所述偶联反应以DCM、NMP, DMF, DMSO中的一种或两种以上为溶剂，优选为体积比DCM =DMF为1:1的混合溶剂。作为优选，步骤I所述固相合成多肽片段I为:步骤B1、Fmoc-Lys (Boc)-0H在DIPEA作用下与2-CTC树脂进行偶联反应得到 Fmoc-Lys (Boc) -CTC 树脂；步骤B2、脱除 Fmoc 保护基得到 H-Lys (Boc)-CTC 树脂，Fmoc-Glu (OtBu)-OH 在偶联体系作用下与H-Lys (Boc)-CTC树脂进行偶联反应得到Fmoc-Glu (OtBu)-Lys (Boc)-CTC 树脂；步骤B3、按照SEQ ID N0:2所示氨基酸序列C端到N端的顺序，依次逐个将Fmoc-Lys (Boc) -OH> Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-Lys (Boc) -OH> Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Thr (tBu本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种合成胸腺法新的方法，其特征在于，包括以下步骤：?步骤1、固相合成在SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列在Lys侧链上、Glu侧链上偶联有保护基且在C端偶联有树脂的多肽树脂1；?固相合成在SEQ?ID?NO:2所示氨基酸序列N端、Ser侧链上、Glu侧链上、Thr侧链上、Lys侧链上、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段1；?固相合成在SEQ?ID?NO:3所示氨基酸序列N端偶联有乙酰基、在Ser侧链上、Thr侧链上、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段2；?步骤2、将多肽片段1的C段与多肽树脂1的N端进行偶联反应获得多肽树脂2；?步骤3、脱去多肽树脂2的N端保护基并与多肽片段2的C段进行偶联反应获得多肽树脂3，加入裂解液去除多肽树脂3的树脂以及所有保护基得到胸腺法新粗品；?步骤4、胸腺法新粗品微滤、RP?HPLC纯化后获得胸腺法新纯品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖庆，刘建，马亚平，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：