一种检测肺癌的液相芯片试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测肺癌的液相芯片试剂盒，包括包被微球，生物素标记的检测抗体，链霉亲和素-藻红蛋白，反应缓冲液和稀释缓冲液，所述包被微球包括包被CRP捕获抗体的微球、包被Prolactin捕获抗体的微球、包被CEA捕获抗体的微球、包被NSE捕获抗体的微球、包被CK19捕获抗体的微球、包被Axl捕获抗体的微球和包被ADAM8捕获抗体的微球中的至少两种，其中包被不同捕获抗体的微球具有不同的颜色编码；所述检测抗体与捕获抗体相对应。本发明专利技术的液相芯片试剂盒的敏感度、准确度高，检测快速，稳定性好，成本低廉。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种检测肺癌的液相芯片试剂盒，包括包被微球，生物素标记的检测抗体，链霉亲和素-藻红蛋白，反应缓冲液和稀释缓冲液，所述包被微球包括包被CRP捕获抗体的微球、包被Prolactin捕获抗体的微球、包被CEA捕获抗体的微球、包被NSE捕获抗体的微球、包被CK19捕获抗体的微球、包被Axl捕获抗体的微球和包被ADAM8捕获抗体的微球中的至少两种，其中包被不同捕获抗体的微球具有不同的颜色编码；所述检测抗体与捕获抗体相对应。本专利技术的液相芯片试剂盒的敏感度、准确度高，检测快速，稳定性好，成本低廉。【专利说明】一种检测肺癌的液相芯片试剂盒
本专利技术涉及医药生物领域，尤其涉及一种检测肺癌的液相芯片试剂盒。
技术介绍
近年来，我国癌症的发生率呈明显上升趋势，占死亡原因的20%以上，居各类死因之首。世界卫生组织预测，到2020年，将有2000万新发癌症病例，其中死亡人数达1200万，且绝大多数发生在发展中国家。如果不采取任何有效的预防与控制措施，预计到2020年，我国每年的新发生癌症总数和癌症死亡总数将达300万左右，患病总数将达660万。肺癌目前是全球范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。近20年来，由于大力推行戒烟，欧洲和美国等西方国家男性肺癌的发病率已开始下降，但女性肺癌的发病率却持续上升。我国是香烟生产和销售大国，不论男性还是女性，肺癌的发病率均呈持续上升趋势，尤以女性发病率上升更快。临床研究表明，原位癌治愈率接近100%，I期肺癌患者的5年生存率达60%?90%，而IIIb和IV期患者的5年生存率仅5%?20%，因此，早期诊断早期发现，早期治疗是降低肺癌死亡率，延长生存期的关键。然而，由于缺乏理想的早期诊断方法，肺癌的早期诊断率仅14%左右。因此，如何提高肺癌早期诊断水平已成为肺癌防治工作者面临的严肃而紧迫的任务。至今，对肺癌的检测仍依赖于CT、MR、PET等影像检测仪器，但实际上这些影像手段一般只能发现l_2cm以上的肿瘤，而肿瘤从病变到生长至l-2cm，一般要经过2_5年甚至更长的时间，因此，癌症早期漏诊率高达80-90%。目前，早期诊断癌症的最新、最有效的方法是通过验血寻找肿瘤标志物，特别是其中的蛋白标志。所谓肿瘤标志物，指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞生物合成、释放或者是宿主对癌类反应性的一类物质，这类物质可能是循环物质，可在细胞、组织或体液中出现，人们能利用化学、免疫、分子生物学等技术对病人血液或分泌物定性或定量地检测。通过对这类物质的分析，为肿瘤的预测、诊断、治疗和转移等提供信息和决策依据。血清肿瘤标志物的测定方法主要有放射免疫分析、酶免疫分析、化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析等。然而，这些方法都是单指标的检测方法，而对肿瘤进行单一标志物的检测始终存在着特异性不强、灵敏度低等不足，导致对早期肿瘤的检出率不高，因此可能会造成部分患者漏诊。若想避免这种情况，则需要对每份标本进行多指标分析，不仅费用昂贵，而且需要的血清量较大。肺癌中常用的肿瘤标志物有神经元特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)以及前胃泌素释放肽(ProGRP)等。(I)神经特异性烯醇化酶(NSE):烯醇化酶是一种糖酵解酶，普遍存在于哺乳动物的组织中，以系列同工酶二聚体的形式存在(α α、α β、β β、和Y Y )。NSE为含Y亚基的同工酶，存在于神经内分泌细胞和神经源性肿瘤中(如小细胞肺癌、神经母细胞瘤、肠癌等)。小细胞肺癌(SCLC)是一种起源于神经内分泌细胞的肿瘤，因此NSE与SCLC关系密切，是小细胞肺癌的标记物。SCLC患者NSE阳性率约为60%?80%，非小细胞肺癌患者阳性率〈20%。因此，NSE有助于SCLC的诊断及其与NSCLC的鉴别诊断。NSE还是肺癌化疗效果观察和随访的有效指标，对化疗产生反应后此酶水平会下降，病情完全缓解后其可达正常水平。(2)细胞角蛋白19片段(CK19，Cyfra21_l):Cyfra21_l是分子量约30kDa的上皮细胞角蛋白的可溶性成分之一，是一种非常好的鉴别肺良恶性疾病的标志物，尤其对肺鳞癌的检测效果更好。Cyfra21-1是相对较新的肿瘤标志物，临床上采用夹心酶联免疫吸附法，联合应用两种特异性单克隆抗体(ksl9.1和bml9.21)检测血清中的细胞角蛋白19片段。Cyfra21-1存在于上皮起源的肿瘤细胞的胞浆中，当肿瘤细胞坏死后，可释放到血清中。免疫组织化学研究表明，肺癌中富含细胞角蛋白19片段，Cyfra21-1是NSCLC最灵敏的肿瘤标志物。因为Cyfra21-1只代表细胞角蛋白19 一个片段，因此Cyfra21_l比组织多肽抗原(TPA)具有更高的特异性。研究表明，Cyfra21-1在肺鳞癌中的阳性率可高达80%，而且对肺癌的诊断有较高的特异性，它在肺良性疾病和健康人群血中的浓度很低，与性别、年龄以及吸烟习惯无关。Cyfra21-1的敏感性与肿瘤的组织学类型存在着一定的相关性，如肺鳞癌的敏感性为最高达76.5%、腺癌为47.8%、小细胞肺癌仅为42.1%。血清中Cyfra21_l的含量与肺鳞癌患者的病程呈正相关，根据肺癌的?m分期，I?IV期患者的敏感性分别为 60.0%,88.8%、80%和 100%。(3)前胃泌素释放肽(ProGRP) =ProGRP是一个相对稳定的激素胃泌素释放肽(GRP)的前体。人类的GRP主要存在于胃肠道、呼吸道以中枢神经系统中。一些研究认为，小细胞肺癌的肿瘤细胞释放GRP，并且GRP可能会刺激SCLC细胞生长。ProGRP作为SCLC的标志物，具有敏感性高(75.5%)、特异性强(97%)的特点。ProGRP水平和治疗反应也有较好的相关性，治疗后肿瘤完全消失的病人，ProGRP降至正常值范围，甚至测不出来长达一个月以上。国内外的研究表明，ProGRP对小细胞肺癌检测的敏感性、特异性和可靠性方面均优于NSE，敏感性和特异性高，阳性预测值和阴性预测值在90%以上，对局限期病变的阳性率也比NSE高，一定程度上提高了早期诊断可能性，而且对化疗后反应、疗效的评价、病程中病情监测和预后判定都提供了有价值的信息。(4)癌胚抗原(CEA):CEA是一种存在于多种肿瘤细胞中的肿瘤抗原，肺癌细胞能直接产生CEA。CEA是最早发现的肺癌肿瘤标志物，也是目前肺癌诊断中最具代表性的肿瘤标志物，在腺癌与鳞癌中升高较明显。原发性肺癌患者血清CEA水平明显升高，对肺癌的诊断阳性率为40%?60%，特别在肺腺癌中，阳性率及特异性较高。另外，CEA在肺癌早期的病人中阳性率较低，在肿瘤中晚期才有较显著的升高，因此CEA水平的动态变化能较好的反映患者对治疗的反应和预后。(5)CRP(C反应蛋白):CRP作为一种急性时相蛋白，受年龄、免疫状况、药物等因素影响较小，其对临床各种急、慢性感染，组织损伤等疾病的诊断、疗效观察及预后判断的意义已被人们所认识。目前，其在肿瘤方面的运用亦越来越受到重视。研究表明，在肿瘤组织存在时CRP明显升高，可达正常时的10?100倍。癌症患者血清CRP水平增高可能是由于癌症患者血清肿瘤坏死因子和IL-6水平增高直接刺激肝脏合成CRP所致。国内外报道肺癌患者血清CRP水本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测肺癌的液相芯片试剂盒，包括包被微球，生物素标记的检测抗体，链霉亲和素?藻红蛋白，反应缓冲液和稀释缓冲液，其特征在于，所述包被微球包括包被CRP捕获抗体的微球、包被Prolactin捕获抗体的微球、包被CEA捕获抗体的微球、包被NSE捕获抗体的微球、包被CK19捕获抗体的微球、包被Axl捕获抗体的微球和包被ADAM8捕获抗体的微球中的至少两种，其中包被不同捕获抗体的微球具有不同的颜色编码；所述检测抗体包括CRP检测抗体、Prolactin检测抗体、CEA检测抗体、NSE检测抗体、CK19检测抗体、Axl检测抗体和ADAM8检测抗体中的至少两种，且与捕获抗体相对应。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王孝举，马胜林，吴国君，王闻哲，夏冰，陈雪琴，
申请(专利权)人：浙江省医学科学院，杭州市第一人民医院，横店集团家园化工有限公司，
类型：发明
国别省市：