肠道病毒71型感染性克隆及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种肠道病毒71型感染性克隆及其构建方法和应用。肠道病毒71型感染性克隆是以从肠道病毒71型毒株SZ2010-EV71提取的RNA为模板，经RT-PCR扩增得到全基因组序列，再与载体连接，酶切筛选阳性克隆而获得的。本发明专利技术仅用了一对引物，就扩增构建成功了感染性克隆，大大简化了EV71的反向遗传学操作步骤；获得的感染性克隆及其序列信息，为EV71的致病机理研究提供了一个有效的平台，可进行多个重要毒株或新毒株的全基因组序列获得及病毒特性分析，同时为EV71的抗病毒药物筛选平台的建立及疫苗的评估提供了重要基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，更具体地，本专利技术涉及肠道病毒71型感染性克隆及其构建方法和应用。
技术介绍
肠道病毒71型(EV71)病毒和柯萨奇病毒A16 (Coxsckie A16, CA16)是手足口病的主要病原，已在世界范围内引起多次暴发与流行，主要发病者为婴幼儿，严重危害儿童健康，CA16引起的症状轻微，而EV71的感染易引起无菌性脑膜炎、脑炎和脊髓灰质炎样的麻痹性疾病等多种与神经系统相关的疾病，易发生死亡。肠道病毒71型(EV71)属于小RNA病毒科(Picornaradae)肠道病毒属(Enterovirus)的成员，归属于人类肠道病毒A。根据我国卫生部的最近数据，2010和2011两个年度报道手足口病病例分别为1774669和1619706例，其中包括死亡病例905和509例。EV71抗体在成人血清中的阳性率达到65%以上，说明了这种病毒的广泛传播，每年春夏季温度升高时都会进入感染高峰期，流行趋势从散发逐渐趋于有小型聚集性爆发。然而，手足口病的相关科研工作比较薄弱，发达国家拥有较好的科研平台，亚太地区为主要流行区域，却对EV71的关注很少，至今在临床上还没有有效的疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肠道病毒71型感染性克隆的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、以从肠道病毒71型毒株SZ2010?EV71提取的RNA为模板，SEQ?ID?NO:2为引物，反转录得到cDNA；所述SZ2010?EV71的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:9所示；(2)、以步骤(1)得到的cDNA为模板，SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2为引物，PCR扩增得到肠道病毒71型的全基因组序列；(3)、将步骤(2)得到的肠道病毒71型的全基因组序列与载体连接，酶切，筛选得到阳性克隆，即为肠道病毒71型的感染性克隆。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗敏，张仁利，卢智刚，冼慧霞，
申请(专利权)人：深圳市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：