丙型肝炎病毒嵌合复制子及其构建方法技术

本发明专利技术提供了一种丙型肝炎病毒嵌合复制子及其构建方法，丙型肝炎病毒嵌合复制子是丙型肝炎病毒基因型2a和基因型3a与非结构蛋白5b的嵌合复制子，命名为HCV?GT2a/GT3a-NS5b。其构建方法是以pRep-JFH-1为基础，并替换其NS5B的基因为GT3a?NS5B的基因从而得到NS5B嵌合复制子。本发明专利技术丙型肝炎病毒嵌合复制子与现有以GT1b为骨架的嵌合复制子相比，本发明专利技术的嵌合复制子瞬时转染的效率高，不需通过构建稳定细胞株来提高复制子的复制效率，为将来构建更多的HCV临床样品嵌合复制子提供了快速的技术路线。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物技术，特别涉及一种。
技术介绍
流行病学报道显示，全球约有1.7亿人感染了丙型肝炎(HCV)。HCV感染人体后能长期潜伏，并至肝硬化和肝癌。根据不同的基因型，HCV分为la，lb, 2a，2b, 2c, 3a，4a，5a，6a等亚型，其中，基因型I (GTla/lb)占临床感染亚型的74%，基因型2和3占临床感染亚型的22%，基因型4/5/6占临床感染亚型的4%。在中国，临床分离的丙型肝炎主要为基因型1，2，3，其中以基因型GTlb和GT2a为主。人类在与丙型肝炎的斗争中，不断进行探索，研究新的治疗药物及预防性疫苗。但由于该病毒的多变性，导致迄今为止还没有开发出丙型肝炎疫苗。而临床治疗丙型肝炎的药物主要为α-干扰素和利巴韦林，但它们联合用药的效果仅为50%左右。正是由于该病毒的多变性，各制药公司将研发丙型肝炎的药物集中在其相对保守的病毒非结构区(NS区)，如2011年，美国FDA先后批准了 Vertex公司的Telaprevir和Merck公司的Boceprevir，用于治疗丙型肝炎病，这两个药物的靶点均为NS3。目前，还有多个临床试验药物针对的药物靶点为其他非结本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种丙型肝炎病毒嵌合复制子，是丙型肝炎病毒基因型2a和基因型3a与非结构蛋白5b的嵌合复制子，命名为HCV?GT2a/GT3a?NS5b，其DNA序列如SEQ?ID?NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种丙型肝炎病毒嵌合复制子，是丙型肝炎病毒基因型2a和基因型3a与非结构蛋白5b的嵌合复制子，命名为HCV GT2a/GT3a-NS5b，其DNA序列如SEQ ID N0.1所示。2.如权利要求1所述丙型肝炎病毒嵌合复制子的构建方法，其特征在于:包括以下步骤: A、首先合成长度为1773bp的DNA片段pNZL5B，该DNA片段为GT3aNZLl株的NS5B基因，其次合成长度660bp的DNA片段pPar-NZL5B-JFH，该片段含有三部分:l_210bp为GT2aJFH-1 NS5A基因的C末端；211-417bp来自GT3a NS5B基因，其中前48个碱基对应GT3aNS5B的前48个碱基，包括NarI酶切位点，后159个碱基对应GT3a NS5B基因C末端的159个碱基，包括终止子和PflMI酶切位点；418-660bp为GT2a JFH-1 3UTR，限制性酶切酶RsrII和XbaI位点分别位于此660b...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈景才，江海清，李忠，张晓霁，张宏达，谈璐瑶，
申请(专利权)人：辉源生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：