缀合的因子VIII分子制造技术

本发明专利技术涉及缀合的因子VIII分子。本发明专利技术涉及具有改变的循环半衰期的B-结构域截短的因子VIII分子，所述分子与亲水聚合物共价缀合。本发明专利技术此外涉及用于得到这种分子的方法以及这种分子的用途。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及缀合的因子VIII分子。本专利技术涉及具有改变的循环半衰期的B-结构域截短的因子VIII分子，所述分子与亲水聚合物共价缀合。本专利技术此外涉及用于得到这种分子的方法以及这种分子的用途。【专利说明】缀合的因子VI I I分子本申请是国际申请日为2009年2月26日的国际申请PCT/US2009/035339进入中国、申请号为200980106738.3的题为“缀合的因子VIII分子”的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及缀合的凝固因子VIII分子。具体地，本专利技术涉及具有改变的循环半衰期的缀合的因子VIII分子。
技术介绍
A型血友病是由凝固因子VIII (FVIII)活性的缺乏或功能障碍造成的一种遗传性出血障碍。临床表现不是在初级止血-正常形成血凝块-而是由于缺乏次级凝血酶形成所导致的凝块不稳定。通过静脉内注射从血液分离的或重组生产的凝固因子FVIII，治疗该疾病。流行的治疗推荐正在从传统的在要求时(on-demand)治疗转向预防。内源的FVIII的循环半衰期是12-14小时，因而每周需要进行几次预防性治疗，以使患者得到实际上无症状的生活。对于许多人，尤其是儿童和年轻人，静脉内施用伴有显著的不便和/或疼痛。因而本领域需要新颖的具有因子VIII活性的因子VIII产品，它们优选地在结构上是同质的，优选地是安全的，且优选地具有显著延长的循环半衰期，以减少每周施用因子VIII的次数。此外，本领域需要相对简单的得到和生产这种分子的方法。本领域已知，为了延长循环半衰期，向因子VIII加入聚乙二醇(PEGylation)。但是，这是得到具有同质结构以及显著提高的循环半衰期的安全产品的障碍。可得到的生产缀合的因子VIII分子的方法经常是费力的，和/或倾向于导致低得率和/或在结构上不同质的产品。在W02008011633中已经暗示了人工改造的0-联糖基化位点用于得到治疗蛋白的应用，所述治疗蛋白具有延长的治疗蛋白循环半衰期，但是，其中没有公开缀合的因子VIII分子。
技术实现思路
在第一个方面，本专利技术涉及具有改变的循环半衰期的B结构域截短的因子VIII分子，所述分子在截短的B结构域中通过0-联寡糖与亲水聚合物共价缀合，其中因子VIII激活导致共价缀合的侧基的去除。在其它方面，本专利技术另外涉及用于得到这种分子的方法，这种分子的用途和包含这种分子的药物组合物。因而，提供了具有改变的循环半衰期的缀合的因子VIII分子，其中缀合的侧基(例如亲水聚合物)在激活后去除。根据本专利技术的分子优选地在结构上-至少在亲水聚合物在截短的B结构域中的位置这方面-是同质的，且优选地具有有利的安全概况。同样，本文另外提供了相对简单的用于得到这种分子的方法。优选地，根据本专利技术的激活的因子VIII分子类似于内源激活的因子VIII。专利技术详述定义:因子VIII分子:FVIII/因子VIII是一种主要由肝细胞产生的大的、复杂的糖蛋白。FVIII由2351个氨基酸组成，包括信号肽，且含有几个根据同源性定义的不同结构域。存在3个A-结构域，I个独特的B-结构域和2个C-结构域。结构域次序可以列成NH2-A1-A2-B-A3-C1-C2-C00H。FVIII在血浆中作为在B-A3边界处分开的两条链进行循环。链通过二价金属离子结合进行连接。A1-A2-B链称作重链(HC)，而A3-C1-C2称作轻链(LC)。内源的因子VIII分子作为一群具有各种大小的B结构域的分子在体内循环。在体内可能发生的是，B结构域的逐渐酶促去除，从而产生一群具有各种大小的B结构域的分子。一般认为，随同凝血酶激活发生在位置740处的切割，由此去除B-结构域的最后一部分。但是，不能排除的是，其中例如在位置740的切割位点已经受损的因子VIII变体可能是有活性的。本文使用的“因子VIII”或“FVIII”是指一种人血浆糖蛋白，它是内在的凝固途径的一个成员，且是血液凝固所必需的。“天然的FVIII”是在SEQ ID N0.1 (氨基酸1-2332)中所示的全长人FVIII分子。B-结构域跨SEQ ID NOl中的氨基酸741-1648。SEQ ID NOl:ATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFPFNTSVVYKKTLFVEFTDHLFN1AKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASHPVSLHAV`GVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCHRKSVYWHVIGMGTTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNNGPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKNQASRPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNT⑶YYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNSRHPSTRQKQFNATTIPENDIEKTDPWFAHRTPMPKIQNVSSSDLLMLLRQSPTPHGLSLSDLQEAKYETFSDDPSPGAIDSNNSLSEMTHFRPQLHHSGDMVFTPESGLQLRLNEKLGTTAATELKKLDFKVSSTSNNLISTIPSDNLAAGTDNTSSLGPPSMPVHYDSQLDTTLFGKKSSPLTESGGPLSLSEENNDSKLLESGLMNSQESSWGKNVSSTESGRLFKGKRAHGPALLTKDNALFKVSISLLKTNKTSNNSATNRKTHIDGPSLLIENSPSVWQNILESDTEFKKVTPLIHDRMLMDKNATALRLNHMSNKTTSSKNMEMVQQKKEGPIPPDAQNPDMSFFKMLFLPESARWIQRTHGKNSLNSGQGPSPKQLVSLGPEKSVEGQNFLSEKNKVVVGKGEFTKDVGLKEMVFPSSRNLFLTNLDNLHENNTHNQEKKIQEEIEKKETLIQENVVLPQIHTVTGTKNFMKNLFLLSTRQNVEGSYDGAYAPVLQDFRSLNDSTNRTKKHTAHFSKKGEEENLEGL本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有改变的循环半衰期的B?结构域截短的因子VIII分子，所述分子在截短的B结构域中通过O?联寡糖与亲水聚合物共价缀合，其中(i)因子VIII激活导致共价缀合的亲水聚合物的去除。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：S德弗里斯，G博尔特，BBS范达尔，L蒂姆，HR斯特尼克，TD斯蒂恩斯特鲁普，
申请(专利权)人：诺沃—诺迪斯克有限公司，
类型：发明
国别省市：