一种具有生理活性和营养增补功能的植物蛋白衍生物的制备方法技术

一种具有生理活性和营养增补功能的植物蛋白衍生物的制备方法，属于植物蛋白深加工领域。本发明专利技术是以植物蛋白为原料，通过酶水解，二硫键还原，生化分离等过程，其产品为植物蛋白酶水解产物，半胱氨酸残基肽段是其重要成分。本发明专利技术利用丰富的含有半胱氨酸的植物蛋白资源，进行酶解并获得具有生理活性和营养增补功能的植物蛋白衍生物具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种具有生理活性和营养增补功能的植物蛋白衍生物的制备方法，其特征在于以植物蛋白为原料，通过酶水解，二硫键还原，生化分离过程，获得富含半胱氨酸残基肽段的产品；步骤为：（1）植物蛋白原料的前处理：质量分数5%的植物蛋白搅拌溶解得到均匀的植物蛋白溶液，然后进行加热处理或者酸处理，加热温度在植物蛋白变性温度以上；使处理后蛋白质变性程度不低于90%；处理后植物蛋白原料中二硫键交联蛋白质聚合物含量不大于5%；处理后植物蛋白原料中蛋白质总巯基含量降低程度不大于5%；植物蛋白原料为大豆球蛋白时，蛋白质溶液80℃加热20min；但植物蛋白原料不限于大豆球蛋白；（2）植物蛋白在蛋白酶作用下进行水解：通过级联方式用多种酶对蛋白质进行水解：a、酶水解的起始pH为中性或微碱性，首先采用中性或碱性蛋白酶进行水解；b、中性或碱性蛋白酶水解以后，调节pH为酸性，加入酸性蛋白酶继续水解；水解过程结束时的水解度为大于20%；步骤（1）处理后的质量浓度5%植物蛋白溶液，循环水浴控制温度60℃，精密pH计控制pH?8.0±0.1，水解过程中通过滴加0.5M?NaOH溶液来维持pH恒定，用质量浓度3%碱性蛋白酶水解3h；碱性蛋白酶酶解后继续进行胃蛋白酶酶解，调节pH?2.0，精密pH计控制pH?2.0±0.1，水解过程中通过滴加0.5M盐酸溶液来维持pH恒定，循环水浴控制温度37℃，用质量浓度2%胃蛋白酶水解2h；3000?5000g冷冻离心10?20min，获得上清液，即得所需的植物蛋白的酶水解产物；pH?Stat法监测水解过程结束水解度控制为20%；（3）植物蛋白酶水解产物中二硫键的还原：采用化学法，物理法，以及酶法中的一种或一种以上方法的组合；二硫键通过化学法还原时，使用不含巯基的化学还原剂；包括但不限于硼氢化钠、三（2?羧乙基）膦盐酸盐TECP、固定化三（2?羧乙基）膦盐酸盐二硫键还原胶及硫氧还蛋白还原酶；由30%?BH溶于1M?氢氧化钠溶液中制得硼氢化钠，在步骤（2）所得水解产物中加入硼氢化钠至终浓度为1M，加入2滴辛醇消泡，50℃反应30min，加入浓盐酸至pH?2终止反应并除掉过量的硼氢化钠并使体系处于较低pH状态，防止巯基氧化；采用4,4“?二硫二吡啶法，对巯基进行定量测定，检测还原效果，游离巯基占总巯基的比例大于95%；（4）?植物蛋白酶水解产物的分离纯化：步骤（3）所得酶解物的分离纯化采用以下所列方法中的一种或者一种以上方法的组合：包括膜分离、离子交换层析、吸附层析、以及亲和层析；a.采用膜分离，得到分子量范围200?1000Da，巯基含量为150?200微摩尔/克的产品；b.采用膜分离和离子交换，得到分子量范围500?1000Da，巯基含量为250?300?微摩尔/克的产品；c.?采用膜分离、离子交换和吸附层析，得到分子量范围500?1000Da，巯基含量为400?600?微摩尔/克的产品；d.?采用膜分离、离子交换、吸附层析和亲和层析，得到分子量范围500?1000Da，巯基含量为1600?2000?微摩尔/克的产品。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：华欲飞，孔祥珍，王金艳，丁秀臻，张彩猛，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：