【技术实现步骤摘要】
本专利技术设涉及一种利用环介导等温扩增技术进行菌样的快速检测的方法，具体是一种鹰嘴豆壳二孢叶枯病病原菌Ascochyta rabiei的环介导等温扩增快速检测方法。
技术介绍
鹰嘴豆壳二孢叶枯病由鹰嘴豆壳二孢叶枯病病原菌Ascochyta rabiei引起,是一种毁灭性的病害。1911年，鹰嘴豆壳二孢叶枯病在巴基斯坦被首次发现，该病害的危害性很高，在鹰嘴豆的重要种植区巴基斯坦，年受害面积高达25-50%。冷凉的气候非常适合病害发展，常造成100%的产量损失。2007年，该病害在新疆北部的鹰嘴豆主栽区昌吉州木垒县、奇台县等地暴发，其中仅在木垒县发病面积为4000hm2，平均为害株率46%，严重田块为害株率达到100%，产量损失率为40% -50%。该病害主要危害叶片、叶柄、茎杆，也可侵染幼嫩的荚果。叶片被害后由叶缘向内扩散，形成“U”形或“V”形浅褐色至深褐色病斑，潮湿时病斑上产生分散的细小黑点，叶柄和茎杆受害初期产生水浸状病斑，随后病斑逐渐变为深褐色，病斑处凹陷并逐渐萎蔫干枯造成落叶断枝，严重时整株枯萎死亡。豆荚受害初期产生水浸状病斑，然后变成深褐色病斑，严重时...
【技术保护点】
一种鹰嘴豆壳二孢叶枯病环介导等温扩增快速检测方法，其特征在于按下列步骤进行：a、待检样品或真菌的DNA提取：采用常规真菌DNA提取方法提取待检样品核酸，其中提取样品DNA的OD260/OD280为1.6?2.0，浓度为10?100ng/μL；b、进行鹰嘴豆壳二孢叶枯病真菌的环介导等温扩增反应：在装有22μL环介导等温扩增反应液的反应管中加入2μL待检样品模板DNA和1μL?Bst?DNA聚合酶，于恒温65℃扩增反应30?60min，将温度调到80℃终止反应，3?5min后取出待检；c、显色检测：在每个反应管中加入1μL显色剂，直接用肉眼观察颜色变化，反应液颜色变为绿色，即为...
【技术特征摘要】
1.一种鹰嘴豆壳二孢叶枯病环介导等温扩增快速检测方法，其特征在于按下列步骤进行: a、待检样品或真菌的DNA提取: 采用常规真菌DNA提取方法提取待检样品核酸，其中提取样品DNA的OD26(i/OD28Q为1.6-2.0，浓度为 IO-1OOng/ μ L ； b、进行鹰嘴豆壳二孢叶枯病真菌的环介导等温扩增反应: 在装有22 μ L环介导等温扩增反应液的反应管中加入2 μ L待检样品模板DNA和I μ LBst DNA聚合酶，于恒温65°C扩增反应30-60min，将温度调到80°C终止反应，3-5min后取出待检； C、显色检测:在每个反应管中加入IuL显色剂，直接用肉眼观察颜色变化，反应液颜色变为绿色，即为待检样品中含有或为鹰嘴豆壳二孢叶枯病真菌。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b中环介导等温扩增反应液是由IOXThermopol反应缓冲液、1.0-1.4mmol/L脱氧核酸三磷酸基质、4-8mmol/L硫酸镁、 0.8-1.6ymol/L上游内引物FIP、0.8-1.6 μ mol/L下游内引物ΒΙΡ、0.2_0.3 μ mol/L上游外引物 F3、0.2-0.3 μ mol/L 下游外引物 B3、0.2-0.8 μ mol/L 上游环引物 LF 和 0.2-0.8ymol/L下游环引物LB组成，其中: 上游外引物 F3:5’ -CTTGGTATTCCATG...
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