一种基于VIGS系统在油桐中研究杨树功能基因的方法技术方案

本发明专利技术属于植物基因工程技术领域，涉及一种基于VIGS系统在油桐中研究杨树功能基因的方法。本发明专利技术要解决的技术问题是提供一种简单、高效、低成本研究杨树功能基因的新方法。本发明专利技术的技术方案是一种基于VIGS系统在油桐中研究杨树功能基因的方法，包括如下步骤：a、构建载体；b、转化；c、转入油桐；d、检测。本方法简单高效，成本低廉，适合大规模筛选杨树基因的功能。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物基因工程
，涉及一种基于VIGS系统在油桐中研究杨树功能基因的方法。
技术介绍
杨树(Populus spp.)是世界范围内种植最为广泛的一种速生树木。在理想条件下，杨树大约4年即可成材，是重要的建筑用材和造纸原料，同时还可作为可再生能源的原料。毛果杨的基因组测序已经于2006年完成(Tuskan et al.，2006),杨树基因组包含45000个蛋白编码基因，并且其中大约12%的基因不能够在模式植物拟南芥中找到同源基因。因此，找到快速而有效的方法阐明这些基因的功能意义重大。近年来，研究植物基因功能的方法主要是通过根癌农杆菌介导的遗传转化产生稳定表达的转基因植株，然而这种方法由于周期较长，只适应于小部分基因，并且在后期鉴定转基因阳性是需要鉴定大量植株才能得到阳性株系(Takata.，2012)，获得的转基因植株往往含有一个至多个拷贝的外源基因(Spielmann et al.，1986)。现已证明，多拷贝数的外源基因在转录翻译过程中存在基因沉默的现象，导致其表达不稳定(Lechtenberg etal.，2003)。与稳定表达的方法研究基因功能相比，农杆菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于VIGS系统在油桐中研究杨树功能基因的方法，其特征在于：包括如下步骤：a、构建载体：扩增杨树待研究基因片段，与TRV2病毒载体相连接，转化农杆菌GV3101；b、转化：将转后的阳性农杆菌菌液与TRV1菌液按菌体质量比1︰1混合；c、转入油桐：通过注射的方法将混合菌液接种在2～3周大的油桐幼苗嫩叶上，看到叶肉组织中有菌液的扩散即可；d、检测：大约2～3周后，观察注射叶片之上新长出的油桐叶片的表型变化，并检测叶片中TRV病毒的衣壳蛋白基因和转移蛋白基因，检测油桐中被沉默基因的表达情况，最后检测被沉默基因的产物含量，反映基因沉默的程度，最后确定待研究杨树基因的功能。

【技术特征摘要】
1.一种基于VIGS系统在油桐中研究杨树功能基因的方法，其特征在于:包括如下步骤: a、构建载体:扩增杨树待研究基因片段，与TRV2病毒载体相连接，转化农杆菌GV3101 ； b、转化:将转后的阳性农杆菌菌液与TRVl菌液按菌体质量比1:1混合； C、转入油桐:通过注射的方法将混合菌液接种...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜渊忠，罗克明，叶胜龙，段艳娇，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：