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一种能用于构建cDNA文库筛选的质粒载体的方法技术

技术编号:3935069 阅读:509 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种能用于构建cDNA文库构建筛选的质粒载体的方法,该方法制备的载体包含单酶切而产生两个不同粘末端的酶切位点Sfi?I,即可用于全长cDNA的定向克隆、文库构建和测序;同时插入基因与GAL4的激活域融合,是一个酵母表达载体,可作为酵母双杂交的筛选文库。本发明专利技术获得一个既可用于全长cDNA的定向克隆、文库构建、测序又能用于酵母双杂交的筛选文库的质粒pGADT7M。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种能用于构建cDNA文库构建筛选的质粒载体的方法,其特征在于,主要包括以下步骤:  (1)、将空载体pDNR-LIB的一个单克隆质粒,用NdeI和XhoI双酶切后,回收短片段;  (2)、将质粒pGADT7也用NdeI和XhoI双酶切后回收大片段;  (3)、这两个片段通过T4DNA连接酶连接、转化和测序鉴定,这个质粒载体就改造成了酵母双杂交文库的载体,为pGADT7M,这个载体上就含有两个SfiI酶切位点,以pGADT7为基础改造的,具备pGADT7所具备的用于细菌中复制、酵母中复制和表达,和酵母双杂交等所具备的元件:pUC ori,Ampr,2μ ori,LEU2,GAL4AD,PADH1,TADH1,SV40 NLS,HA Tag。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:彭迎春佘玮
申请(专利权)人:彭迎春
类型:发明
国别省市:43[中国|湖南]

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