本发明专利技术公开了一种miR-15a靶标位点序列及其在抑制乙型肝炎病毒复制中的应用，miR-15a通过靶定在该序列中的作用位点上来抑制人乙肝病毒的复制。该靶标作用位点的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。该靶标位点序列为医学领域中研发新的治疗因HBV病毒引发的一些相关疾病的抗病毒药物又提供了新的药物靶标和治疗方法。与此同时由于microRNA本身是由细胞自身表达产生的，所以相比较其他人工合成而非细胞自身合成的药物可能对细胞的毒害性小，效果好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学和抗病毒学的领域，具体涉及一种miR-15a靶标位点序列，本专利技术还涉及一种miR-15a靶标位点序列在制备抑制乙型肝炎病毒复制药物中的应用。本专利技术所述的分一种miR-15a靶标位点序列HBV基因组上，miR_15a可以通过直接靶定在该位点上来抑制的HBV复制。
技术介绍
乙型肝炎病毒(h印atitis B virus，HBV)是一种DNA病毒，大约由3200核苷酸组成的环形的部分双股的DNA分子。它的复制能够引起人急慢性肝炎，同时可能导致肝硬化和肝癌等发生。目前在全世界已有约6%是该病毒的携带者，所以说乙型肝炎病毒的持续感染已经成为全球性的健康问题。目前还没有一种有效的办法来治疗因乙型肝炎病毒的感染而导致的疾病。只能通过预防和控制。现在最可靠也很普遍的方法就是乙肝疫苗的接种。还有就是使用一些药物，例如:拉米夫定，还有中药等等。已有很多文献报道利用siRNA通过祀定在HBV genome上，(Ren JL, Pan JS, Cheng T, Dong J, Lu YP, Huang SJ, Shi HX, Wang L, Lian YM.RNAinterference inhibits hepatitis B virus gene expression and replication inHepG2-N10cells.Chin J Dig Dis.2006; 7 (4): 230-6.)可以抑制细胞内 HBV 的复制，也有文献报道人体内自身编码的microRNA也可以抑制HBV的复制，例如miR-199a_3p和miR-210可以分别靶定在HBV的HbsAg的编码区域和Pre-Sl区域来抑制HBV的复制等(Zhang GL, LiYX, Zheng SQ, Liu Μ, Li X, Tang H.Suppression of hepatitis B virus replication bymicroRNA-199a-3p and microRNA-210.Antiviral Res.2010Nov;88(2):169-75.2010Aug20.；Zhang GL, Li YX, Zheng SQ, Liu M, Li X, Tang H.miR-122_induced down-reguIation ofHO-1negatively affects miR-122_mediated suppression of HBV.Antiviral Res.2010Nov;88(2):169-75.2010Aug20.)。MicroRNAs (miRNAs)是一种大小约21 — 23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer加工后生成，不同于siRNA，但是和siRNA密切相关。据推测，这些非编码小分子RNAUiRNAs)参与调控基因表达，但其机制区别于siRNA介导的mRNA降解。第一个被确认的miRNA是在线虫中首次发现的lin_4和let-7，随后多个研究小组在包括人类、果蝇、植物等多种生物物种中鉴别出数百个miRNAs。现在研究有许多的miRNAs参与到一些癌症和重要疾病当中，并起到很重要的作用。目前一些研究发现miR_15a在一些重要的癌症及疾病中有很重要的作用，例如它的表达与慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)有关=B-CLL中常见的Bql4的缺失可导致miR15a 和 miR16a 的去表达；(Calin GA, Sevignani C,Dumitru CD, et a 1.Human micreRNAgenes are frequently located at fragile sites and genomic regions involved incancers [J].Proc Nail Acad Sci USA，2004，101 (9):2999_30o4.)同时也发现它通过调节基因Cdc25a的表达,从而影响肝肿囊的发生等。(Seung-Ok Lee, Tatyana Masyuk, PatrickSplinter, Jesiis M.Banales et al.MicroRNA15a modulates expression of thecell-cycle regulator Cdc25A and affects hepatic cystogenesis in a rat model ofpolycystic kidney disease.Clinical Investigation Nov2008, 118 (11): 3585)。因此本专利技术可能为治疗由HBV引发的肝炎等疾病提供新的治疗方法或药物靶标，这将会有很大重要的意义，同时也为研究生物学领域中研究microRNAs与HBV之间的相互作用的关系近一步的阐述。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供了一种miR_15a靶标位点序列，其核苷酸序列为SEQ IDN0.1所示。该序列位于HBV基因组，可受miR15a直接靶定由此来抑制HBV的复制。本专利技术还有一个目的是在于提供了一种miR_15a靶标位点序列在制备抑制乙型肝炎病毒复制药物中的应用。miR-15a通过靶定在HBV基因组的X蛋白中的该序列上，从而抑制X蛋白的表达，达到抑制HBV复制的目的。同时，miR-15a对乙型肝炎病毒复制的抑制，具有浓度依赖性。为了达到以上的目的，本专利技术采用以下技术措施:1.采用反义RNA技术,沉默miRNA’s pathway中的蛋白组分Ago2和Dicer之后，检测相关HBV的复制的指标，通过酶联免疫法检测HBV分泌的抗原HBsAg和HBeAg。knock-down Ago2 和 Dicer 的 siRNA 如下:si Ago2:5， -GCACGGAAGUCCAUCUGAATT-3’si Dicer:5，-UGCUUGAAGCAGCUCUGGA-3，。 荧光定量PCR结果显示Ago2和Dicer的敲除效果达到80%左右，同时通过酶联免疫法检测miciORNA效应蛋白AG02及其加工蛋白Dicer的敲低造成HBV病毒复制的增强，说明microRNA会抑制HBV的复制。2.将化学合成的 miR_15a mimic(miR_15a mimic inhibitor)和质粒 pCH9_3091,通过lipofectamine2000脂质体试剂转染进入到HepG2细胞中，经2_3天后,通过酶联免疫法检测HBV分泌的HBsAg和HBeAg。miR-15a mimic 的序列为:5，-uagcagcacauaaugguuugug-3，；miR-15a inhibitor 的序列为:5，-cacaaaccauuaugugcugcua-3。结果显示:高表达miR-15a，将会导致HBV的S抗原和E抗原的分泌降低，反之阻断miR-15a，将会导致HBV的S抗原和E抗原的分泌升高，说明miR_15a可以抑制HBV的复制，并具有浓度依赖性。3.预测miR_15a在HBV基因组上的靶标序列。采用生物学软件Target scan (Lewis et al.，2005)预测在HBV基因组上的mi本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种miR?15a靶标位点序列，其序列为SEQ?ID?NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种miR-15a祀标位点序列,其序列为SEQ ID N0.1所示。2.权利要求1所述的一种miR-15a靶标位点...
【专利技术属性】
技术研发人员：王艳玲，杨波，季雄，张翼，付向东，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：
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