本发明专利技术涉及多肽类药物的制备，尤其涉及一种抗肿瘤辅助用药胸腺五肽的制备方法。本发明专利技术的制备方法，包括以下步骤：氨基酸树脂PEG-wang树脂-Tyr(tbu)-OH和高吸水性树脂混合；将Fmoc-Val-OH先溶解于DCM/DMF溶液中，连同HOBt/DMF/DIC混合溶液加入到上述混合树脂中；依次用DMF、乙醇、DCM洗涤，完成Fmoc-Val-OH的连接；同法依次连接Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg-OH，连接后经TFA∶EDT∶水＝95∶3∶2的裂解试剂裂解，滤除树脂，滤液加入到无水乙醚中，待沉降后吸出上清液，沉淀物加入等体积纯化水，震荡后静置分层，水层用无水乙醚萃取洗涤后浓缩，浓缩液冻干即得胸腺五肽。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽类药物的制备，尤其涉及一种抗肿瘤辅助用药胸腺五肽的制备方法。
技术介绍
胸腺五肽(Thymopentin)，也称之为TP_5、胸腺喷丁，其结构式及多肽序列为权利要求1.，其特征在于，包括以下步骤步骤1，氨基酸树脂PEG-Wang树脂-Tyr (tbu) -OH和高吸水性树脂混合；步骤2，将Fmoc-Val-OH先溶解于DCM/DMF溶液中，连同HOBt/DMF/DIC混合溶液加入到上述混合树脂中；步骤3，依次用DMF、乙醇、DCM洗涤，完成Fmoc-Val-OH的连接；步骤 4，同法依次连接 Fmoc-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-Lys (Boc) -OH、Fmoc-Arg-ΟΗ,连接后经TFA EDT 水=95 3 2的裂解试剂裂解，滤除树脂，滤液加入到无水乙醚中，待沉降后吸出上清液，沉淀物加入等体积纯化水，震荡后静置分层，水层用无水乙醚萃取洗涤后浓缩，浓缩液冻干即得胸腺五肽。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括将步骤4所得到的粗品胸腺五肽经过反相液相色谱法纯化得到胸腺五肽纯品的步骤。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1的方法如下取PEG-wang树脂-Tyr (tbu) -0H,加入到反应容器内，加入二甲基甲酰胺2000毫升洗涤1次，加入二甲基甲酰胺2000毫升浸泡60分钟，加入二氯甲烷2000毫升洗涤1次；加入2000毫升20%的六氢吡啶的二甲基甲酰胺溶液洗涤两次，每次5分钟，用1000毫升二甲基甲酰胺洗涤3次， 1000毫升乙醇洗涤2次，1000毫升二氯甲烷洗涤2次，再加入lg-lOOg，优选50g高吸水性树脂。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1中高吸水性树脂的用量为50g。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2的方法如下将240毫摩尔的 Fmoc-Val-OH先溶解于1000毫升体积比为0. 5 1 0. 125 1的二氯甲烷/ 二甲基甲酰胺混合溶剂中搅拌溶解，加入1-羟基苯骈三氮唑600毫摩尔、1000毫升二甲基甲酰胺搅拌后，再加入360毫摩尔的二异丙基碳二亚胺，搅拌反应10分钟后加入到树脂中，搅拌反应 1. 5小时。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤2中溶解Fmoc保护氨基酸的溶剂为体积比为11的二氯甲烷/二甲基甲酰胺。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3的方法如下用2000毫升二甲基甲酰胺洗涤3次，2000毫升乙醇洗涤2次，2000毫升二氯甲烷洗涤2次，完成Fmoc-Val-OH 的连接。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4的方法如下同法依次连接 Fmoc-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-Lys (Boc) -0H、Fmoc-Arg-ΟΗ,再用 2000 毫升甲醇洗涤 2 次，取出烘干，烘干后的肽树脂按每克肽树脂用2000毫升裂解试剂计算需配制的裂解试剂的总量， 按三氟乙酸乙二硫醇水=95 3 2的比例配制裂解试剂，将树脂悬浮于配制好的裂解试剂中，搅拌反应2小时，滤除树脂，滤液加入到无水乙醚中，待沉降后吸出上清液，加入与剩余体积相等的纯化水，振荡后静置分层，水层用无水乙醚萃取洗涤两次，浓缩后冷冻干燥，得胸腺五肽。9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1的PEG-wang树脂-Tyr (tbu) -OH是由以下方法制备的取PEG-wang树脂200毫摩尔，加入到反应容器内， 加入二甲基甲酰胺2000毫升洗涤1次，加入二甲基甲酰胺2000毫升浸泡60分钟，加入二氯甲烷2000毫升洗涤1次，取Fmoc-Tyr (tBu) -OH 600毫摩尔、1-羟基苯骈三氮唑600毫摩尔、DMAP 60毫摩尔，加入1000毫升二甲基甲酰胺搅拌溶解后加入720毫摩尔的二异丙基碳二亚胺，搅拌反应10分钟后加入到树脂中，搅拌反应3小时，反应完毕后用2000毫升二甲基甲酰胺洗涤3次，2000毫升甲醇洗涤1次，2000毫升二氯甲烷洗涤2次，2000毫升甲醇洗涤2次，取出烘干即得PEG-wang树脂-Tyr (tbu) -0H。10.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，纯化步骤如下将胸腺五肽粗品用适量纯化水溶解后作为上样的样品，通过以下色谱条件纯化 流动相A 0. 3% HAC，流动相B 乙腈，波长:225nm 洗脱梯度表如下11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤如下取PEG-wang树脂-Tyr (tbu) -0H，加入到反应容器内，加入二甲基甲酰胺2000毫升洗涤1次，加入二甲基甲酰胺2000毫升浸泡60分钟，加入二氯甲烷2000毫升洗涤1次， 加入2000毫升20%的六氢吡啶的二甲基甲酰胺溶液洗涤两次，每次5分钟，用1000毫升二甲基甲酰胺洗涤3次，1000毫升乙醇洗涤2次，1000毫升二氯甲烷洗涤2次，再加入 Ig-IOOg高吸水性树脂，将240毫摩尔的Fmoc-Val-OH先溶解于1000毫升体积比为0. 5 1 0.125 1的二氯甲烷/ 二甲基甲酰胺混合溶剂中搅拌溶解，加入1-羟基苯骈三氮唑 600毫摩尔、1000毫升二甲基甲酰胺搅拌后，再加入360毫摩尔的二异丙基碳二亚胺，搅拌反应10分钟后加入到树脂中，搅拌反应1. 5小时，用2000毫升二甲基甲酰胺洗涤3次，2000 毫升乙醇洗涤2次，2000毫升二氯甲烷洗涤2次，完成Fmoc-Val-OH的连接，同法依次连接 Fmoc-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-Lys (Boc) _0H、Fmoc-Arg-ΟΗ,再用 2000 毫升甲醇洗涤 2 次，取出烘干，烘干后的肽树脂按每克肽树脂用2000毫升裂解试剂计算需配制的裂解试剂的总量， 按三氟乙酸乙二硫醇水=95 3 2的比例配制裂解试剂，将树脂悬浮于配制好的裂解试剂中，搅拌反应2小时，滤除树脂，滤液加入到无水乙醚中，待沉降后吸出上清液，加入与剩余体积相等的纯化水，振荡后静置分层，水层用无水乙醚萃取洗涤两次，浓缩后冷冻干燥，得胸腺五肽粗品；其中，PEG-wang树脂-Tyr (tbu) -OH是由以下方法制备的取PEG_wang树脂200毫摩尔，加入到反应容器内，加入二甲基甲酰胺2000毫升洗涤1次，加入二甲基甲酰胺2000毫升浸泡60分钟，加入二氯甲烷2000毫升洗涤1次，取Fmoc-Tyr (tBu) -OH 600毫摩尔、1-羟基苯骈三氮唑600毫摩尔、DMAP 60毫摩尔，加入1000毫升二甲基甲酰胺搅拌溶解后，加入 720毫摩尔的二异丙基碳二亚胺，搅拌反应10分钟后加入到树脂中，搅拌反应3小时，反应完毕后用2000毫升二甲基甲酰胺洗涤3次，2000毫升甲醇洗涤1次，2000毫升二氯甲烷洗涤2次，2000毫升甲醇洗涤2次，取出烘干即得PEG-wang树脂-Tyr (tbu) -0H。12.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤如下 将胸腺五肽粗品用适量纯化水溶解后作为上样的样品，通过以下色谱条件纯化 流动相A 0. 3% HAC，流动相B 乙腈，波长:225nm 洗脱梯度表如下时间分钟流动相A%流动相B%09825上样98215982169644096441851550本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：崔学云，杨平，
申请(专利权)人：海南中和药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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