本发明专利技术涉及淀粉样蛋白膜内片段在制备治疗阿尔茨海默病的药物中的应用，有效解决阿尔茨海默病的治疗问题，其解决的技术方案是，选取４２个氨基酸的淀粉样蛋白的氨基酸序列：ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡ中的膜内片段：ＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡ，使用时，由中科亚光生物有限公司对膜内片段：ＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡ进行人工合成，人工合成后的ＩＦ－Ａβ具有抑制Ａβ肽的聚集，加速Ａβ肽的降解与清除，对抗Ａβ４２的毒性，对体外培养神经元有保护作用，本发明专利技术可有效抑制Ａβ４２聚集，对体外培养神经元有保护作用，克服了外源性小分子抑制物特异性较差的弊端，从而为ＡＤ的治疗找到有效而且特异性强的良好的治疗药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学领域，特别是一种淀粉样蛋白膜内片段在制备治疗阿尔茨海默病 的药物中的应用。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种与年龄相关的神经退行性疾病， 最先由Alois Alzheimer于1906年发现并命名为Alzheimer。AD的一个重要病理特征是 大脑内淀粉样蛋白(amyloid-i3，Ai3)斑块的形成。大脑内Αβ的聚集是AD进程中一系列 病理级联反应的触发点。Αβ的前体蛋白定位于细胞膜，经过异常剪切后生成，其氨基酸组 成数目由39 43个不等，其中以42个氨基酸的Aβ神经毒性最强，命名为Aβ 42。目前对 AD的治疗旨在延缓认知衰退和改善与疾病有关的一系列临床症状。然而，这些药物仅仅限 于有限度的症状改善，而不能从根本上治疗AD。目前对于AD的治疗研究策略主要是从多渠 道减少大脑内Αβ的聚集，这些包括抑制APP代谢成A β、干扰A β的聚集以及增加Αβ的 清除。国内外学者在抑制A β肽的聚集方面做了大量的研究，抑制A β寡聚化的小分子 物质，包括一些小分子多肽，但是由于这些小分子的作用机制缺乏特异性，决定了其作用的 非特异性，从而造成一些副作用的发生，使其不适宜作为与A β相关的病症的治疗药物，故 改进和创新势在必行。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本专利技术之目的就是提供一种淀粉样蛋白膜 内片段在制备治疗阿尔茨海默病的药物中的应用，可有效解决阿尔茨海默病的治疗问题。本专利技术解决的技术方案是，选权42个氨基酸的淀粉样蛋白(amyloid-β，Aβ 42) 的氨基酸序列Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys151015Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala lie lie202530Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val lie Ala(氨基酸的三字母缩写)3540简称为DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(氨基酸的单字母缩 写)中的膜内片段(Intramembranous fragment of amyloid, IF-Aβ 片段)Ala lie lie Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val lie Ala1510简称为AIIGLMVGGVVIA，使用时，由中科亚光生物有限公司对膜内片段 八11611^66界认进行人工合成，人工合成后的正4 0具有抑制Αβ肽的聚集，加速Αβ肽的 降解与清除，对抗A β 42的毒性，对体外培养神经元有保护作用，可有效用于制备治疗阿尔 茨海默病的药物；所说的Αβ 42的氨基酸序列由北京博奥森生物公司出售。本专利技术可有效抑制Αβ 42聚集，对体外培养神经元有保护作用，克服了外源性小 分子抑制物特异性较差的弊端，从而为AD的治疗找到有效而且特异性强的良好的治疗药 物。具体实施例方式以下结合实际情况对本专利技术的具体实施方式作详细说明。选取42个氨基酸的淀粉样蛋白(amyloid-β，Αβ 42)的氨基酸序列DAEFRHDS GYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA 中的膜内片段(Intramembranous fragment of amyloid, IF-A β片段，简称IF_A3) :AIIGLMVGGVVIA，使用时，由中科亚光生物有限公 司对IF-Αβ片段进行人工合成，本专利技术中中请人只是用其人工合成后的IF-Αβ片段 AIIGLMVGGVVIA产品，对人工合成后的IF-A β进行检测，检测其对A β 42成纤维和神经毒性 的影响，具体步骤如下 1、材料与方法 1.1、材料 酶标仪荧光分光光度计 IF-A β (Α β 30-42) A β 42Neurobasal培养基，Β-27，谷氨酰胺 多聚-D-赖氨酸美国BioTek公司 日本TECHNE公司中科亚光生物有限公司 北京博奥森生物公司 美国Gibco公司 美国Sigma公司美国Amresco公司 四季青美国Chemicon公司 EMD biosciences, Germany 美国Biotium公司胰蛋白酶，噻唑蓝(MTT)胎牛血清兔抗NSE多克隆抗体硫磺素TFura-2/AM1.2、方法1. 2. 1、体外检测IF-A β的成纤维性750ymol/L IF-A β (PBS, pH 7. 3) 100 μ 1，37°C 分别孵育 1、2、3、4、5、6、7 天。它 们的成纤维性和同摩尔浓度的Aβ 42比较。参考Soto等和Sigurdsson等的方法，用硫磺 素T体外检测IF-Aβ的成纤维性。加入Iml的硫磺素T(3ymol/L in 50mmol/L sodium phosphate buffer, pH 6.0)后，用荧光分光光度计检测其荧光强度(excitation :450nm ； emission :482nm)。1.2.2, IF-A β对A β 42聚集作用的检测750ymol/L A β 42 (PBS, pH 7· 3) 50 μ mol/L加入 50 μ mol/L 750 μ M IF-A β (PBS, pH 7. 3)，37 °C 共同孵育一周，加入 Iml 的硫磺素 T (3 μ mol/L in 50mmol/Lsodium4phosphate buffer, pH 6.0)后用荧光分光光度计检测其荧光强度(excitation :450nm ； emission :482nm)。1. 2. 3大脑皮层神经元的分离培养取孕18d左右的昆明小鼠胎鼠，购自中南大学湘雅医学院动物学部 。无菌条件下分离出大脑皮层组织，0. 125%胰酶37°C消化IOmin, 分离所得细胞重悬于添加2% B-27和0. 5mmol/L谷氨酰胺的neurobasal培养基中，种植在 预先用多聚-D-赖氨酸(100yg/ml)包被过的培养瓶、多孔培养板或皿中，置37°C，5% CO2 细胞培养箱内培养。每2 3天换液一次。体外培养IOd后，用兔抗神经元特异性烯醇化 酶(Neuron Specific Enolase，NSE)多克隆抗体进行免疫细胞化学染色，进行神经元鉴定。1. 2. 4、MTT比色法检测IF-A β和A β 42对细胞活力的影响原代神经元培养的第8天，在96孔培养板中分别加入ΙΟμπιοΙ/L IF-Aβ , 10ymol/L A β 42、10 μ mol/L A β 42+10 μ mol/L IF-A β，对照孔不加任何干扰因素。继续 培养48小时后，加入MTT (终浓度为0. 5mg/ml)，于37°C孵育lh，弃上清，加入二甲基亚砜 (dimethl silfoxide，DMS0)，置酶标仪540nm处测定OD值。以正常组细胞活力为100 %， 实验组按以下公式计算细胞活力(％)=实验组OD值/对照组OD值X 100%。1.2. 5、IF_Ai3对细胞内游离钙离子浓度的影响具体过程如下①细胞悬液制备细胞干扰处理同1. 2. 4本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种淀粉样蛋白膜内片段在制备治疗阿尔茨海默病的药物中的应用，所说的淀粉样蛋白膜内片段是选取４２个氨基酸的淀粉样蛋白的氨基酸序列：ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡ中的膜内片段：ＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡ，使用时，再对膜内片段：ＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡ进行人工合成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张松江，邬力祥，高剑峰，尚立芝，王红伟，刘永，薛红，张文靖，王峰，
申请(专利权)人：河南中医学院，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]
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